周艷超，薛 坤，葛海燕，陳火英，劉 楊

(上海交通大學(xué) 農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海 200240)

櫻桃番茄俗稱小番茄，果實富含氨基酸、維生素和礦質(zhì)元素[1]。近年來，其消費量和種植規(guī)模逐年增加，新品種層出不窮。目前圍繞番茄的品質(zhì)改良已從環(huán)境調(diào)控[2-3]、轉(zhuǎn)基因[4]和QTL定位[5]等方面進(jìn)行了廣泛研究，而在番茄品質(zhì)評價和鑒定方面僅局限在品質(zhì)性狀與農(nóng)藝性狀的相關(guān)分析、綜合評價指標(biāo)的選擇和聚類分析闡明番茄資源的遺傳多樣性[6]。已有的評價體系大多基于模糊數(shù)學(xué)的隸屬函數(shù)法[7-8]，指標(biāo)權(quán)重的確定具有主觀性，然而鮮食櫻桃番茄的品質(zhì)一般包括外觀、風(fēng)味、口感、營養(yǎng)物質(zhì)等，其品質(zhì)優(yōu)劣的鑒定需要多指標(biāo)的綜合評價。主成分分析法是綜合評價的一種有效方法，它可將多個有一定相關(guān)性的變量轉(zhuǎn)化為幾個互不相關(guān)的綜合變量，其方差貢獻(xiàn)率可作為權(quán)重構(gòu)建可量化的綜合評價體系。張春嶺等[9]將標(biāo)準(zhǔn)化后的原15項品質(zhì)指標(biāo)值代入5個主成分表達(dá)式，再以主成分的方差貢獻(xiàn)率作為權(quán)重計算出桃汁的綜合主成分得分。湯兆星[10]也用此方法分析評價了19個釀酒葡萄，篩選出綜合得分最高的赤霞珠，其具有最佳的釀酒適宜性。本研究以29份櫻桃番茄雜交組合為試材，測定14項品質(zhì)相關(guān)指標(biāo)，通過因子分析結(jié)合聚類分析篩選評價指標(biāo)，綜合主成分分析得出綜合評價得分，用系統(tǒng)聚類分析和判別分析建立櫻桃番茄品質(zhì)判別函數(shù)模型。首次建立了櫻桃番茄的綜合評價體系，為櫻桃番茄品質(zhì)評價提供了新思路。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與采樣

29種櫻桃番茄雜交組合在2018年1—6月種植于上海市浦東新區(qū)富農(nóng)種業(yè)公司大棚。采用雙行區(qū)、隨機區(qū)組設(shè)計，設(shè)置3次重復(fù)。每個小區(qū)定植30株，株行距為35 cm×60 cm，氣候、立地條件、田間管理一致，確保了果實品質(zhì)間差異只來源于不同雜交組合間。供試材料性狀及來源如表1所示。每個雜交組合從3株材料選取同一成熟期果實進(jìn)行試驗。

1.2 方法

1.2.1 非組分指標(biāo)測定

單果重用電子天平測量，果實橫徑、縱徑、梗洼、果梗長度用游標(biāo)卡尺分別測定，重復(fù)5次取平均值。可溶性固形物用手持測糖儀測量，果實硬度用數(shù)字硬度計測定。

1.2.2 理化指標(biāo)測定

可溶性糖、可滴定酸分別采用蒽酮比色法、酸堿滴定法測定；抗壞血酸依據(jù)GB5009.86—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中抗壞血酸的測定》以2，6-二氯酚靛酚滴定法測定；番茄紅素依據(jù)NY/T1614—2008《中華人名共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 蔬菜及制品中番茄紅素的測定》采用高效液相色譜測定；可溶性蛋白依據(jù)GB5009.5—2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測定》以凱氏定氮法測定。

1.3 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2016、IBM SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。主成分法進(jìn)行因子分析，最大方差法對因子旋轉(zhuǎn)，以旋轉(zhuǎn)后的特征向量結(jié)合對指標(biāo)的聚類分析篩選評價指標(biāo)[11]。判別分析基于Fisher原理，并對模型進(jìn)行交叉驗證。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同櫻桃番茄雜交組合的變異分析

如表2，品質(zhì)測定結(jié)果表明多項指標(biāo)觀測值之間存在較大程度的變異。其中以番茄紅素變異系數(shù)最大，達(dá)59%，VC次之為42%。糖酸比、可溶性糖、單果重、梗洼變異系數(shù)也相對較高，分別為35%、34%、27%、25%。遺傳變異最為豐富的指標(biāo)在品種選育中有更高的選擇潛力。本實驗中，營養(yǎng)品質(zhì)的變異系數(shù)大于橫徑、縱徑、果形等外觀指標(biāo)變異系數(shù)，這表明通過雜交育種培育營養(yǎng)品質(zhì)優(yōu)良的品種是可行的。

