賀龍梅，馬燕粉，王曉倩，蔡曉輝，劉靜文，馬運(yùn)峰，王曉琴△

1.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安 710061；2.陜西省中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安 710082；3.中國(guó)人民解放軍空軍第九八六醫(yī)院兒科，陜西西安 710054；4.西安交通大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)系，陜西西安 710082

胰腺癌是一種高度惡性且進(jìn)展迅速的消化系統(tǒng)腫瘤，其5年生存率僅為5%。2020年美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，美國(guó)胰腺癌新發(fā)病例數(shù)位居男性惡性腫瘤的第10位，女性惡性腫瘤的第9位，病死率居惡性腫瘤的第3位[1]。中國(guó)國(guó)家癌癥中心最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)也顯示，胰腺癌發(fā)病率位居中國(guó)城市男性惡性腫瘤的第8位，胰腺癌死亡率居北京市和上海市人群惡性腫瘤死亡率的第6位[2]。雖然現(xiàn)有的影像學(xué)方法極大地提高了胰腺癌診斷的特異度和靈敏度，但是受胰腺解剖學(xué)和胰腺癌生物學(xué)特征的影響，胰腺癌患者早期臨床表現(xiàn)不典型，易侵犯周圍組織器官以及發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，多數(shù)患者確診時(shí)已屬晚期，僅有約20%的患者在確診時(shí)有接受根治性手術(shù)的機(jī)會(huì)[3-5]。血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)簡(jiǎn)單、快捷，已成為胰腺癌篩查的首選方法。目前胰腺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物有多種，但單一指標(biāo)檢測(cè)均具有一定的局限性。本研究旨在探討血清糖類抗原(CA)199、白細(xì)胞介素(IL)-10及殼多糖酶3樣蛋白1(CHI3L1)聯(lián)合檢測(cè)在胰腺癌臨床診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年9月至2019年2月西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的胰腺癌患者40例，將其作為胰腺癌組；另外，選取肺癌患者40例(肺癌組)作為其他腫瘤對(duì)照，胰腺炎患者40例(胰腺炎組)作為炎癥對(duì)照，西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院同期體檢健康者40例作為健康對(duì)照組。所有納入研究的患者均經(jīng)病理、實(shí)驗(yàn)室檢查或影像學(xué)檢查(超聲、CT和磁共振等)等手段確診。健康對(duì)照組人群經(jīng)體檢檢查(包括常規(guī)生化檢查、超聲檢查、心電圖、胸部X線片等)，排除有心臟、肝臟及腎臟等重要器官疾病者。各組間性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 胰腺癌組和各對(duì)照組一般資料比較(n=40，n)

1.2儀器與試劑 CA199的檢測(cè)采用羅氏E170電化學(xué)發(fā)光分析儀及其配套試劑；IL-10的檢測(cè)采用達(dá)優(yōu)生物技術(shù)有限公司IL-10檢測(cè)試劑盒；CHI3L1檢測(cè)采用杭州普望生物技術(shù)有限公司試劑盒；采用美國(guó)Thermo公司的超微量分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度(A)。

1.3方法 采集清晨空腹靜脈血5 mL于促凝管中，3 000 r/min離心10 min后分離血清，將血清分裝為3管，其中1管用于CA199的檢測(cè)，將另2管血清凍存于-80 ℃，直至所有標(biāo)本收集完畢。標(biāo)本收集完畢后于檢測(cè)當(dāng)日將凍存的血清取出置于室溫復(fù)融，充分混勻后嚴(yán)格按照試劑盒說明書采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)分別檢測(cè)IL-10和CHI3L1。用超微量分光光度計(jì)在450 nm處讀取A值。應(yīng)用軟件擬合最優(yōu)標(biāo)準(zhǔn)曲線，再輸入樣本A值計(jì)算相應(yīng)檢測(cè)指標(biāo)水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以M(P25～P75)表示，組間比較采用Kruskai-Wallis秩和檢驗(yàn)；采用Logistic回歸分析CA199、IL-10、CHI3L1水平對(duì)胰腺癌發(fā)生的影響;用Medcalc19.8軟件繪制各檢測(cè)指標(biāo)的受試者工作特征(ROC)曲線；利用多元Logistic回歸模型，由各指標(biāo)的線性組合計(jì)算預(yù)測(cè)概率P，然后用預(yù)測(cè)概率P計(jì)算聯(lián)合檢測(cè)的曲線下面積(AUC)[6]；分析AUC、靈敏度與特異度；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各組間血清CA199、IL-10、CHI3L1水平的比較 胰腺癌組血清CA199水平高于其他各組(P<0.05)；胰腺癌組IL-10水平高于胰腺炎組和健康對(duì)照組(P<0.05)；胰腺癌組CHI3L1水平高于肺癌組和健康對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 各組血清CA199、IL-10、CHI3L1水平比較[n=40,M(P25～P75)]

