任維超，劉 娜，李壽永，張振芳，練 森，李保華

（1 青島農業(yè)大學植物醫(yī)學學院，山東266109）（2 煙臺市蓬萊區(qū)大辛店鎮(zhèn)農業(yè)綜合服務中心）

近年來，山東省煙臺市套袋蘋果上發(fā)生1 種新病害，對果實外觀影響很大。該病于2013 年發(fā)病較為嚴重，2020 年再次大面積嚴重發(fā)病，煙臺產區(qū)絕大部分蘋果園都發(fā)現(xiàn)了此種病害，一般果園果實發(fā)病率在1%以下，個別果園病果率超過3%。目前，國內尚無該病的有關研究報道，為此作者對該病的病原進行了分離鑒定，并參考國外的有關資料，分析了病害的發(fā)病規(guī)律和條件，并提出防治建議。

1 病害癥狀

該病主要出現(xiàn)在摘袋后的果實上，為瘡痂狀或粗皮狀病斑（圖版1）。病斑圓形，規(guī)則，直徑5～20 mm，表皮木栓化，粗糙，黃褐色至黑褐斑，邊緣黑色，為病菌的菌絲層，部分病斑的中央隆起（圖版1）。病菌僅危害果實的表皮，影響外觀，果肉完好，果實品質不受影響。病果入庫后，病菌仍能生長擴展，在病斑外圍形成黑色環(huán)狀條帶，為病原菌在角質層下放射狀擴展形成的菌絲層。多數(shù)病果上1～2 個病斑，發(fā)病嚴重的果實上有幾十個病斑（圖版1）。

2 病原鑒定及病害命名

刮取病斑組織，能鏡檢到病菌的分生孢子（圖1-A）和分生孢子梗（圖1-B）。分生孢子淡褐色，橢圓形或卵圓形，瓜子狀或葫蘆狀，單胞或雙胞，內有油球，大小為4.1～6.2 μm×10.3～15.8 μm。分生孢子萌發(fā)從側面或頂端產生芽管。分生孢子梗叢生，暗褐色，無分枝，直立或彎曲，3.2～6.3 μm×25.0～47.0 μm。分生孢子梗芽生式產孢，合軸式延伸，分生孢子脫落后，留有孔狀孢子痕（圖1-B）。

圖1 蘋果痣狀瘡痂病分生孢子（A）和分生孢子梗（B）

挑取單個孢子，轉入馬鈴薯＋葡萄糖＋瓊脂培養(yǎng)基（PDA）上培養(yǎng)，30 d 后可形成灰黑色菌落。菌落圓形，邊緣灰白色，氣生菌絲短，絨毛狀（圖2-A）。病菌在培養(yǎng)基上生長速度緩慢，生長最快的菌株25 ℃下培養(yǎng)30 d，菌落直徑能達到1.5 cm（圖2-B）。

圖2 蘋果痣狀瘡痂?。╒.asperata）菌落

挑取單個孢子純化病原菌，以純化病菌的DNA為模板，利用ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCG G-3′）和ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）通用引物可以擴增出病菌的ITS 序列，序列長度為549 bp。將擴增出的序列在NCBI 數(shù)據(jù)庫中BLAST比對，發(fā)現(xiàn)擴增序列與國外報道病菌（Venturia asperata）的相似度高達99.6%。利用檢測V.asperata的特異性引物[1]，以從病斑表層組織中直接提取的DNA 為模板，在檢測的11 個病斑中都能擴增出特異性條帶（圖3）。根據(jù)病菌的ITS 序列、特異引物的擴增結果、孢子和孢子梗的形態(tài)，以及在果實上造成的癥狀，參照新西蘭、加拿大、法國和意大利的研究結果，初步確認該病由病原菌Venturia asperataSamuels&Sivanesan 侵染所致。