表1 供試材料種質(zhì)性狀及來源

表2 櫻桃番茄品質(zhì)性狀分布

2.2 品質(zhì)性狀的主成分分析

以特征值大于1，方差貢獻(xiàn)率大于80%為標(biāo)準(zhǔn)對14個品質(zhì)性狀進(jìn)行主成分分析。圖1的碎石圖中位于陡坡的主成分特征值大，所含信息量大。本實驗中前5個主成分特征值均大于1并位于陡坡，且表3中這5個主成分累積方差貢獻(xiàn)率達(dá)79.05%，代表了櫻桃番茄近80%的遺傳信息。因此，可用這5個主成分代表14個品質(zhì)指標(biāo)評價櫻桃番茄綜合品質(zhì)。

圖1 主成分分析碎石圖

表3 總方差的解釋

2.3 主成分的解釋和評價指標(biāo)的選擇

對品質(zhì)指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)聚類可從多維度篩選評價指標(biāo)[10，12]。用主成分法進(jìn)行因子分析時，主成分即為因子，可根據(jù)旋轉(zhuǎn)后的載荷矩陣對主成分進(jìn)行解釋。由表4可知第一因子反映原始數(shù)據(jù)信息量的21.88%，其中單果重、橫徑、梗注與果實大小相關(guān)的指標(biāo)因子載荷都在0.86以上，其余指標(biāo)載荷大多低于0.3。果實的產(chǎn)量由結(jié)果數(shù)和單果重決定，提高其一即可顯著增產(chǎn)。因此，第一因子可定義產(chǎn)量因子。由于單果重因子載荷最大，和縱徑、橫徑高度正相關(guān)并且在聚類分析(圖2)中和縱徑、橫徑等反映果實大小的指標(biāo)聚為一類，因此可用單果重代表產(chǎn)量因子。第二因子方差貢獻(xiàn)率16.14%，決定其大小的指標(biāo)主要是糖酸比、可溶性糖，載荷值分別為0.899、0.838。這兩個指標(biāo)和番茄風(fēng)味密切相關(guān)，可定義為風(fēng)味因子。由于糖酸比因子載荷更大，可代表風(fēng)味因子。第三因子方差貢獻(xiàn)率16.08%，各指標(biāo)載荷相差不大，僅有蛋白質(zhì)、可滴定酸和硬度相對突出，在圖2的聚類分析中硬度和可溶性固形物聚為一類，兩者都能反映番茄口感，所以將第三因子定義為口感因子。硬度是口感的主要來源，因此可用硬度代表口感因子。第四因子方差貢獻(xiàn)率14.21%，它在果形指數(shù)、縱徑、果梗長度上的載荷值較大，聚類分析中將果形指數(shù)、梗洼、果梗長度聚為一類而這三者都反映了果實外觀，因而我們稱其為外觀因子。果形指數(shù)因子載荷遠(yuǎn)大于其他指標(biāo)，并且果形指數(shù)與構(gòu)成果實外觀的縱徑、橫徑高度相關(guān)，所以選擇果形指數(shù)代表櫻桃番茄外觀品質(zhì)。第五因子方差貢獻(xiàn)率為10.74%。番茄紅素、可溶性固形物、抗壞血酸(VC)這三個和營養(yǎng)密切相關(guān)的指標(biāo)具有最大的載荷值，因此，可定義為營養(yǎng)因子。聚類分析中三者劃為一類但是可溶性固形物主要由糖酸物質(zhì)組成，反映果實風(fēng)味。而番茄紅素和VC是番茄中重要的營養(yǎng)物質(zhì)，且兩者因子載荷相差不大，所以用番茄紅素和VC代表營養(yǎng)因子。

表4 旋轉(zhuǎn)后的成分矩陣

圖2 指標(biāo)間的聚類分析

2.4 主成分綜合評價

各因子所對應(yīng)的方差貢獻(xiàn)率與提取出的總方差貢獻(xiàn)率(79.05%)的比值作為權(quán)重[11]，得出主成分綜合評價模型：VSCORE=0.278VFAC1+0.204VFAC2+0.229VFAC3+0.180VFAC4+0.136VFAC5。其中，VSCORE、VFAC1、VFAC2、VFAC3、VFAC4、VFAC5分別代表SCORE、FAC1、FAC2、FAC3、FAC4、FAC5的值。根據(jù)29份櫻桃番茄組合的各因子得分和主成分綜合得分，對5個因子綜合得分排序，可直觀地判斷出各個雜交組合在綜合品質(zhì)和5個因子上的品質(zhì)差異，從而篩選出綜合品質(zhì)或某一方面品質(zhì)突出的優(yōu)良品種。表5可知，F(xiàn)N208、FN402、FN403綜合得分位居前三，具有更好的綜合品質(zhì)，F(xiàn)N401、FN112、FN207綜合得分位于最后，品質(zhì)最差。FN403產(chǎn)量因子(FAC1)排名第一，具有最好的豐產(chǎn)性。

