肖素英，陳國偉，莊國賓

（1.珠海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科；2.珠海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院男科，廣東 珠海 519020）

男性不育是指由男性因素引起的不育，一般將婚后未采取任何避孕措施同居2年以上，但女性未懷孕表現(xiàn)的稱為不育癥，男性不育癥呈現(xiàn)不斷上升趨勢，分析可能與心理因素、生理疾病、環(huán)境因素等有關(guān)[1]。通常精液的常規(guī)分析是篩查男性不育原因的第一道程序，其中主要包括精子形態(tài)學(xué)、前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)、精子濃度等檢查，精子形態(tài)學(xué)是反映男性生育能力的一個(gè)重要指標(biāo)；前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)是反映精子活力的重要指標(biāo)；精子濃度即精子密度，是精液常規(guī)中的一項(xiàng)重要指標(biāo)，若濃度較低，會導(dǎo)致男性生育能力下降[2]。由于精液常規(guī)分析只是從數(shù)量與形態(tài)方面進(jìn)行分析，對受精能力與精子功能方面提供的信息較少，故無法對男性生育能力的診斷和預(yù)后評估提供準(zhǔn)確信息。精子脫氧核糖核酸（DNA）碎片指數(shù)（DFI）是一種評估精子質(zhì)量的指標(biāo)，能反映精子遺傳物質(zhì)是否完整，可更客觀、更全面地評估男性生育能力，是判斷男性生育能力的重要指標(biāo)之一[3]。基于此，本研究旨在探討男性不育患者精子DFI與精液各參數(shù)的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析珠海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院2019年1月至2021年1月收治的110例男性不育患者的臨床資料，根據(jù)患者年齡的不同將其分為20～25歲組（31例）、 26～30歲組（49例）、31～35歲組（19例）、≥?36歲組（11例）；根據(jù)患者精子濃度進(jìn)行分組，分為正常組（56例，精子濃度≥?20×106/mL）和異常組（54例，精子濃度< 20×106/mL）；根據(jù)患者精子活力進(jìn)行分組，分為正常組（41例，前向運(yùn)動(dòng)精子率≥?35%）和異常組（69例，前向運(yùn)動(dòng)精子率< 35%）；根據(jù)患者精子形態(tài)進(jìn)行分組，分為正常組（63例，正常形態(tài)精子率≥?4%）和異常組（47例，正常形態(tài)精子率< 4%）；根據(jù)患者的精子DFI進(jìn)行分組，分為Ⅰ組（37例，DFI ≤?10%）、Ⅱ組（54例，DFI > 10%且≤?20%）、Ⅲ組（19例， DFI > 20%）。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照《中西醫(yī)結(jié)合泌尿男科病癥診療手冊》[4]中男性不育的診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者；臨床病例資料完整者；身體狀況良好者；無家族遺傳性疾病病史者；無性功能障礙者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤疾病者；經(jīng)體格檢查男性性征、附睪、睪丸、附屬性腺及生殖器明顯異常者等。本研究經(jīng)珠海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 研究方法 ①精液獲?。褐笇?dǎo)患者在留取精液前禁欲2～7 d，采用手淫法獲取新鮮精液，將已獲取的精液置于潔凈容器中，于37 °C的水浴恒溫箱內(nèi)進(jìn)行液化。②精液分析：將液化后的精液取10 μL進(jìn)行涂片，采用彩色精子質(zhì)量檢測系統(tǒng)檢驗(yàn)分析精液質(zhì)量，分別將前向運(yùn)動(dòng)精子、精子濃度進(jìn)行記錄，采用瑞 -?吉染色鏡對精子形態(tài)進(jìn)行觀察。③DFI檢測：新鮮精液行常規(guī)檢查后，使用生理鹽水進(jìn)行稀釋，精子密度至（5～10）×106/mL，取待測標(biāo)本30 μL加入已融化的易溶凝膠管中， 37 ℃孵育5 min待用，充分混勻，取預(yù)先處理的玻璃片一張，置于4 ℃冰箱5 min，待玻片冷卻后將其取出，立即垂直浸入反應(yīng)池內(nèi)，池中盛有反應(yīng)液A，溫度設(shè)置20～28 ℃，反應(yīng)時(shí)間為7 min，然后將玻片垂直浸入盛有反應(yīng)液B的反應(yīng)池中，溫度不變，反應(yīng)時(shí)間為25 min，再將玻片浸入純化水中，時(shí)間為5 min，期間可進(jìn)行1～2次換水。之后將玻片依次放入70%、90%、100%的乙醇中進(jìn)行脫水，時(shí)間均為2 min，取出自然晾干。晾干后覆蓋15 ～ 20滴瑞式染液，緩慢再次加入30 ～ 40滴瑞式染液，并輕輕吹打混合染液，15 min后輕輕沖洗染片，使用光學(xué)顯微鏡于400倍鏡下，對400條精子形態(tài)進(jìn)行觀察，分別統(tǒng)計(jì)大暈環(huán)精子、中暈環(huán)精子、小暈環(huán)精子及無暈環(huán)精子個(gè)數(shù)，同時(shí)統(tǒng)計(jì)退化精子的個(gè)數(shù)，DFI =（退化精子＋無暈環(huán)精子+小暈環(huán)精子）總數(shù)/400×100%。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較不同年齡組患者精液參數(shù)和精子DFI，精液參數(shù)包括正常形態(tài)精子率、前向運(yùn)動(dòng)精子率、精子濃度。②比較精子各參數(shù)正常組與異常組患者精子DFI。③比較不同精子DFI組患者精液各參數(shù)。④采用Pearson相關(guān)性分析法分析男性不育患者精子DFI與年齡、精液各參數(shù)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以(±s)表示，兩組間比較行t檢驗(yàn)，多組間比較，采用重復(fù)測量方差分析；精子DFI與年齡、精液各參數(shù)的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析法進(jìn)行分析。以P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡組患者精液參數(shù)和精子DFI比較 31～35歲組、≥?36歲組患者精子DFI均顯著高于20～25歲組與26～30歲組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P< 0.05）；而不同年齡組患者的前向運(yùn)動(dòng)精子率、精子濃度、正常形態(tài)精子率相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P> 0.05），見表1。

