林文耀，陳炳全，尚 策，高日明，劉國民

（金宇保靈生物藥品有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010030）

非洲豬瘟（African Swine fever, ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine fever virus, ASFV）感染家豬和野豬引起的一種急性、出血性、烈性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病，該病也是我國重點(diǎn)防范的一類動(dòng)物疫病。其特征是發(fā)病過程短，最急性和急性感染死亡率高達(dá)100%，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱（達(dá)40～42 ℃），心跳加快，呼吸困難，部分咳嗽，眼、鼻有漿液性或黏液性膿性分泌物，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié)、腎、胃腸黏膜明顯出血，非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似[1-2]。自2018年8月傳入我國以來，非洲豬瘟給我國養(yǎng)豬生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，成為我國養(yǎng)豬業(yè)的頭號(hào)大敵。在非洲豬瘟1周年之際，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部表示要“堅(jiān)決打好打贏非洲豬瘟防控攻堅(jiān)戰(zhàn)、持久戰(zhàn)”。近幾年的防非經(jīng)驗(yàn)告訴我們，依靠生物安全防控非洲豬瘟是可行的，但是對(duì)其他重要烈性傳染病的防控也不能掉以輕心。臨床上也經(jīng)常發(fā)生非瘟防控很好的豬場(chǎng)暴發(fā)藍(lán)耳病或偽狂犬病等疾病，說明疫苗免疫仍然是防控重大傳染病的有效手段。

無針注射器（Needle-free Injection device）是一種不需要通過針頭實(shí)施給藥的新型注射器，基本結(jié)構(gòu)主要包括動(dòng)力源、動(dòng)力儲(chǔ)存裝置、傳動(dòng)裝置以及制動(dòng)部件。其工作原理首先經(jīng)過動(dòng)力源，通過傳動(dòng)裝置將能量輸送到動(dòng)力存儲(chǔ)裝置中，制動(dòng)部件鎖緊動(dòng)力存儲(chǔ)裝置，待收到觸發(fā)信號(hào)后，制動(dòng)裝置瞬間釋放，動(dòng)力存儲(chǔ)裝置中的動(dòng)力撞擊存藥腔內(nèi)的活塞桿，將藥物以注射流的形式噴射出去，穿透皮膚形成超微細(xì)射流，持續(xù)射流的停滯壓力使藥液在孔洞末端以近似球狀的形式向孔洞四周擴(kuò)散，從而實(shí)現(xiàn)皮下或肌肉注射[3-4]，有效杜絕針頭傳播疫病的風(fēng)險(xiǎn)。

實(shí)際的養(yǎng)豬生產(chǎn)中，仔豬在60～70日齡左右會(huì)進(jìn)行豬瘟二免，及偽狂犬病和口蹄疫的首次肌肉注射，提示豬瘟、偽狂犬病、口蹄疫疫苗聯(lián)合免疫在生產(chǎn)上是可行的，可有效降低免疫次數(shù)，免疫效果確實(shí)[5]。本研究比較針頭注射和無針注射的不同免疫方式，評(píng)估“口蹄疫+豬瘟+偽狂犬病”組合免疫的效果，為非洲豬瘟常態(tài)化下豬群的疫病防控提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 疫苗

豬口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗（Re-O/MYA98/JSCZ/2013株+Re-A/WH/09，某生物藥品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20139002），豬偽狂犬病活耐熱保護(hù)劑活疫苗（國內(nèi)最新分離株C株，江蘇某生物藥品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)19225012），豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源，遼寧某生物股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)19335029）。

1.2 無針注射器

無針注射器由武漢市正華精機(jī)技術(shù)發(fā)展有限公司提供，以CO2為動(dòng)力，采用壓力射流技術(shù)，將疫苗通過高壓和微孔形成很大動(dòng)能的射流直接將疫苗注射到體內(nèi)。

1.3 試驗(yàn)豬場(chǎng)

某母豬存欄2 000頭自繁自養(yǎng)豬場(chǎng)，試驗(yàn)周期：2020年6月20日開始，7月20日結(jié)束。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取180日齡的后備母豬200頭，隨機(jī)分為2組，每組100頭，試驗(yàn)分組見表1。具體操作為：口蹄疫滅活疫苗作為稀釋液稀釋豬瘟活疫苗，然后再稀釋豬偽狂犬病活耐熱保護(hù)劑活疫苗。通過使用方法創(chuàng)新形成口蹄疫-豬瘟-偽狂犬病三聯(lián)苗。首次免疫前、免疫后30 d每組隨機(jī)采血15頭，分離血清，-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆?，分別進(jìn)行豬口蹄疫O型抗體、豬偽狂犬病gB抗體、豬瘟抗體的檢測(cè)。

