王 坤

（豐縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 徐州 221700）

乙型肝炎病毒慢性感染是因機(jī)體細(xì)胞免疫功能發(fā)生紊亂，無法徹底對(duì)抗入侵的病毒而發(fā)生慢性化病程，是慢性乙型肝炎、相關(guān)肝硬化和肝細(xì)胞肝癌發(fā)生的主要原因。臨床對(duì)于乙型肝炎病毒慢性感染患者并無特異性藥物治療，大部分恢復(fù)健康的被感染者皆是憑自身免疫功能清除了體內(nèi)的乙型肝炎病毒，而自身免疫功能較差者的治療效果通常不佳[1]。因此，加強(qiáng)并進(jìn)一步提高乙型肝炎病毒慢性感染患者的臨床檢測準(zhǔn)確率，是防治、管控疾病蔓延的重點(diǎn)。臨床研究顯示，乙型肝炎病毒慢性感染患者自身并不會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生肝損傷，而肝損傷的發(fā)生可能與機(jī)體相關(guān)細(xì)胞因子介入免疫應(yīng)答反應(yīng)相關(guān)，但處于不同感染時(shí)期的個(gè)體免疫情況、肝功能均有所差異[2]。為此，本次研究旨在對(duì)乙型肝炎病毒慢性感染患者臨床免疫學(xué)檢測指標(biāo)的重要性進(jìn)行分析，以期為臨床合理、及時(shí)診治疾病提供參考、借鑒，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2019年3月至2020年2月豐縣人民醫(yī)院收治的52例乙型肝炎病毒慢性感染患者的臨床資料，將其作為感染組；另選取同時(shí)期50例健康體檢者的體檢資料作為健康對(duì)照組。其中健康對(duì)照組研究對(duì)象中男性30例，女性20例；年齡25～75歲，平均（50.11±24.89）歲。感染組患者中男性33例，女性19例；年齡27～71歲，平均（49.28±21.72）歲；按疾病類型分為：肝細(xì)胞癌患者10例，肝硬化患者18例，慢性乙型肝炎患者24例。將兩組研究對(duì)象性別、年齡等一般資料進(jìn)行對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），組間可進(jìn)行比較。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《慢性乙型感染防治指南（2015年版）》[3]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)者；入組前未接受護(hù)肝治療者；入組前1年內(nèi)未服用免疫調(diào)節(jié)劑者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并除乙型肝炎病毒外的其他類型肝炎病毒、細(xì)菌及真菌感染者；自身免疫性疾病史者等。本研究已經(jīng)豐縣人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法 ①感染組患者乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）載量檢測方法：無菌采集感染組患者空腹血標(biāo)本2 mL，注入無菌離心管，以2 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，取血清用于DNA提取。采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）分析儀進(jìn)行基因擴(kuò)增，結(jié)果判斷：<102IU/mL為陰性，102～104IU/mL為低病毒載量組，105～106IU/mL為中病毒載量組，>107IU/mL為高病毒載量組。②兩組研究對(duì)象均進(jìn)行免疫學(xué)指標(biāo)檢測：包括白細(xì)胞介素 -4（IL-4）、白細(xì)胞介素 -12（IL-12）、干擾素 -γ（INF-γ）。具體檢測方法為：血樣采集方法同①，在4 ℃低溫下、以1 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，分離血清，在適宜溫度環(huán)境下使用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法檢測；另使用全自動(dòng)生化分析儀檢測兩組研究對(duì)象肝功能指標(biāo)，包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、總膽紅素（TBiL）、白蛋白（ALB）。

1.3 觀察指標(biāo) ①將兩組研究對(duì)象血清IL-4、IL-12、INF-γ水平進(jìn)行對(duì)比，并統(tǒng)計(jì)感染組患者HBV-DNA載量。②將兩組研究對(duì)象血清ALT、TBiL、ALB水平進(jìn)行對(duì)比。③分析乙型肝炎病毒慢性感染患者血清IL-4、IL-12、INF-γ與HBV-DNA、ALT、TBiL、ALB水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組研究對(duì)象血清 IL-4、IL-12、INF-γ及 HBV-DNA、ALT、TBiL、ALB水平為計(jì)量資料，用(±s)表示，行t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Perason檢驗(yàn)。以P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-4、IL-12、INF-γ水平與 HBV-DNA 載量 感染組患者IL-4、IL-12、INF-γ水平均顯著高于健康對(duì)照組，且感染組中慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、肝細(xì)胞癌患者血清IL-12、INF-γ水平逐漸降低，血清IL-4水平逐漸升高，兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P< 0.05）；感染組不同疾病類型患者HBV-DNA載量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P> 0.05），見表1。

表1 兩組研究對(duì)象IL-4、IL-12、INF-γ水平與HBV-DNA載量比較( ?±s)

