穆艷娥，王明江，鄧利愛，胡明彥，王瑞霞

（山西省薯類脫毒中心，太原 030000）

近年來，馬鈴薯市場需求量逐漸擴大，為確保市場流通的馬鈴薯質(zhì)量，必須完善馬鈴薯病毒病檢測體系，既是對消費者負責(zé)，又能擴大優(yōu)質(zhì)馬鈴薯種植規(guī)模，增加種植戶經(jīng)濟收入。

一、病毒病檢測目的

了解馬鈴薯病毒類型，以及各類病毒癥狀，并根據(jù)檢測結(jié)果分析馬鈴薯病毒病防控措施。

二、病毒病檢測方法

1、檢測材料與試劑

檢測于2020 年8 月12 日在山西省薯類脫毒中心六樓實驗室檢測二室進行。

準備不同馬鈴薯品種的試管苗，包括晉薯16 號15 株、夏波蒂16 株、費烏瑞它15 株、青薯9 號15株、1801-3品種15株、1912-2品種15株、ZXS6-2-7品種15株、XM1-1品種15株、XM1-2品種15株、XM1-6品種15株，存儲溫度為15～22℃，準備進行病毒X、Y、S、A、M、PLRV 檢測[1]。檢測試劑盒由北京信達誠勤科技有限公司提供，所需設(shè)備為移液槍、酶聯(lián)儀、洗板機、離心機、天平、恒溫箱等。

2、檢測方法

配制樣品提取緩沖液，之后采集樣品，并用天平稱取0.3～0.4 g 樣品。向采樣袋中加入1:10（g/mL）體積樣品，提取緩沖液。然后用燒杯隔袋研碎樣品，使樣品和樣品提取緩沖液充分混勻，最后將混合液倒入離心管中編號并離心待用。試劑、酶聯(lián)板在25℃恒溫條件中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱中回溫0.5 h。0.5 h 后取出酶聯(lián)板，根據(jù)樣品數(shù)拆分板條，每條4 個樣品，并給板條編號。

配置洗液，用洗板機洗3 次，每次約3 min。排空酶聯(lián)板，按編號依次加入樣品，每孔100μL；最后進行病毒陰性對照、陽性對照。酶聯(lián)板置于4℃黑暗環(huán)境，孵育16 h。取出并排空酶聯(lián)板，用洗液洗板3 次，每次約3 min。配制酶標特異性抗體溶液。排空酶聯(lián)板，用排槍加入酶標特異性抗體，每孔100μL。將酶聯(lián)板置于37℃黑暗環(huán)境，孵育1 h。取出并排空酶聯(lián)板，用洗液洗板3 次，每次約3 min。

配制PNPP 溶液。排空酶聯(lián)板，用排槍加入PNPP，每孔100μL。將酶聯(lián)板置于黑暗環(huán)境下孵育60 min。避免光直射或強光，取出并酶聯(lián)板，用酶標儀讀取病毒數(shù)據(jù)并記錄。

3、檢測結(jié)果

樣品檢測數(shù)據(jù)值大于等于陰性對照值的2 倍，判定為該病毒為陽性（用“+”表示），填制《病毒室內(nèi)檢測結(jié)果單》。

三、檢測結(jié)果分析

1、X（PVX）病毒檢測結(jié)果

此類病毒癥狀病葉紋路呈波浪狀，輕型花葉。病毒傳染載體主要是攜帶病毒的種薯[2]。使用DAS-ELISA 檢測馬鈴薯X 病毒，將檢測結(jié)果與陰性結(jié)果比對，確定是否存在病毒。

檢測中準備不同馬鈴薯品種的試管苗，因為不同品種馬鈴薯的病毒感染存在差異，根據(jù)試管苗陰性、陽性呈現(xiàn)結(jié)果證明病毒存在與否。結(jié)果顯示，試管苗均為陰性，說明馬鈴薯無X 病毒。

2、Y（PVY）病毒檢測結(jié)果

Y 病毒傳播途徑主要是蚜蟲，要掌握蚜蟲早期活動以及危害程度，了解Y（PVY）病毒的發(fā)病特征，為馬鈴薯Y（PVY）病毒的防控提供依據(jù)。Y 病毒是病毒病的代表，檢測工作要保證時效性和準確性。

對試管苗進行DAS-ELISA 檢測，同樣將檢測結(jié)果與陰性結(jié)果比較，據(jù)此得知是否存在Y 病毒。檢測發(fā)現(xiàn)，試管苗均為陰性，馬鈴薯苗無Y 病毒。

3、S（PVS）病毒檢測結(jié)果

此類病毒具有潛隱性，主要在馬鈴薯花、葉上寄生。由于馬鈴薯品種各異，所以S 病毒發(fā)生率有一定差異性，病癥表現(xiàn)也不盡相同?？偨Y(jié)發(fā)現(xiàn)，多數(shù)馬鈴薯種帶S 病毒后，癥狀表現(xiàn)為葉脈顏色加深，葉色顏色淡化，葉片縮小，葉尖卷起。當蚜蟲出現(xiàn)在馬鈴薯田，或者蚜蟲與未感染病毒的馬鈴薯接觸時，會間接傳播S 病毒。

