高飛，胡澤斌，孫楠，賈崢，游延軍，孫晶，曲守方，黃杰

·技術(shù)與方法·

尿素測定試劑盒質(zhì)量分析探索

高飛*，胡澤斌*，孫楠，賈崢，游延軍，孫晶，曲守方，黃杰

100050 北京，中國食品藥品檢定研究院體外診斷試劑檢定所（高飛、胡澤斌、孫楠、賈崢、孫晶、曲守方、黃杰）；610015 成都，四川省藥品技術(shù)檢查中心（游延軍）

尿素（BUN）是客觀反映腎小球濾過率的常規(guī)檢測指標(biāo)，可運用于臨床評估腎功能的損害[1]。近來，該項指標(biāo)用于妊娠期孕婦檢查的研究較多，對于減少妊娠并發(fā)癥，保證宮內(nèi)胎兒正常發(fā)育具有重要意義[2]。也有報道顯示，該項指標(biāo)也可用于急性上消化道出血[3]及慢性心力衰竭患者血清的檢測[4-5]，說明尿素檢測在臨床具備廣泛的應(yīng)用價值。我國臨床檢測尿素的濃度值廣泛采用紫外分光光度生化分析法。目前，作為適用于全自動生化分析檢測的體外診斷試劑，尿素測定試劑盒在國內(nèi)的應(yīng)用存在三大特點：一是檢測平臺多，常見平臺有日立系列、貝克曼系列、奧林巴斯系列、東芝系列、羅氏系列、西門子系列、雅培系列、邁瑞系列等；二是參考品種類多，國內(nèi)企業(yè)采用的溯源至參考物質(zhì)的定標(biāo)校準(zhǔn)品和準(zhǔn)確度檢測用參考品種類繁多，常見的有日本 JCCRM521、美國 SRM-909c、中檢院 360012-201601 等；三是考核指標(biāo)及考核樣本種類多[6]，國內(nèi)企業(yè)制訂的技術(shù)要求中的考核指標(biāo)不一致，特別是準(zhǔn)確度項目，用來考核的樣本種類有企業(yè)校準(zhǔn)品、企業(yè)自產(chǎn)質(zhì)控品、進口質(zhì)控品、國產(chǎn)質(zhì)控品、進口參考物質(zhì)和國產(chǎn)參考物質(zhì)。因此，通過對市場現(xiàn)有的試劑盒進行準(zhǔn)確度方法學(xué)評價可為統(tǒng)一技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)，保障不同來源的參考物質(zhì)具有可比性，減少臨床重復(fù)檢測。同時，通過采用不同來源標(biāo)準(zhǔn)品對試劑盒準(zhǔn)確度技術(shù)指標(biāo)的檢測，可以達(dá)到質(zhì)量評價與控制的目的。準(zhǔn)確度是客觀評價測定值與標(biāo)示值之間符合程度的重要指標(biāo)。通過對不同來源參考物質(zhì)的對比檢測分析，可以考核測試結(jié)果與標(biāo)示值間的一致程度并分析比較參考物質(zhì)之間的差異性，從而明確試劑檢測尿素的結(jié)果是否滿足臨床檢測的需要。因此，本次研究計劃選擇準(zhǔn)確度這項重要指標(biāo)，使用 5 種不同靶值的國際和國家參考物質(zhì)，以相同的方式配制樣本，在不同生產(chǎn)企業(yè)各自適用的平臺上進行測試，以期實現(xiàn)檢驗結(jié)果的橫向比較。

1 材料與方法

1.1 儀器與樣本

1.1.1 儀器 7180 全自動生化分析儀為日本日立公司產(chǎn)品；UPS-B6K 純水儀為北京天創(chuàng)尚邦儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品；5 ～ 1000 μl 移液器為德國 Eppendorf 公司產(chǎn)品。

1.1.2 樣本 自北京、上海、天津、河北、江蘇、江西、四川、貴州、山東、安徽、湖南、浙江、吉林、遼寧、廣西、福建、河南、湖北、廣東抽取有效監(jiān)督抽驗的試劑盒 42 批，其中國產(chǎn)試劑盒 37 批次，進口試劑盒 5 批次。各試劑盒配套質(zhì)控品及抽檢企業(yè)提供工作校準(zhǔn)品及主校準(zhǔn)品。臨床用尿素國際有證參考物質(zhì)有日本 ReCCS 標(biāo)準(zhǔn)品，批號：JCCRM521-13M、H、HH，靶值：（4.1 ± 0.1）、（9.8 ± 0.2）、（16.1 ± 0.2）mmol/L；美國 NIST 標(biāo)準(zhǔn)品[7]，批號：SRM-909c，靶值：（4.321 ± 0.089）mmol/L；中國食品藥品檢定研究院尿素、尿酸和總蛋白復(fù)合冰凍人血清國家標(biāo)準(zhǔn)品，批號：360012-201601，靶值：（5.68 ± 0.17）mmol/L。

1.2 方法

1.2.1 尿素測定試劑盒的采集 經(jīng)查閱國家藥品監(jiān)督管理局相關(guān)資料及官網(wǎng)數(shù)據(jù)，在全國范圍內(nèi) 19 個省和直轄市共抽取了 42 家生產(chǎn)企業(yè)的共計 42 批尿素測定試劑盒，涉及 39 個批準(zhǔn)文號。同時采用具有溯源性的國際和國家標(biāo)準(zhǔn)品對不同來源的尿素測定試劑盒的準(zhǔn)確度指標(biāo)進行檢測。

1.2.2 檢測平臺的確定 利用分光光度比色法測定尿素中酶催化反應(yīng)產(chǎn)物的吸光度值從而判斷尿素含量。本次實驗采用應(yīng)用上述原理的全自動生化分析儀平臺進行檢測。