表5 櫻桃番茄綜合主成分得分及排名

2.5 櫻桃番茄雜交組合的聚類分析

以14項品質(zhì)指標(biāo)為依據(jù)，對29種櫻桃番茄雜交組合進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析。圖3中歐式距離為12.5時將其劃分為6類。第Ⅰ類有15個組合，綜合品質(zhì)排名普遍居中。共同特征是單果重18～24 g；可溶性固形物大多在7%～9%；硬度、糖酸比在15～20；可溶性糖5～8 g，這些指標(biāo)均接近于平均值。第Ⅱ類有7個組合，共同點在于都是高圓形果，單果重接近，硬度較大，擁有相似的外觀。這一類各組合間得分差距較大。FN204、FN113、FN404綜合得分排名7～9名，屬于綜合品質(zhì)優(yōu)良的組合，這與其果實番茄紅素、糖酸比較高有關(guān)。而FN110、FN401、FN112綜合得分排名26～28，綜合品質(zhì)較差，其中營養(yǎng)品質(zhì)的差距更為明顯。前三者番茄紅素在46.70～52.40 mg·kg-1，遠(yuǎn)高于平均值，而FN110、FN112中則沒有檢出番茄紅素，F(xiàn)N401中也僅有8.40 mg·kg-1?？梢娺@7個組合是因為相似的單果重、外觀和口感聚為一類，又因為在營養(yǎng)、風(fēng)味品質(zhì)上差異較大導(dǎo)致綜合得分相差較大。第Ⅳ類有4個組合，綜合得分位居前六。普遍特征是單果重在30 g以上，硬度低于平均值；VC、可滴定酸含量較高；糖酸比中等偏上。綜合來看這一類別果實較大、酸甜適中、營養(yǎng)豐富和口感柔軟是這批番茄中品質(zhì)最好的組合。第Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ類均只有1個組合，這3個組合均在某幾項指標(biāo)上與其他組合差別較大而單獨成一類。聚類分析結(jié)果表明，綜合得分較高的FN402、FN403這兩個極優(yōu)的組合被單獨區(qū)分；得分次之的FN101、FN201、FN118聚為一類，這5個組合為適合推廣的優(yōu)良櫻桃番茄。品質(zhì)最差的FN110、FN112、FN114、FN401等被聚為一類，聚類結(jié)果與綜合主成分得分較為一致。

圖3 櫻桃番茄雜交組合的聚類分析

2.6 品質(zhì)判別及分類結(jié)果

以29個櫻桃番茄雜交組合作為建模樣本，強制引入可溶性固形物(C1)，把步進(jìn)法根據(jù)自變量貢獻(xiàn)大小篩選出的單果重(m)、糖酸比(R)、VC(CVC)作為觀測變量；以聚類分析的6個類別(Ⅰ-Ⅵ)作為分組變量[11]；運用Fisher準(zhǔn)則進(jìn)行判別分析，得到6個線性判別函數(shù)：

Y1=-129.172-0.175m+0.884C1+0.516R+6.984CVC；

Y2=-134.104-0.391m+1.041C1+1.572R+6.534CVC；

Y3=-179.290+0.500m+1.238C1+1.299R+7.255CVC；

Y4=-192.737-0.193m+2.198C1+1.217R+7.620CVC；

Y5=-178.275+1.372m+0.875C1+0.049R+7.139CVC；

Y6=-288.428-0.741m+0.783C1+0.439R+11.065CVC。

將指標(biāo)的實測值代入上述函數(shù)，計算函數(shù)值，函數(shù)值最大的即為櫻桃番茄的品質(zhì)類別，可用此函數(shù)對新樣品進(jìn)行品質(zhì)判別。表6中自身驗證的結(jié)果可見第1類的15個組合中僅有1個組合被錯判歸入第1類，正確判別率達(dá)96.6%。交叉驗證表明，第1類中有2個組合被錯判歸入第2類，第2類中有1個組合被錯判歸入第3類，第3類種歸入了來自4、5、6類的各一個組合，總體判別正確率79.3%。可見本研究中6個判別函數(shù)的準(zhǔn)確率較高，基于聚類結(jié)果的判別函數(shù)模型較為穩(wěn)定，能夠滿足櫻桃番茄品質(zhì)類型的判別需求。圖4的聯(lián)合分布圖中4、5、6這三類邊界清晰距離較遠(yuǎn)不太容易錯判，而1、2和3、4之間邊界接近，錯判主要會在這幾個類別間發(fā)生。第一判別維度上(函數(shù)1)六種類別明顯區(qū)分，然而第二判別維度上(函數(shù)2)2，3，4，6這四個類別縱向距離接近，判別效果不如前者。