表1 不同年齡組患者精液參數(shù)和精子DFI比較( ?±s)

表1 不同年齡組患者精液參數(shù)和精子DFI比較( ?±s)

注：與20～25歲組比，*P<0.05；與26～30歲組比，#P<0.05。DNA：脫氧核糖核酸。DFI：DNA碎片指數(shù)。

組別 例數(shù) 正常形態(tài)精子率(%) 前向運(yùn)動(dòng)精子率(%) 精子濃度(×106/mL) 精子DFI(%)20～25 歲組 31 3.98±1.79 29.18±11.03 23.31±10.36 12.35±5.03 26～30 歲組 49 3.62±1.13 29.35±11.42 26.54±11.32 12.67±6.21 31～35 歲組 19 3.88±1.03 28.31±10.73 30.13±14.26 16.56±7.45*#≥?36 歲組 11 3.82±1.82 26.79±11.41 24.15±11.36 16.98±7.31*#F值 0.455 0.180 1.481 3.259 P值 >0.05 >0.05 >0.05 <0.05

2.2 精子各參數(shù)正常組與異常組患者精子DFI比較 精子形態(tài)異常組與精子活力異常組患者的精子DFI分別顯著高于精子形態(tài)正常組與精子活力正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P< 0.05），而精子濃度正常組與異常組精子DFI相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05），見表2。

表2 精子分析下各參數(shù)正常組與異常組患者精子 DFI比較 ( ?±s?, %)

表2 精子分析下各參數(shù)正常組與異常組患者精子 DFI比較 ( ?±s?, %)

組別 精子濃度 精子活力 精子形態(tài)例數(shù) 精子D F I 例數(shù) 精子D F I 例數(shù) 精子D F I正常組 5 6 1 4.0 8±6.4 4 4 1 1 2.0 5±5.0 3 6 3 1 4.9 1±5.6 2異常組 5 4 1 3.5 9±5.1 1 6 9 1 8.1 5±7.1 6 4 7 1 7.0 4±5.3 1 t值 0.4 4 1 4.7 9 3 2.0 1 3 P值 >0.0 5 <0.0 5 <0.0 5

2.3 不同精子DFI組患者精液各參數(shù)比較 與Ⅰ組比，Ⅱ、Ⅲ組患者正常形態(tài)精子率、前向運(yùn)動(dòng)精子率均顯著降低，且Ⅲ組患者前向運(yùn)動(dòng)精子率顯著低于Ⅱ組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P< 0.05），而各組患者精子濃度相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P> 0.05），見表3。

