牛 敏，楊西超，閆美茜，李 英

痛風性關(guān)節(jié)炎(GA)是臨床常見的急性炎癥性關(guān)節(jié)病變，是尿酸鹽晶體沉積在關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)的周圍軟組織所致[1]。有資料顯示，我國GA患病率為1%～3%，高發(fā)年齡段在50歲左右，且逐漸年輕化[2]。該病發(fā)病機制復雜，與飲酒、富含嘌呤飲食、環(huán)境溫度等多種因素密切相關(guān)。瘦素(LEP)是炎癥相關(guān)指標，能參與骨代謝，可作用于成骨細胞抑制骨形成，其與細胞外基質(zhì)合成、降解失衡相關(guān)[3]。缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)是細胞在低氧條件下產(chǎn)生的一種核轉(zhuǎn)錄因子，可形成二聚體，引起細胞對缺氧反應的應答[4]。過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)為脂聯(lián)素信號傳導的重要信號分子，參與機體內(nèi)外抗炎反應[5-6]。本研究通過檢測原發(fā)性GA患者血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達，分析三者與原發(fā)性GA的關(guān)系及影響發(fā)病的危險因素。

1 資料與方法

1.1一般資料 整理2018年2月—2020年10月西安交通大學附屬西安市紅會醫(yī)院收治的原發(fā)性GA患者的臨床資料。①納入標準：均符合2015年美國風濕病學會GA的診斷標準[7]；患者和(或)家屬簽署知情同意書；納入研究前1個月內(nèi)未服用影響激素水平的藥物，且未進行相關(guān)治療者。②排除標準：腎臟疾病、心血管疾病引起的繼發(fā)性痛風者；合并感染或自身免疫性疾病者；臨床資料或影像學資料缺失者。本研究最終納入164例原發(fā)性GA作為研究對象，其中原發(fā)急性痛風性關(guān)節(jié)炎(AGA)80例為AGA組，原發(fā)非急性痛風性關(guān)節(jié)炎(NAGA)84例為NAGA組。選取同期進行體檢健康者85例作為對照組。AGA組男44例，女36例；年齡47～79(52.14±3.56)歲；病程3.3～14.1(6.25±1.63)年；有長期富含嘌呤飲食史48例。NAGA組男45例，女39例；年齡45～77(52.55±3.69)歲；病程3.9～14.7(6.74±1.77)年；有長期富含嘌呤飲食史52例。對照組男48例，女37例；年齡50～78(52.84±3.78)歲。3組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準執(zhí)行。

1.2方法

1.2.1LEP、HIF-1α檢測：AGA組及NAGA組于入院48 h內(nèi)，對照組于體檢當日采集肘靜脈血5 ml，以3000 r/min離心15 min，提取上層血清于-80 ℃冰箱凍存待測。應用酶聯(lián)免疫吸附試驗對LEP、HIF-1α進行檢測。試劑盒購自貝克曼庫爾特商貿(mào)(中國)有限公司，具體操作步驟參見試劑盒說明書。LEP正常范圍：84～110 pg/ml，≥110 pg/ml視為異常升高[8]。HIF-1α正常范圍：17～32 ng/L，≥32 ng/L視為異常升高[9]。

1.2.2PPARγ mRNA表達檢測：采用實時熒光定量PCR檢測3組血清PPARγ mRNA表達水平。依據(jù)GeneBank中人PPARγ、18s-rRNA基因序列設計引物，引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，PPARγ上游引物：5'-TGAGGAGAAGTCACACTCTG-3'，下游引物：5'-TGGGTCACCTCTTGTGAATG-3'。18s-rRNA上游引物：5'-CAGCATCAGGTGCAACGTGT-3'，下游引物：5'-GGACCTGCCTGTATTTTCCA-3'。PCR反應條件：94 ℃ 2 min；92 ℃ 60 s，56 ℃ 30 s，74 ℃ 30 s，連續(xù)進行38個循環(huán)。采用相對定量法計算目的基因mRNA表達水平。PPARγ mRNA正常范圍：<0.41，≥0.41視為異常升高[10]。

1.2.3臨床指標檢測：3組肌酐、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)采用美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的LH750全自動血液分析儀檢測。測量3組的身高和體質(zhì)量，并計算體質(zhì)量指數(shù)(BMI)。

1.3觀察指標 比較3組血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達量，分析三者與原發(fā)性GA患者臨床指標的相關(guān)性，以及影響GA發(fā)病的危險因素。

2 結(jié)果

2.1血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達量比較 AGA組和NAGA組血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達量均高于對照組，且AGA組高于NAGA組(P<0.05)。見表1。