注：與健康對(duì)照組比，*P < 0.05；與慢性乙型肝炎比，#P < 0.05；與肝炎肝硬化比，△P < 0.05。IL-4：白細(xì)胞介素 -4；IL-12：白細(xì)胞介素 -12；INF-γ：干擾素 -γ；HBV-DNA：脫氧核糖核酸。

組別 例數(shù) IL-4(pg/mL) IL-12(pg/mL) INF-γ(pg/mL) HBV-DNA載量(lg IU/mL)健康對(duì)照組 50 28.93±4.56 17.85±1.24 22.67±1.35感染組 慢性乙型肝炎 24 92.22±4.13* 56.44±3.18* 70.42±4.16* 5.28±1.89肝炎肝硬化 18 95.17±4.39*# 43.05±2.17*# 52.34±3.01*# 5.79±1.53肝細(xì)胞癌 10 111.18±32.47*#△ 34.29±2.37*#△ 49.21±2.56*#△ 5.08±1.47

2.2 ALT、TBiL、ALB水平 感染組患者血清ALT、TBiL水平均顯著高于健康對(duì)照組，且ALB顯著低于健康對(duì)照組，而感染組中慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、肝細(xì)胞癌患者血清ALT、TBiL水平逐漸升高，血清ALB水平逐漸降低，兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05），見表2。

表2 兩組研究對(duì)象血清ALT、TBiL、ALB水平比較( ?±s)

表2 兩組研究對(duì)象血清ALT、TBiL、ALB水平比較( ?±s)

注：與健康對(duì)照組比，*P < 0.05；與慢性乙型肝炎比，#P < 0.05；與肝炎肝硬化比，△P < 0.05。ALT：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；TBiL：總膽紅素；ALB：白蛋白。

組別 例數(shù) ALT(U/L) TBiL(μmol/L) ALB(g/L)健康對(duì)照組 50 25.53±1.48 13.21±1.07 46.25±3.43感染組 慢性乙型肝炎 24 151.36±4.23* 67.55±3.46* 41.79±2.58*肝炎肝硬化 18 203.56±9.47*# 158.33±5.43*# 23.59±1.52*#肝細(xì)胞癌 10 287.49±12.67*#△ 165.47±5.82*#△ 21.27±1.49*#△

2.3 相關(guān)性Perason相關(guān)性分析結(jié)果顯示，乙型肝炎病毒慢性感染患者血清IL-12與ALT水平呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r= -0.637，P< 0.05），血清INF-γ水平與HBV-DNA呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r= -0.421，P< 0.05），見表 3。

表3 乙型肝炎病毒慢性感染患者IL-4、IL-12、INF-γ與HBV-DNA、ALT、TBiL、ALB水平的相關(guān)性

3 討論

臨床上對(duì)乙型肝炎病毒慢性感染若不能采取有效的方式予以處理，在慢性病程狀態(tài)下，患者會(huì)逐漸進(jìn)展為肝硬化、急慢性肝衰竭疾病，甚至最終發(fā)展為肝細(xì)胞癌，嚴(yán)重威脅患者的生命安全。一直以來，臨床都在不斷地研究慢性乙型肝炎的發(fā)病機(jī)制，但是還沒能夠得到明確的最終定論，這也是影響慢性乙型肝炎臨床治療效果的一個(gè)因素。由于臨床采取的抗病毒用藥方案并不能將乙型肝炎病毒慢性感染患者機(jī)體內(nèi)的病毒徹底消滅，而且患者還可能在漫長的用藥周期中產(chǎn)生對(duì)乙型肝炎病毒的各種免疫耐受反應(yīng)[4-5]。因此，如何應(yīng)對(duì)乙型肝炎病毒患者的免疫耐受，是臨床亟需解決的一大難題。

結(jié)合免疫應(yīng)答特點(diǎn)分析，臨床將乙型肝炎病毒慢性感染分為3個(gè)階段：免疫耐受階段、免疫穩(wěn)定階段和免疫活躍階段。不同階段下，乙型肝炎病毒慢性感染患者肝臟受損程度、機(jī)體內(nèi)病毒水平也是各有差異的，若是通過臨床免疫學(xué)檢測，可對(duì)患者機(jī)體免疫狀態(tài)做出正確檢測和判定，也有利于臨床制定針對(duì)性的診斷和治療方案，有望提高臨床療效[6]。依靠人體自身特異性免疫反應(yīng)，能夠有效對(duì)抗甚至清除侵襲到體內(nèi)的各種感染源，促使疾病痊愈，發(fā)揮預(yù)防機(jī)體感染的主導(dǎo)作用。機(jī)體主要是通過T淋巴細(xì)胞來清除侵襲的乙型肝炎病毒，T淋巴細(xì)胞一方面能夠發(fā)揮免疫效應(yīng)細(xì)胞的作用，直接殺死或造成靶細(xì)胞損傷；另一方面又能發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，對(duì)細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)行調(diào)節(jié)[7-8]。