表1 試驗(yàn)分組

1.5 統(tǒng)計(jì)副反應(yīng)豬只數(shù)量

記錄疫苗注射2小時(shí)內(nèi)副反應(yīng)：可視黏膜發(fā)紺，體溫升高，采食量下降，呼吸急促，站立不穩(wěn)，肌肉震顫，倒地，口吐白沫等。

1.6 血清抗體檢測(cè)

血清抗體檢測(cè)均按照相應(yīng)檢測(cè)試劑盒說明書。FMD O 型病毒抗體液相阻斷ELISA試劑盒：內(nèi)蒙古金邁詩生物科技有限公司產(chǎn)品；豬瘟（CSFAb）病毒抗體檢測(cè)試劑盒：美國IDEXX公司產(chǎn)品；豬偽狂犬病病毒gB抗體ELISA試劑盒：荷蘭百測(cè)BioChek公司產(chǎn)品。FMD O 型抗體判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)照臨界值，抗體效價(jià)＜1∶64時(shí)判為陰性，≥1∶64時(shí)判為陽性。CSF抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：阻斷值＜40% 時(shí)判為陰性，≥40% 時(shí)判為陽性。豬偽狂犬病gB抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：效價(jià)范圍≥1 071判為陽性。

2 結(jié)果

2.1 針頭注射與無針注射的副反應(yīng)比例

針頭注射與無針注射組的豬只均未出現(xiàn)可視黏膜發(fā)紺，體溫升高，采食量下降，呼吸急促，站立不穩(wěn)，肌肉震顫，倒地，口吐白沫等副反應(yīng)現(xiàn)象。

2.2 針頭注射與無針注射各疫苗抗體陽性率的檢測(cè)結(jié)果

如表2所示，針頭注射組與無針注射組豬瘟抗體、口蹄疫O型抗體、偽狂犬病gB抗體的陽性率均為100%。

表2 比較不同免疫方式各疫苗的抗體陽性率

2.3 針頭注射與無針注射豬瘟疫苗的抗體檢測(cè)結(jié)果

如表3所示，針頭注射組的豬瘟抗體平均阻斷值為88.37%，無針注射組為86.53%，均大于40%。

表3 比較不同免疫方式豬瘟疫苗的抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 針頭注射與無針注射偽狂犬病疫苗的gB抗體檢測(cè)結(jié)果

如表4所示，針頭注射組的偽狂犬病gB抗體平均值為9 243.42，無針注射組為9 228.64，均達(dá)到優(yōu)良的免疫效果。

表4 比較不同免疫方式偽狂犬病疫苗的gB抗體檢測(cè)結(jié)果

3 分析與討論

非洲豬瘟的暴發(fā)，使我國養(yǎng)豬業(yè)面臨“老病未除，又添新病”的嚴(yán)重挑戰(zhàn)。非洲豬瘟常態(tài)化使得疫病越來越復(fù)雜，為減少人豬接觸，減少免疫次數(shù)導(dǎo)致的免疫應(yīng)激及針頭傳播疫病的風(fēng)險(xiǎn)，需要重構(gòu)現(xiàn)有的免疫程序及應(yīng)用新的免疫方式。與傳統(tǒng)的針頭注射器相比，無針注射可以阻斷病原微生物交叉感染、有效防止胴體損傷和針頭斷裂等風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生，從而避免注射針折斷留在動(dòng)物體內(nèi)造成食品安全事故[6]、減少動(dòng)物創(chuàng)傷疼痛，符合動(dòng)物福利要求、提高肉品質(zhì)等。

本研究比較針頭注射或無針注射兩種不同的免疫方式，評(píng)估“口蹄疫+豬瘟+偽狂犬病”組合免疫的效果及副反應(yīng)比例，發(fā)現(xiàn)針頭注射或無針注射的豬只均未出現(xiàn)副反應(yīng)，說明無針多防是安全的。在抗體陽性率方面，針頭注射組與無針注射組的豬瘟抗體、口蹄疫O型抗體、偽狂犬病gB抗體陽性率均為100%。比較兩種不同免疫方式的豬瘟免疫效果，針頭注射組與無針注射組的豬瘟抗體平均阻斷值分別為88.37% 及86.53%，均大于40%，而且變異系數(shù)均小于20%，說明達(dá)到了良好的群體免疫效果。偽狂犬病疫苗的gB抗體檢測(cè)結(jié)果也提示兩種不同免疫方式同樣產(chǎn)生較高的gB抗體，說明無針注射器+組合免疫的“無針多防”方式免疫效果確實(shí)，可以在生產(chǎn)臨床推廣?！盁o針多防”成為疫病防控的重要手段，同時(shí)可以降低工人的勞動(dòng)強(qiáng)度，提高養(yǎng)殖效益，實(shí)現(xiàn)減負(fù)增效的目標(biāo)，應(yīng)對(duì)豬價(jià)低迷的寒冬。