2.2各指標(biāo)水平對(duì)胰腺癌發(fā)生的影響 CA199、IL-10、CHI3L1是胰腺癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表3。

表3 Logistic回歸分析各指標(biāo)對(duì)胰腺癌發(fā)生的影響

2.3各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)用于胰腺癌診斷的效能 單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)中，CA199對(duì)胰腺癌的診斷特異度最高，為95.0%， AUC為0.908；IL-10對(duì)胰腺癌的診斷靈敏度最高，為87.5%，AUC為0.936；CHI3L1診斷胰腺癌的AUC為0.820。3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的特異度、靈敏度分別為97.5%、97.5%，AUC為0.996。CA199、IL-10、CHI3L1聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，AUC優(yōu)于CA199、IL-10、CHI3L1單獨(dú)檢測(cè)，見表4、圖1。

表4 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)CA199、IL-10、CHI3L1對(duì)胰腺癌的診斷效能分析

圖1 CA199、IL-10、CHI3L1單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)用于胰腺癌診斷的ROC曲線

3 討 論

胰腺癌是一種惡性程度很高，診療較為困難的消化道惡性腫瘤，是預(yù)后最差的惡性腫瘤之一，而其發(fā)病率和死亡率近年來明顯上升。胰腺癌的發(fā)生機(jī)制尚不十分清楚，但家族史、肥胖、吸煙、慢性胰腺炎及糖尿病史等都被認(rèn)為是胰腺癌的危險(xiǎn)因素。受胰腺解剖學(xué)和胰腺癌生物學(xué)特征的影響，胰腺癌患者早期無明顯臨床癥狀或癥狀較輕，當(dāng)有典型臨床表現(xiàn)時(shí)，疾病往往已進(jìn)展至中后期，80%的患者確診時(shí)已因腫瘤轉(zhuǎn)移或侵襲到胰外器官而無法行根治性切除術(shù)，75%的胰腺癌患者在確診后1年內(nèi)死亡，中位生存時(shí)間為4～6個(gè)月。早期診斷、早期治療能提高胰腺癌患者的5年生存率，延長(zhǎng)患者生存時(shí)間[7-8]。如何提高胰腺癌早期檢出率是當(dāng)前眾多臨床學(xué)者研究的重點(diǎn)。近年來，由于血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)具有準(zhǔn)確、快速、微量，患者痛苦小，接受度高等優(yōu)點(diǎn)，其作為新的診斷技術(shù)在胰腺癌的早期發(fā)現(xiàn)以及腫瘤的診斷、鑒別診斷與分期等方面的應(yīng)用有了進(jìn)一步的進(jìn)展。