目前多數(shù)研究顯示，CD8+T細(xì)胞參與免疫抑制過程，可導(dǎo)致肝功能損傷，直接影響疾病進(jìn)展和轉(zhuǎn)歸[9-10]。乙型肝炎病毒合并丙型肝炎病毒感染患者機(jī)體內(nèi)的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞可通過相互作用而清除病毒，增加患者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞數(shù)量可以提高乙型肝炎病毒的清除效果。同時(shí)研究顯示，1型輔助性T細(xì)胞/2型輔助性T細(xì)胞（Th1/Th2）失調(diào)可能是乙型肝炎病毒感染進(jìn)入慢性化進(jìn)程的主要因素[11]。IL-4由Th2細(xì)胞分泌，主要促進(jìn)體液免疫反應(yīng)，并同時(shí)抑制Th1細(xì)胞的成熟和產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞因子；IL-12、IFN-γ主要由Th1細(xì)胞分泌，其中IL-12由B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞分泌，可促進(jìn)Th1增殖，抑制Th2分化，增加血清中白細(xì)胞介素 -15（IL-15）、白細(xì)胞介素 -18（IL-18）、IFN-γ水平；而IFN-γ為抗病毒免疫調(diào)節(jié)因子，可調(diào)節(jié)免疫功能，抑制乙型肝炎病毒合成，同時(shí)可經(jīng)非溶細(xì)胞機(jī)制抑制乙型肝炎病毒復(fù)制，因此，IFN-γ、IL-12在調(diào)節(jié)輔助性T細(xì)胞（Th）分化上具有協(xié)同作用，可使Th1和Th2互相協(xié)同[12]。本文研究結(jié)果顯示，感染組患者中慢性乙型肝炎患者血清IL-12、INF-γ水平相對(duì)最高，而肝細(xì)胞癌患者血清IL-4水平相對(duì)最高，說明乙型肝炎病毒慢性感染患者中，慢性乙型肝炎患者免疫功能相對(duì)較佳，此時(shí)若能積極進(jìn)行抗病毒治療，可能會(huì)獲得更好的臨床療效，抑制病情進(jìn)展至肝硬化甚至肝細(xì)胞癌。

血清ALT、TBiL是反映肝細(xì)胞實(shí)質(zhì)損傷與肝臟慢性損害的指標(biāo)，隨著疾病的發(fā)展，其水平呈逐漸上升趨勢(shì)；血清ALB水平的高低可直接反映肝臟合成代謝功能和儲(chǔ)備功能，若ALB持續(xù)下降，則表示肝細(xì)胞壞死進(jìn)行性加重，預(yù)后不良[13]。慢性乙型肝炎反復(fù)或持續(xù)的轉(zhuǎn)氨酶升高，預(yù)示著預(yù)后不良。肝細(xì)胞的不斷壞死，可引起纖維增生，最終發(fā)展為肝炎肝硬化；肝細(xì)胞的不斷修復(fù)，則易出現(xiàn)細(xì)胞惡性變，因機(jī)體的免疫機(jī)能受損等因素，則有可能導(dǎo)致肝細(xì)胞癌的發(fā)生。本研究中，感染組患者血清ALT、TBiL顯著高于健康對(duì)照組，血清ALB水平顯著低于健康對(duì)照組，且感染組中慢性乙型肝炎患者血清ALT、TBiL水平顯相對(duì)最低，血清ALB水平相對(duì)最高，提示肝功能指標(biāo)與肝組織病理學(xué)之間存在著緊密關(guān)聯(lián)。本研究對(duì)乙型肝炎病毒慢性感染患者IL-4、IL-12、INF-γ與HBV-DNA、ALT、TBiL、ALB水平的相關(guān)性進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果顯示，乙型肝炎病毒慢性感染患者血清IL-12與ALT水平呈負(fù)相關(guān)，推測血清IL-12具有一定的抑癌作用，同時(shí)可能肝細(xì)胞癌患者機(jī)體內(nèi)存在異于其他病程的免疫作用過程，其白細(xì)胞介素水平的變化可在一定程度上反映患者肝細(xì)胞損害的情況，能夠?yàn)槁砸倚透窝椎脑\斷和預(yù)后提供臨床價(jià)值；血清INF-γ水平與HBV-DNA呈負(fù)相關(guān)，推測INF-γ可能較適合用于評(píng)價(jià)患者的免疫功能，或可作為有效指標(biāo)來評(píng)價(jià)慢性乙型肝炎患者的免疫狀態(tài)。

綜上，IL-4、IL-12、INF-γ水平的變化可在一定程度上反映肝細(xì)胞損害的情況，與乙型肝炎病毒慢性感染患者密切相關(guān)，通過監(jiān)測免疫學(xué)指標(biāo)水平，能為疾病的發(fā)生和發(fā)展提供重要參考依據(jù)。