吳明超 羅懿 熊燕 曹銘華

[摘要] 目的 探討江西漢族人群散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤的影響因素及其對彈性蛋白（ELN）、LIM 激酶1（LIMK-1）的影響，為臨床提供一定的理論參考。 方法 回顧性分析2016年6月至2020年6月我院收治的江西漢族散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤患者100例及同期收治的100名健康人群臨床資料，分別視為疾病組和對照組，同時測定ELN、LIMK-1基因片段，分析散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤的危險因素，比較兩組基因多態(tài)性差異。 結(jié)果 兩組在性別、年齡、血壓水平、血糖水平、吸煙頻率、家族史方面比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Logistic多因素回歸分析顯示，高齡、高血壓、高血糖、高吸煙頻率、家族史是顱內(nèi)動脈瘤的獨立危險因素（P<0.01）。兩組ELN基因的 3'-UTR（+502）、3'-UTR（+659）和LIMK-1基因的Pro（-961）、Pro（-428）、Pro（-187）五個位點的分布頻率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 高齡、高血壓、高血糖、高吸煙頻率是顱內(nèi)動脈瘤發(fā)病的危險因素，ELN、LIMK-1基因多態(tài)性對江西漢族人群顱內(nèi)動脈瘤有明顯的影響。

[關(guān)鍵詞] 顱內(nèi)動脈瘤;江西漢族;基因多態(tài)性;彈性蛋白;LIM 激酶1

[中圖分類號] R743.4? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）28-0063-04

Influencing factors of sporadic intracranial aneurysms and their effects on ELN and LIMK-1 gene polymorphisms in Han population in Jiangxi Province

WU Mingchao? ?LUO Yi? ?XIONG Yan? ?CAO Minghua

Department of Neurology， Jingdezhen First People′s Hospital in Jiangxi Province， Jingdezhen? ?333000， China

[Abstract] Objective To explore the influencing factors of sporadic intracranial aneurysms in Han population in Jiangxi Province and their effects on ELN and LIMK-1， so as to provide certain theoretical reference for clinical practice. Methods Clinical data of 100 sporadic intracranial aneurysm patients and 100 healthy people who were admitted to our hospital from June 2016 to June 2020 were retrospectively analyzed， and treated as the disease group and the control group， respectively. At the same time， ELN and LIMK-1 gene fragments were detected to analyze the risk factors for sporadic intracranial aneurysms， and the differences of gene polymorphism between the two groups were compared. Results Statistically significant differences were observed in gender， age， blood pressure level， blood glucose level， smoking frequency and family history between the two groups（P<0.05）. Logistic multivariate regression analysis showed that the advanced age， hypertension， hyperglycemia， high smoking frequency and family history were independent risk factors for intracranial aneurysms （P<0.01）. The 3′-UTR （+502）， 3′-UTR （+659） of ELN gene and the five gene loci， Pro （-961）， Pro （-428） and Pro （-187） of LIMK-1 gene were significantly different between the two groups （P<0.05）. Conclusion The advanced age， hypertension， hyperglycemia and high smoking frequency are risk factors for intracranial aneurysms. ELN and LIMK-1 gene polymorphisms are significantly effects on intracranial aneurysms in Han population in Jiangxi Province.

[Key words] Intracranial aneurysm; Han population in Jiangxi Province; Gene polymorphism; ELN; LIMK-1

顱內(nèi)動脈瘤在臨床上較為常見，約占全部腫瘤疾病的2%，其中3%～6%的30歲以上人群帶有無癥狀的未破裂動脈瘤[1-2]。對顱內(nèi)動脈瘤發(fā)病患者而言，30 d內(nèi)病死率為46%[3]。需要注意的是，若顱內(nèi)動脈瘤患者未發(fā)生破裂，且能夠及時治療，只有不到3.5%的病死率和6%的致殘率，故對顱內(nèi)動脈瘤早期診斷成為治療的關(guān)鍵[4]。盡管顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)病率高，并且破裂后的后果非常嚴(yán)重，但對顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)病機制目前仍不能完全明確。為此，本研究通過收集100例動脈瘤患者及與其匹配的健康志愿者血樣，記錄相關(guān)基本資料，同時進行生化指標(biāo)及基因檢測，探討性別、年齡、高血壓、吸煙、血糖及ELN、LIMK-1基因多態(tài)性與江西漢族人群散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤的相關(guān)性，為臨床顱內(nèi)動脈瘤的早期診斷提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取我院2016年6月至2020年6月收治的100例顱內(nèi)動脈瘤患者及來自我院體檢中心的健康人員100名的臨床資料進行回顧性分析，分別視為疾病組和對照組。疾病組男35例，女65例;年齡26～78歲，平均（62.31±3.16）歲;血壓水平90/120 mmHg 4例，90～110/121～139 mmHg 52例，110/140 mmHg 44例;血糖水平<7 mmol/L 6例，7～10 mmol/L 50例，>10 mmol/L 44例;吸煙頻率<5支/d 16例，5～15支/d 64例，>15支/d 20例;家族史有43例，無57例。對照組男52例，女48例;年齡23～76歲，平均（62.96±3.20）歲;血壓水平90/120 mmHg 16例，90～110/121～139 mmHg 60例，110/140 mmHg 24例;血糖水平<7 mmol/L 15例，7～10 mmol/L 65例，>10 mmol/L 20例;吸煙頻率<5支/d 29例，5～15支/d 60例，>15支/d 11例;家族史有53例，無47例。