CA199是一種存在于細(xì)胞膜上的糖蛋白，表達(dá)于健康人的正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞，通常以唾液黏蛋白存在于血清中，健康人血清中的水平相對(duì)較低[9]，是胰腺癌中最有效的生物標(biāo)志物和異常糖基化的指標(biāo)。CA199在胰腺癌中起著生物標(biāo)志物、預(yù)測(cè)因子和啟動(dòng)子的作用。作為一種生物標(biāo)志物，其面臨的主要挑戰(zhàn)在于炎癥和非胰腺癌所造成的假陽(yáng)性和Lewis陰性個(gè)體造成的假陰性。當(dāng)使用CA199作為生物標(biāo)志物時(shí)，應(yīng)確定Lewis抗原狀態(tài)[10-11]。本研究顯示，胰腺癌患者血清CA199水平顯著高于健康對(duì)照組和胰腺炎組，特異度為95.0%，靈敏度為80.0%，AUC為0.908。這與秦牛等[11]的研究報(bào)道一致。

IL-10是腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，可以維持腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，IL-10水平升高與某些癌癥有關(guān)，例如卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、骨髓瘤。值得注意的是，IL-10表達(dá)升高可能是由于多種原因引起的，其意義截然不同：IL-10可由腫瘤細(xì)胞自身表達(dá)，也可由參與宿主抗腫瘤反應(yīng)的活化細(xì)胞產(chǎn)生，它可能是一種有效的炎性反應(yīng)而不是免疫抑制指標(biāo)。在霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤中，IL-10血清水平升高被認(rèn)為是生存或治療反應(yīng)的影響因素；血清中可檢測(cè)到的IL-10也被認(rèn)為是肝細(xì)胞癌、肺癌、腎癌、胃癌或結(jié)直腸癌以及其他實(shí)體瘤臨床轉(zhuǎn)歸的陰性指標(biāo)；相反，在一項(xiàng)彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤的研究中，血清IL-10水平與預(yù)后無關(guān)[12]。綜上所述，IL-10在腫瘤及其預(yù)后中的作用尚不明確。迄今為止，國(guó)內(nèi)外關(guān)于IL-10在胰腺癌患者血清中的變化研究較少。本研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組患者血清IL-10水平顯著高于健康對(duì)照組和胰腺炎組，特異度為90.0%，靈敏度為87.5%，AUC為0.936，對(duì)胰腺癌具有較高的診斷價(jià)值。

CHI3L1是哺乳動(dòng)物殼多糖酶家族的成員，又稱為YKL-40。其在腫瘤中的生物學(xué)機(jī)制和生理功能尚未完全闡明,CHI3L1通過促炎、促腫瘤和促血管生成因子的生成而在癌癥中發(fā)揮作用,了解CHI3L1的生物學(xué)和生理學(xué)功能對(duì)于治療炎癥性疾病以及診斷與治療腫瘤至關(guān)重要[13]。隨著研究的不斷深入，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)血漿CHI3L1水平的增加與酒精性肝炎、胰腺損傷等疾病有關(guān)[14]。本課題組成員前期研究發(fā)現(xiàn)，CHI3L1與胰腺癌具有相關(guān)性,在胰腺癌中呈高表達(dá)，且與胰腺癌TNM分期顯著相關(guān)[15]。一直以來，胰腺癌發(fā)病的眾所周知的高危因素是胰腺炎，并且在遺傳性胰腺炎綜合征患者中，這種癌癥的終生風(fēng)險(xiǎn)可達(dá)到40%，與SPINK1和PRSS1的突變有關(guān)。這與本研究中CHI3L1血清水平在胰腺炎與胰腺癌患者中均高于健康體檢者的結(jié)果相一致。

本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，初步探討了CA199、IL-10、CHI3L1 3項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能。通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，CA199、IL-10、CHI3L1對(duì)胰腺癌患者均有一定的診斷價(jià)值，其中IL-10的診斷價(jià)值最大(AUC=0.936)。CA199、IL-10和CHI3L1在胰腺癌患者血清中呈高表達(dá)，IL-10和CHI3L1有望成為胰腺癌新的臨床診斷指標(biāo)。在胰腺癌患者中聯(lián)合檢測(cè)血清CA199、IL-10及CHI3L1水平具有較高的臨床診斷價(jià)值。下一步本課題組將擴(kuò)大樣本量，對(duì)IL-10和CHI3L1在胰腺癌中的作用機(jī)制進(jìn)行研究，以期進(jìn)一步地明確胰腺癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制。