表1 急性、非急性痛風性關(guān)節(jié)炎和體檢健康者3組血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達量比較

2.2臨床指標比較 AGA組和NAGA組BMI、肌酐、LDL-C水平均高于對照組，且AGA組高于NAGA組(P<0.05)。AGA組和NAGA組HDL-C水平低于對照組，且AGA組低于NAGA組(P<0.05)。見表2。

表2 急性、非急性痛風性關(guān)節(jié)炎和體檢健康者3組臨床指標比較

2.3相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析顯示，血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達量與原發(fā)性GA患者BMI、肌酐、LDL-C均呈正相關(guān)，與HDL-C呈負相關(guān)(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表3 血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達量與原發(fā)性GA患者臨床指標相關(guān)性

2.4影響GA發(fā)病的危險因素分析 年齡≥65歲、高血壓病史、糖尿病史、長期富含嘌呤飲食史、吸煙史、飲酒史、LEP異常升高、HIF-1α異常升高、PPARγ mRNA異常升高、肌酐>110 μmol/L、LDL-C>3.37 mmol/L、HDL-C<1.16 mmol/L為影響GA發(fā)病的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響GA發(fā)病的多因素Logistic回歸分析

3 討論

GA是由機體過量嘌呤降解導致血液循環(huán)中尿酸增多，晶體化尿酸鹽沉積過多導致的。GA發(fā)病與調(diào)節(jié)嘌呤代謝的遺傳因素密切相關(guān)，如嘌呤代謝催化酶缺陷使尿酸生成過多等。相關(guān)流行病學資料顯示，在遺傳及環(huán)境因素的作用下，長期飲酒及攝入過多紅肉、海鮮等富含嘌呤的食物均是導致GA發(fā)病的關(guān)鍵因素[11]。該病急性發(fā)作時，肢體活動功能嚴重受限，尿酸鹽晶體沉積在踝關(guān)節(jié)等部位，引起關(guān)節(jié)腫脹及劇烈疼痛。盡早診斷GA，并判斷病情嚴重程度，有助于實施針對性治療，改善患者預后。

研究發(fā)現(xiàn)，LEP是一種肽類激素，具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能的作用[12]。LEP能抑制骨形成，主要原因為其能與成骨細胞特異性結(jié)合，致成骨細胞喪失活性。近年研究發(fā)現(xiàn)，LEP可與多種免疫細胞表面的受體結(jié)合引起免疫應答，在炎癥及免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，與免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[13]。HIF-1α是缺氧狀態(tài)下細胞產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄活性核蛋白，參與機體缺氧代償反應的全過程，并調(diào)控炎癥微環(huán)境代謝[14]。PPARγ屬核受體超家族成員，在多種免疫活性細胞中高表達，參與調(diào)控糖脂代謝、脂肪細胞分化及炎癥反應[15-17]。

本研究結(jié)果顯示，AGA組和NAGA組血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達量均高于對照組，且AGA組高于NAGA組，與既往文獻報道結(jié)果相符[18]?？梢娙咴贕A患者血清中表達水平較高，可能與病情進展相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，AGA組和NAGA組BMI、肌酐、LDL-C水平均高于對照組，且AGA組高于NAGA組。AGA組和NAGA組HDL-C水平低于對照組，且AGA組低于NAGA組。可見AGA及NAGA患者BMI、肌酐、LDL-C、HDL-C水平均呈異常狀態(tài)。本研究中，血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達量與BMI、肌酐、LDL-C呈正相關(guān)，與HDL-C呈負相關(guān)，因此可以推測LEP、HIF-1α、PPARγ可能為誘發(fā)GA的基礎，參與脂代謝，引起急性炎癥反應，且可產(chǎn)生協(xié)調(diào)作用。既往研究報道，BMI、肌酐、LDL-C、HDL-C均為發(fā)生GA的獨立危險因素[19-21]。本研究通過多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，年齡≥65歲、高血壓病史、糖尿病史、長期富含嘌呤飲食史、吸煙史、飲酒史、LEP異常升高、HIF-1α異常升高、PPARγ mRNA異常升高、肌酐>110 μmol/L、LDL-C>3.37 mmol/L、HDL-C<1.16 mmol/L均為影響GA發(fā)病的獨立危險因素，進一步證實上述觀點。提示臨床可通過調(diào)控上述危險因素對GA患者進行干預，以控制病情進展。

綜上所述，原發(fā)性GA患者血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表達量均升高，三者異常升高是GA發(fā)病的危險因素。臨床可通過三者判斷GA病情，為合理制定治療方案提供參考。