唐英武，翟科峰，牛 影*

（1.宿州億帆藥業(yè)有限公司，安徽宿州 234000；2.宿州市天然產物與功能性食品工程技術研究中心，安徽宿州 234000；3.宿州學院，安徽宿州 234000）

婦陰康洗劑的產品處方由秦皮、魚腥草、苦參、仙鶴草、大青葉、紫花地丁6味藥材組成.以上諸藥材按一定比例混合均勻加水煎煮3 次、合并煎液，濾過，濾液濃縮至在60℃檢測的相對密度為1.12時，加乙醇4倍量，靜置24 h，濾過，濾液回收乙醇至60℃檢測的相對密度為1.14?1.18，加水稀釋至1000 mL，靜置24 h，取上清液，分裝，滅菌制得［1］.婦陰康洗劑具有清熱燥濕、除癢止帶的作用，常用于細菌性陰道病、滴蟲性陰道炎、念珠菌陰道炎等癥的治療，可顯著改善陰部瘙癢、疼痛、帶下量多、尿頻、尿急、尿痛等癥狀［2］.

目前婦陰康洗劑的生產工藝中仍存在一些亟待解決的問題，如在中藥提取工藝優(yōu)化前存在有效成分秦皮乙素轉化率低、制劑有效期內含量下降幅度較大及上市產品在貯存期內含量下降快等問題.中藥提取工藝是將中藥有效成分從藥材固相轉移到溶劑液相的傳質過程，影響轉移率的因素有提取加水量、煎煮次數、煎煮時間、煎煮溫度及提取溶媒的pH 等因素［3］.針對溶媒pH 的影響因素，本研究分別采用pH為5.7的純化水［4］和pH為7.3的飲用水［5］作為婦陰康洗劑中藥提取的溶媒并進行對比實驗，分析研究秦皮乙素在不同pH 溶媒的轉化率及提取濃縮液pH 值的變化情況，然后進一步分析制劑市售樣品在貯存期內有效成分的含量和pH 值的穩(wěn)定性，旨在為優(yōu)化提取工藝，提高婦陰康洗劑質量控制水平提供實驗依據.

1 實驗藥品、試劑與實驗儀器

1.1 實驗藥品與試劑

本實驗藥品及試劑主要有婦陰康洗劑，宿州億帆藥業(yè)有限公司；秦皮、魚腥草、苦參、仙鶴草、大青葉、紫花地丁，芍花堂國藥股份有限公司；乙醇，安徽安特食品股份有限公司；飲用水，宿州市自來水公司（GB5749?2006）；純化水是飲用水經過多介質過濾器、活性炭過濾器、軟化器、二級反滲透、純化水儲罐制備而成的［6］.秦皮乙素對照品（純度99.9%），中國食品藥品檢定研究院；乙腈（色譜純），美國天地有限公司；甲醇（色譜純），美國天地有限公司；磷酸（色譜純），阿拉丁試劑上海有限公司；乙酸乙酯（分析純），西隴科學股份有限公司；娃哈哈純凈水，杭州娃哈哈集團有限公司.

1.2 實驗儀器

實驗儀器包括MS105DU分析天平，梅特勒?托利多國際貿易（上海）有限公司；FE20 pH計，梅特勒?托利多國際貿易（上海）有限公司；LC?20AT高效液相色譜儀，島津企業(yè)管理（中國）有限公司.