圖4 判別函數(shù)聯(lián)合分布圖

表6 品質(zhì)判別分類結(jié)果

3 討論

本研究對29種櫻桃番茄的14個品質(zhì)性狀進(jìn)行觀測與分析，試驗結(jié)果表明，代表營養(yǎng)品質(zhì)的番茄紅素和抗壞血酸(VC)變異系數(shù)較大，可見櫻桃番茄營養(yǎng)品質(zhì)的遺傳多樣性主要來自品種間差異。而果形指數(shù)、可溶性固形物，可滴定酸等指標(biāo)變異系數(shù)較小，選擇難度較大。這與張靜等[6]、王曉靜[13]的研究一致。這可能與番茄的物種特性有關(guān)，因此探究基因的表達(dá)調(diào)控，尤其是發(fā)掘控制風(fēng)味和營養(yǎng)成分的基因?qū)x育優(yōu)良品種具有重要意義?？傮w來看這批櫻桃番茄存在著果實越小，可溶性固形物越高，番茄的糖、酸含量越高的趨勢[14]。綠果番茄與黃果番茄不含番茄紅素，但是其VC含量較高，這與常培培等[15]的研究一致。這可能是由于綠果與黃果番茄更接近于野生種，而普通紅果番茄馴化較早，長期以產(chǎn)量和風(fēng)味為篩選指標(biāo)，忽視了VC等營養(yǎng)指標(biāo)，造成了馴化植株VC含量相對較低。

主成分分析可將多個相關(guān)變量轉(zhuǎn)變?yōu)樯贁?shù)幾個獨立的綜合變量，目的是簡化評價指標(biāo)[16]。對指標(biāo)進(jìn)行聚類分析時，聚為同一類的指標(biāo)具有較強的相關(guān)性，可選取其中的一個代表其它指標(biāo)，兩者結(jié)合能更好地篩選反映事物本質(zhì)的主要變量[17]。綜合評價結(jié)果可見，黃果櫻桃番茄排名靠后，這可能是因為它果實較小且不含番茄紅素。進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)黃果番茄可滴定酸含量遠(yuǎn)低于均值，最低僅為0.27%，由此導(dǎo)致黃果番茄口感偏甜，這與前人的研究相符[18]。這可能與黃果番茄生長周期長，糖積累較多而酸則被充分轉(zhuǎn)化有關(guān)。FN113在FAC1(產(chǎn)量因子)中表現(xiàn)較差，其他指標(biāo)均位于前10，屬于綜合表現(xiàn)優(yōu)秀的小果番茄?？梢娋C合主成分得分可以從多個角度指導(dǎo)品種選擇。

聚類分析既可以反映參試品種的類別特征，也在一定程度上反映品種間親緣關(guān)系。可根據(jù)育種目標(biāo)，考慮遺傳距離的遠(yuǎn)近，選擇遺傳差異較大的親本進(jìn)行雜交以獲得更高的遺傳變異率[19]。聚類結(jié)果顯示，相同果色的品種聚在一類，推斷原因是我國番茄地方品種形成時間較短，親本材料來源單一，導(dǎo)致遺傳距離接近，品質(zhì)性狀相似。判別分析的目的在于建立一種變量的線性組合來概括分類間的差異，從而根據(jù)已知樣本的分類情況來判斷未知樣本的歸屬問題。它通常與聚類分析聯(lián)合使用，先通過聚類分析對原來的一批樣品分類，再用判別分析建立判別式以對新樣品進(jìn)行判別。本研究以聚類分析結(jié)果為分組變量，得出了品質(zhì)判別函數(shù)，自身驗證和交叉驗證的正確判別率分別達(dá)到了96.6%和79.3%，高于目前已建立的蘋果[20]判別函數(shù)模型的91.6%，龍眼[21]判別模型的70.0%。這可能與后者在判別分析時強制引入較多指標(biāo)有關(guān)。

4 結(jié)論

對櫻桃番茄14個品質(zhì)性狀進(jìn)行主成分分析，提取出代表80%遺傳信息的5個主成分；因子旋轉(zhuǎn)結(jié)合對指標(biāo)的聚類分析篩選出六個評價指標(biāo)：單果重、糖酸比、硬度、果形指數(shù)、番茄紅素和抗壞血酸(VC)；通過基于綜合主成分得分和聚類分析的綜合評價模型篩選出適宜推廣的櫻桃番茄雜交組合FN208、FN402、FN403、FN101、FN201，為櫻桃番茄品質(zhì)評價和鑒定提供了新思路。