1.2.3 結(jié)果判定方法 采用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進行結(jié)果判定，依據(jù)中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《尿素測定試劑盒（酶偶聯(lián)監(jiān)測法）》（YY/T 1201-2013）[8]對標(biāo)準(zhǔn)品的測定值與標(biāo)示值計算相對偏差。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，尿素的實測值與標(biāo)示值的相對偏差應(yīng)在 ±15.0% 范圍內(nèi)。

2 結(jié)果

2.1 國家標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確度檢測結(jié)果

尿素、尿酸和總蛋白復(fù)合冰凍人血清國家標(biāo)準(zhǔn)品的檢測結(jié)果符合包括：42 批試劑盒中相對偏差值在 ±15.0% 范圍的數(shù)量為 36 批，符合率為 85.7%；相對偏差值在 ±5.0% 范圍的數(shù)量為 28 批，符合率為 66.7%（圖 1）。

2.2 國際標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確度檢測結(jié)果

日本 ReCCS 標(biāo)準(zhǔn)品 JCCRM521-13M、H、HH 的檢測結(jié)果符合包括 42 批試劑盒中相對偏差值在 ±15.0% 范圍的數(shù)量分別為 35 批、36 批、36 批，符合率分別為 83.3%、85.7%、85.7%；相對偏差值在 ±5.0% 范圍的數(shù)量為 27批、26 批、22 批，符合率分別為 64.3%、61.9%、52.4%。結(jié)果統(tǒng)計詳見圖 2。

美國 NIST 標(biāo)準(zhǔn)品的檢測結(jié)果符合包括 42 批試劑盒中相對偏差值在 ±15.0% 范圍的數(shù)量為 31 批，符合率為73.8%；相對偏差值在 ±5.0% 范圍的數(shù)量為 4 批，符合率為 9.5%。結(jié)果統(tǒng)計詳見圖 3。

圖 1 國家參考品相對偏差符合結(jié)果分布

圖 2 日本 ReCCS 標(biāo)準(zhǔn)品相對偏差符合結(jié)果分布

圖 3 美國 NIST 標(biāo)準(zhǔn)品相對偏差符合結(jié)果分布

表 1 5 種標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確度結(jié)果均不符合的偏差程度

2.3 準(zhǔn)確度不符合結(jié)果的5 種標(biāo)準(zhǔn)品的偏差程度

42 批次產(chǎn)品中5 種不同靶值的標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果均不符合為 6 批，不符合率為 14.3%，其偏差程度詳見表1。

3 討論

準(zhǔn)確性是指測得量值與真量值間的一致程度，用于評價產(chǎn)品測量結(jié)果的可信性。如果準(zhǔn)確性程度不高，測試結(jié)果就會存在假陰性與假陽性，給臨床使用造成誤導(dǎo)。本次研究中各企業(yè)試劑盒的準(zhǔn)確度項目數(shù)據(jù)有一定差異，且個別企業(yè)的產(chǎn)品偏差程度較高。分析原因可能為除了沒有使用統(tǒng)一的參考物質(zhì)[9]導(dǎo)致產(chǎn)品溯源不一致外，還包括各家試劑盒試劑原料來源不同、穩(wěn)定劑選擇不一致。究其原因主要是由于沒有強制性標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)致當(dāng)前國內(nèi)生產(chǎn)的參考物質(zhì)沒有得到企業(yè)的重視，缺乏普遍的實際應(yīng)用性。這種情況客觀上也加大了監(jiān)督抽驗及注冊檢驗監(jiān)管的難度，導(dǎo)致無法客觀地評價試劑盒的重要指標(biāo)。因此，就更需要企業(yè)在試劑盒的研發(fā)中盡量做到溯源一致，才能便于監(jiān)督抽驗與考核，也更便于臨床檢測出現(xiàn)問題時的產(chǎn)品溯源。本次研究采用相同的國際及國家標(biāo)準(zhǔn)品對不同來源的尿素測定試劑盒進行檢測也是追求采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對產(chǎn)品同一個性能指標(biāo)進行考核的探索和嘗試。

目前，國產(chǎn)尿素測定試劑盒采用的開放檢測平臺及參考物質(zhì)種類繁多，部分平臺的參考物質(zhì)具有特殊的溯源性，不利于該類產(chǎn)品的監(jiān)管，通過對市場現(xiàn)有的試劑盒進行方法學(xué)檢測評價可為統(tǒng)一技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)，保障不同原理檢測方法具有可比性，減少臨床重復(fù)檢測，而采用具有溯源性的參考物質(zhì)作為方法學(xué)評價的工具是保證量值可以有效傳遞的重要手段[10]。并且，開放平臺具備采用統(tǒng)一溯源性參考物質(zhì)[11]作為定標(biāo)校準(zhǔn)品溯源物質(zhì)的可能性。因此，建議企業(yè)盡量采用國內(nèi)現(xiàn)有的具有溯源性的參考物質(zhì)作為定標(biāo)校準(zhǔn)品[12]的溯源物質(zhì)，同時依據(jù)行標(biāo)采用具有溯源性的國際或國家參考物質(zhì)作為準(zhǔn)確性檢測的樣本，這樣不但可以增強監(jiān)督檢驗考核的客觀性與公正性，也可以促進企業(yè)提升試劑盒的質(zhì)量以滿足參考物質(zhì)的要求，進而確保臨床檢測結(jié)果的真實有效[9]及可溯源性，從而更有利于保障廣大人民群眾的生命健康。

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10.3969/j.issn.1673-713X.2021.06.010

黃杰，Email：jhuang5522@126.com；曲守方，Email：qushoufang@126.com

2021-09-10

*同為第一作者