圖3 蘋果痣狀瘡痂?。╒.asperata）擴增出的特異性條帶

國外報道，V.asperata在蘋果果實上能引起非典型的瘡痂病癥狀（Atypical scab-like symptoms）[2]，而黑星病菌（Venturia inaequalis）在果實上誘發(fā)的癥狀屬于典型的瘡痂病癥狀。黑星病菌誘發(fā)瘡痂病的癥狀，木栓化組織厚，病斑凹陷，開裂，果實畸形。V.asperata所導致的瘡痂癥狀，木栓化層僅限表層組織，木栓化組織薄，似黑“痣”，隨果實生長開裂，不影響果實生長。根據(jù)V.asperata導致的瘡痂癥狀與蘋果黑星病菌所導致瘡痂癥狀的不同，可把“蘋果痣狀瘡痂病”作為其中文名稱，以區(qū)別于其他病害。目前，該病主要分布在煙臺蘋果產區(qū)的‘富士’品種上，套袋果實發(fā)病相對較重，海棠和‘嘎拉’果實上偶有發(fā)現(xiàn)。

3 發(fā)病規(guī)律及條件

V.asperata于1975 年首次在新西蘭報道。1973年，Samuels 和Sivanesan 在蘋果越冬病葉上檢查黑星病菌的子囊孢子時，發(fā)現(xiàn)1 種與蘋果黑星病菌子囊孢子形態(tài)不同的子囊孢子，并對其形態(tài)和分類地位進行研究，最終定名為V.asperataSamuels &Sivanesan[2]。1985 年，加拿大在蘋果落葉上也發(fā)現(xiàn)該種病菌[3]。V.asperata一直被認為是蘋果落葉上的一種腐生菌，直到2007 年Caffier 等在法國南部發(fā)現(xiàn)V.asperata能在蘋果果實上引起非典型的瘡痂病癥狀（Atypical scab-like symptoms）。在法國西南部，由V.asperata侵染所造成的果實發(fā)病率在不同果園差別很大，從10%到60%不等[1]。Caffier 等用V.asperata的分生孢子接種蘋果葉片和果實，都能侵染。病菌接種2 周后，幼嫩葉片上能觀察到產孢病斑，其面積占到整個葉面積的40%～50%，病斑沒有明顯的癥狀，只產生非常稀疏霉層。在果實上，病菌引起典型的痣狀瘡痂病斑。病菌能在蘋果落葉上越冬，越冬后能產生子囊孢子，在法國南部子囊孢子自3 月底開始釋放直到5 月底結束（初花后1個月）[1]。2018 年，意大利北部蘋果產區(qū)也發(fā)現(xiàn)了V.asperata在蘋果果實上引起的痣狀瘡痂病斑[4]。

目前，蘋果痣狀瘡痂病在我國的發(fā)病規(guī)律和條件尚不清楚。根據(jù)國外的研究結果，結合我國發(fā)病情況分析，在我國蘋果痣狀瘡痂病菌也應該在蘋果落葉上越冬，越冬后產生子囊孢子，在4—6 月幼果生長期遇雨后釋放，并隨氣流傳播侵染幼嫩果實和葉片。病菌侵染幼嫩的葉片后，雖沒有明顯的癥狀，但可產生分生孢子，分生孢子隨雨水傳播再侵染果實和葉片。果實在套袋前已被病菌侵染，但沒有表現(xiàn)出明顯的癥狀。5—6 月是痣狀瘡痂病菌侵染果實的主要時期，也是病害防治的關鍵時期。5—6月多雨的年份，可造成病菌的大量侵染，如2013年和2020 年。

4 蘋果痣狀瘡痂病的防控

根據(jù)V.asperata的生物學特性推測，痣狀瘡痂病雖不會像黑星病那樣在蘋果上形成嚴重危害，但在5—6 月多雨的年份，會導致大量果實受侵染。隨清園徹底清除果園內和周邊的落葉，5—6 月多雨年份可于降雨前或降雨后隨其他病害的防治噴施2～3 次殺菌劑，可有效地控制蘋果痣狀瘡痂病的危害。