檢測方式同X、Y 病毒檢測法，檢測結(jié)果表明，約1/5 試管苗攜帶S 病毒。因此，要有效防控S 病毒，否則會造成馬鈴薯減少，并且大幅降低馬鈴薯質(zhì)量。

4、A（PVA）病毒檢測結(jié)果

基于馬鈴薯Y 病毒分離出A 病毒，此類病毒對馬鈴薯質(zhì)量、產(chǎn)量有重要影響。A 病毒癥狀表現(xiàn)為馬鈴薯葉變黃，并且葉片上出現(xiàn)斑點，葉片光滑度逐漸下降。這類病毒傳播方式以蚜蟲接觸為主，以汁液接觸傳播為輔。

試管苗進行DAS-ELISA 檢測，通過酶聯(lián)免疫檢測儀獲取光密度值，并對比試驗結(jié)果與陰性結(jié)果，據(jù)此判斷試管苗是否攜帶A 病毒。檢測結(jié)果顯示，試驗材料無A 病毒。

5、M（PVM）病毒檢測結(jié)果

此類病毒又被稱為小葉病毒病，傳播方式與馬鈴薯A 病毒傳播方式相同。M 病毒會造成馬鈴薯植株心葉的葉柄長勢向上，復(fù)葉面積變小，并且葉面光滑度下降，呈非規(guī)則狀。

試驗試管苗經(jīng)DAS-ELISA 檢測，得出光密度值，并對比試驗結(jié)果，表明馬鈴薯M 病毒攜帶率為10%。病毒防控人員需做好準備工作，避免M 病毒傳播擴大。

6、PLRV（卷葉病毒）檢測結(jié)果

卷葉病毒發(fā)病部位主要在馬鈴薯植株上部葉片，小葉底部易感染卷葉病毒。一般來說，病毒感染初期無明顯癥狀，感染末期發(fā)現(xiàn)葉片顏色改變，并且塊莖薯肉組織壞死。

使用DAS-ELISA 檢測法得知試管苗光密度值，檢測結(jié)果顯示，試管苗帶卷葉病毒概率為10%，說明馬鈴薯托脫毒處理工作刻不容緩。

四、防治措施

根據(jù)檢測結(jié)果分析可知，馬鈴薯攜帶病毒的類型為PVX、PVY、PVS、PVA、PVM、PLRV。

PVX 病毒載體為種薯，需嚴格按照質(zhì)控要求培育薯種，大大降低PVX 病毒發(fā)生率。優(yōu)選馬鈴薯種，以環(huán)境適應(yīng)性強、品質(zhì)高、抗病性強為基本選種標準，可以從源頭控制病毒病。目前，各地區(qū)建立無菌種薯繁育基地，滿足無病毒種薯大量采購需求；同時，研發(fā)脫毒技術(shù)，為脫毒種薯培育提供技術(shù)支持。需注意的是，種田地區(qū)應(yīng)具備氣溫低、緯度高、風(fēng)速快等特征，這是培育脫毒種薯、無菌種薯的基本條件。當脫毒種苗快速更新，意味著破壞了病毒病累積條件。此外，需堅持科學(xué)化種植原則，種植在砂壤土上，且地塊灌溉便利、排水良好[3]。選定種植地之后需精細整地，適當施加農(nóng)家肥，滿足馬鈴薯生長初期的養(yǎng)分需求。

Y（PVY）病毒檢測、S（PVS）病毒檢測結(jié)果顯示，蚜蟲是病毒傳播載體，可通過調(diào)整種植密度來防治蚜蟲，降低PVY、PVS 等病毒發(fā)生率。一般來說，適宜的種植密度為每公頃9.8 萬株，采用大行距、小株距播種方式。此外，播種時適當投放防蚜顆粒劑，切斷蚜蟲攜帶病毒病的途徑。初期發(fā)現(xiàn)蚜蟲后，每隔6～9 天噴施滅蚜蟲藥，可使用30%噻蟲嗪拌種觸殺、胃毒。

根據(jù)PLRV（卷葉病毒）檢測結(jié)果可知，馬鈴薯植株上部葉片是病毒顯現(xiàn)的主要部位，尤其是小葉底部，最易感染卷葉病毒，一旦發(fā)現(xiàn)中心病株應(yīng)及時拔除，并對中心病株50 m 范圍內(nèi)噴施內(nèi)吸性殺菌劑進行控制，可選用68%精甲霜靈.代森錳鋅水分散粒劑(金雷)。確定馬鈴薯感染病毒病之后，根據(jù)發(fā)病嚴重程度相應(yīng)制定防治措施，避免病毒病擴散。