2 實驗方法

2.1 生產樣品的制備

2.1.1 原生產工藝（pH為7.3飲用水溶媒）

分別稱取中藥材秦皮60.00 kg、魚腥草40.00 kg、苦參30.00 kg、仙鶴草30.00 kg、大青葉30.00 kg、紫花地丁50.00 kg投入提取罐中攪拌混勻，按料液比1∶10加入藥材總質量10倍質量pH為7.3的飲用水，煎煮1.5 h后，放出煎煮液，過濾；按料液比1∶8向藥材濾渣中加入藥材總質量8倍質量pH為7.3的飲用水，煎煮1 h，放出煎煮液；重復第二次煎煮操作，合并3次煎煮液，過濾，將濾液吸入雙效濃縮器中，控制蒸汽壓力≤0.2 MPa，真空度＞?0.08 MPa，溫度70～90℃，濃縮至在60℃檢測液體相對密度為1.12.將上述濃縮液加入醇沉罐中，放冷至室溫，按料液比1∶4邊攪拌邊緩慢加入乙醇，靜置沉淀24 h，取上清液、濾過，將上清液吸入真空濃縮罐，控制蒸汽壓力≤0.15 MPa，真空度＞?0.05MPa，溫度≤85℃，回收乙醇至無醇味，濃縮至在60℃檢測液體相對密度為1.14?1.18，在D級潔凈區(qū)收取濃縮液.依據上述工藝分別制備180101、180102兩批提取濃縮液樣品.

2.1.2 改進后的工藝（pH為5.7純化水溶媒）

采用“2.1.1”項下相同的工藝方法，分別稱取相同數量、同一批號上述6味藥材，按料液比1∶10加入藥材總質量10 倍質量pH 為5.7 的純化水，采用樣品制備方法“2.1.1”中所用提取、濃縮、醇沉設備，工藝參數、工藝條件順序均保持不變.分別制備181001、181002兩批提取濃縮液樣品.

2.2 樣品中秦皮乙素含量測定

2.2.1 色譜條件

以Inertil ODS?3 C18色譜柱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），柱溫40 ℃，以乙腈?0.025mol/L 磷酸溶液（8∶92）為流動相，檢測波長為350 nm［7］，理論塔板數按秦皮乙素峰計算，應不低于7000.

2.2.2 對照品溶液、對照品儲備液的制備、供試品溶液的制備

2.2.2.1 對照品儲備液制備

精密稱取秦皮乙素標準品16 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液.

2.2.2.2 對照品溶液制備

精密稱取秦皮乙素對照適量，加甲醇溶解，制成每1 mL含6μg的秦皮乙素標準品溶液，作為對照品溶液.

2.2.2.3 供試品溶液制備

精密量取裝量差異項下本品溶液1 mL 置分液漏斗中，加水10 mL，搖勻，加乙酸乙酯提取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，用水20 mL 洗滌，棄去水洗液.將乙酸乙酯液水浴蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，定量轉移至10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得.

3 結果與分析

3.1 色譜分離效果

分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀中，按“2.2.1”項下色譜條件測定，結果見圖1.由圖1可知，婦陰康洗劑供試樣品溶液與標準品中的秦皮乙素保留時間基本相同，供試品溶液色譜圖中各峰分離度較好，符合要求，說明該色譜圖方法對秦皮乙素具有較好的分離效果.

圖1 秦皮乙素對照品（A）和婦陰康洗劑樣品（B）HPLC色譜圖（1為秦皮乙素）

3.2 線性關系考察

精密量取“2.2.2”項標準儲備液0.2、0.5、1.0、1.5、1.8 mL 置于50 mL 量瓶中，以甲醇為溶劑稀釋至刻度，搖勻，精密吸取標準品梯度溶液各10μL，注入液相色譜儀，按“2.2.1”項色譜條件，每個梯度濃度重復3次，記錄色譜圖；以對照品進樣濃度（μg/mL）為橫坐標，以秦皮乙素峰面積為縱坐標，制作標準曲線，計算回歸方程及相關系［8?9］.結果，秦皮乙素在1.31～11.86μg/mL 時其濃度與峰面積呈良好線性關系，結果見表1.