表3 不同精子DFI組患者精液各參數(shù)比較( ?±s)

表3 不同精子DFI組患者精液各參數(shù)比較( ?±s)

注：與Ⅰ組比，△P<0.05；與Ⅱ組比，▲P<0.05。

組別 例數(shù) 正常形態(tài)精子率(%)前向運(yùn)動(dòng)精子率(%)精子濃度(×106/mL)Ⅰ組 37 4.44±1.68 35.21±8.59 27.76±12.24Ⅱ組 54 3.68±1.46△ 27.24±10.56△ 25.34±11.26Ⅲ組 19 3.55±1.33△ 19.87±10.03△▲ 26.32±12.31 F值 3.411 16.313 0.464 P值 <0.05 <0.05 >0.05

2.4 相關(guān)性分析Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，精子DFI與年齡呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r= 0.296，P< 0.05），精子DFI與正常形態(tài)精子率和前向運(yùn)動(dòng)精子率呈負(fù)相關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r= -0.287，-0.316，均P<0.05），見表 4。

表4 精子DFI與年齡及精液各參數(shù)的相關(guān)性分析

3 討論

男性精子中的DNA是傳載人類遺傳信息的載體，其中DNA的完整性是將遺傳物質(zhì)正確傳給子代的先決條件，若精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)受到損傷，可導(dǎo)致精子的受精能力、受精卵的分裂與胚胎發(fā)育受到影響；同時(shí)基因突變、染色體異常與環(huán)境因素均可導(dǎo)致精子DNA損傷，從而導(dǎo)致精子核的異常[5]。在多因素的聯(lián)合作用下，可造成精子DNA損傷，其中導(dǎo)致精子損傷的機(jī)制主要包括產(chǎn)生精子過程中的細(xì)胞凋亡、氧自由基在精子運(yùn)輸過程中的影響等，同時(shí)有學(xué)者指出，精子DFI與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)密切相關(guān)[6]。

本研究結(jié)果中，年齡越大精子DFI水平越高，精子形態(tài)和活力異常組患者的精子DFI均顯著高于正常組，隨著病情的發(fā)展，前向運(yùn)動(dòng)精子率逐漸升高，而精子濃度在各組內(nèi)、組間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析其原因可能在于，伴隨年齡的增長，精子的凋亡機(jī)制減退，再加上氧化應(yīng)激反應(yīng)無法有效清除DNA受損精子，導(dǎo)致DNA受損精子也隨之增加，并隨著精子的損傷程度增加，精子活力與形態(tài)均可受到影響，如精子活力降低與形態(tài)異常等，導(dǎo)致正常形態(tài)精子率、前向運(yùn)動(dòng)精子率降低[7-8]。

本研究結(jié)果還顯示，精子DFI與年齡呈正相關(guān)，精子DFI與正常形態(tài)精子率、前向運(yùn)動(dòng)精子率呈負(fù)相關(guān)，而精子DFI與精子濃度無相關(guān)性。分析其原因可能為，對于男性來說，其生育能力可隨年齡的增加而減退，比如性激素水平、精液質(zhì)量等均可隨年齡的增加而下降；并且，隨著其年齡的增長，睪丸等器官會逐步發(fā)生老化，以致于精子活力與精子正常形態(tài)均隨之下降[9]。男性不育患者的精子DFI隨著年齡的增大而升高，但年齡的增長并不影響精子形態(tài)、前向運(yùn)動(dòng)精子率與精子濃度，同時(shí)DFI可影響患者的正常形態(tài)精子率與前向運(yùn)動(dòng)精子率，但精子的濃度與精子DFI并無明顯相關(guān)性，提示男性不育患者年齡與精子DFI具有一定相關(guān)性，同時(shí)精子的正常形態(tài)率與前向運(yùn)動(dòng)精子率可隨著精子DNA的損傷程度而降低，與鄭慧瀾等[10]研究結(jié)果基本相符。

綜上，男性不育患者精子DFI與其年齡、精子活力、正常精子形態(tài)具有一定相關(guān)性，可作為常規(guī)精液檢查的補(bǔ)充，精子DFI能夠客觀全面評估男性的生育能力，可作為評估男性生育功能的重要指標(biāo)之一。但本研究存在一定的不足之處，如選取病例數(shù)較少，未來可收集多病例數(shù)進(jìn)行深入研究。