表1 秦皮乙素對照品的線性關系考察結果線性

3.3 不同批次樣本檢測結果

對上述原生產工藝（pH 為7.3 飲用水溶媒）以及改進后的工藝（pH 為5.7 純化水溶媒）所制備的4 種不同編號的樣品濃縮液分別使用電子秤稱量提取重量.精密量取4 種不同編號的樣品各10 mL 于4 個不同的50 mL 容量瓶中，加入對應的溶劑稀釋至刻度.以高效液相色譜儀和pH 計按“2.2.1”項下色譜條件取上述稀釋后的樣品進樣10μL分別檢測4種不同的提取濃縮液含量和pH值，分析其差異情況.結果表明，改進工藝后的產品相較于原生產工藝的產品中秦皮乙素含量明顯增高，秦皮乙素轉化率調高近30%，結果見表2.由此表明，使用pH 為5.7 的純化水較pH 為7.3的飲用水提取秦皮藥材中的秦皮乙素效果更佳.

表2 不同批次樣本秦皮乙素含量以及pH的檢測

3.4 制劑樣品穩(wěn)定性考察

分別取生產批號為180101、181001 提取濃縮液加入液體配制罐，邊攪拌邊加入純化水定容至300 L，用NaOH 或HCl 調節(jié)配制液pH 至5.2，調整裝量后進行藥液灌裝，用10 kGy 輻照劑量γ射線進行滅菌，包裝成180126、181027（制劑批號）2 批市售樣品.依據《中華人民共和國藥典》2015 年四部通則9001 原料藥與制劑穩(wěn)定性試驗指導原則.對180126、181027 兩批樣品在溫度25±2℃，相對濕度60%±10%進行穩(wěn)定性考察［10］，對生產后的產品在0，6，12 個月依據“2.2.1”項下色譜條件進樣10μL檢測產品中秦皮乙素含量以及pH值.結果如圖2顯示，兩個批次樣品的秦皮乙素含量均隨著時間減少.生產后6 個月時間內，工藝改進前后秦皮乙素含量分別下降24%、3.8%；生產后12 個月內，工藝改進前后秦皮乙素含量分別下降40.4%、10.8%；二者pH 值（見表3）則基本沒有變化.由此可見，純水提取工藝更加適合秦皮乙素的保存.

表3 產品pH值變化

圖2 不同提取溶媒所對應生產制劑藥品穩(wěn)定性

4 討論

采用pH 為7.3 的飲用水提取婦陰康洗劑處方中的中藥材，秦皮中的活性成分秦皮乙素兩批的轉移率分別為33.97%和34.48%，pH 分別為6.3 和6.4 見表2，在制劑配制過程中需用HCl 調節(jié)pH 至5.2；采用pH 為5.7 的純化水提取婦陰康洗劑處方中的中藥材，秦皮中的活性成分秦皮乙素兩批的轉移率分別為66.51%和72.94%，pH 分別為5.0 和5.2.優(yōu)化工藝后采用pH 為5.7 的純化水提取秦皮乙素轉移率提高了30%以上，兩批提取濃縮液pH分別為5.0、5.2，制劑配制液pH為5.2，基本不需進行pH 調節(jié)，簡化了生產工藝.使用180101 和181001 兩批提取濃縮液制備成180126、181027 兩批市售樣品，依據2015 版藥典四部通則進行0，6，12 個月穩(wěn)定性考察、檢測分析，12 個月數據飲用水提取制備樣品含量下降40.4%，純化水提取制備樣品含量下降10.8%，兩批樣品含量下降速率相差29.5%，pH 值在考察期內無明顯變化見表3.綜上所述，通過調整提取溶劑，有助于提高產品質量的穩(wěn)定性，從而為企業(yè)生產提供重要理論和實踐基礎.

以pH 較低的純化水替代pH 較高的飲用水提取婦陰康洗劑處方中的中藥材，秦皮乙素轉化率能提高30%以上，用優(yōu)化提取工藝生產的市售樣品在貯存期內含量穩(wěn)定性較優(yōu)化前有較大提高.由此可見優(yōu)化后工藝既能提高產品收率，也能保證藥品質量穩(wěn)定性.