所有入選者之間無血緣關(guān)系，此研究已獲得景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的同意，所有參加者均簽署知情同意書，無法簽署者由直系親屬代簽。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)頭部核磁共振血管成像（MRA）、計算機斷層掃描血管成像（CTA）或數(shù)字減影血管造影（DSA）等明確診斷[5];②精神和認(rèn)知正常，意識清晰，可配合完成基本調(diào)查研究;③自愿參與，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①健康體檢者排除顱內(nèi)動脈瘤及蛛網(wǎng)膜下腔出血者;②合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤者。

1.2 方法

（1）血標(biāo)本采集：待受檢者簽署同意書后，采集10 mL肘靜脈血備用，經(jīng)EDTA抗凝后，保存于4℃的冰箱中。（2）基因組DNA 的制備及測定：①采用傳統(tǒng)酚/氯仿抽提法提取血液基因組DNA（gDNA）;②基因組DNA 濃度及純度的鑒定：取稀釋后1 μL DNA 溶液，使用微量Thermo 2000 C 紫外分光光度計測定吸光度OD 260/280 nm 值及全基因組DNA 的濃度。（3）ELN、LIMK-1基因SNPs 位點引物的設(shè)計及合成：在NCBI 網(wǎng)站GeneBank SNP數(shù)據(jù)庫下載ELN、LIMK-1基因的篩選出的5個SNPs 位點[3'-UTR（+502）、3'-UTR（+659）及LIMK-1基因的Pro（-961）、Pro（-428）、Pro（-187）]相對應(yīng)的基因組DNA序列。所有引物合成委托上海生工生物有限公司合成。（4）基因分型：①聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）;②水平多聚糖凝膠電泳驗證PCR擴增產(chǎn)物;③PCR 擴增產(chǎn)物使用混合純化酶純化;④SNaPshot 單堿基延伸法測序。（5）基因型判讀：如封三圖6所示。（6）引物序列參照文獻[6]。PCR 擴增產(chǎn)物測序驗證：用ELN、LIMK-1基因，ELN、LIMK-1基因和基因位點正反向引物法直接雙向測序。

1.3觀察指標(biāo)

分析江西漢族人群顱內(nèi)動脈瘤發(fā)生的危險因素，了解ELN、LIMK-1 基因多態(tài)性對江西漢族人群散發(fā)動脈瘤的影響。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 影響江西漢族人群顱內(nèi)動脈瘤的單因素分析

兩組在性別、年齡、血壓水平、血糖水平、吸煙、家族史各資料方面比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2相關(guān)因素的賦值

相關(guān)因素賦值情況如表2所示。

2.3江西漢族散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤的多因素回歸分析

Logistic多因素回歸分析顯示，高齡、高血壓、高血糖、高吸煙頻率、家族史是江西漢族散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤的獨立危險因素（P<0.01）。見表3。

2.4兩組基因多態(tài)性差異的比較

兩組ELN基因的 3'-UTR（+502）、3'-UTR（+659）和LIMK-1基因的Pro（-961）、Pro（-428）、Pro（-187）五個位點的分布頻率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

顱內(nèi)動脈瘤是臨床常見病和多發(fā)病，具有較高的發(fā)生率，會對人們的健康乃至生命安全構(gòu)成巨大的威脅，早已引起社會的廣泛關(guān)注。手術(shù)治療是顱內(nèi)動脈瘤的常見治療方式，科學(xué)合理地實施手術(shù)方案，對患者健康的改善有十分積極的意義。手術(shù)治療受到的影響因素諸多，加強對顱內(nèi)動脈瘤的影響因素調(diào)查分析，可對治療的進程產(chǎn)生積極的影響。為此，本研究就相關(guān)內(nèi)容展開分析。在針對顱內(nèi)動脈瘤的危險因素進行分析后發(fā)現(xiàn)，高齡、高血壓、高血糖、高吸煙頻率、家族史是江西漢族散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤發(fā)病的獨立危險因素（P<0.01），因此對于江西漢族人而言，應(yīng)當(dāng)從上述因素著手，加強對散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤的防治，做到具體問題具體分析。

至今，顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)病機制并不明確，學(xué)界對于其發(fā)病機制的探討仍在進行[7]。目前，基因研究是顱內(nèi)動脈瘤研究的重要方向之一。全基因組關(guān)聯(lián)研究已證實染色體4q31.23 上的EDNRA基因、染色體8q12上SOX基因、染色體9p21.3上的CDKN2A/CDKN2B/CDKN2BAS（ANRIL）基因、染色體10q24.32上的CNNM 2基因、染染色體18q11.2上的RBBP8基因及染色體12q22與顱內(nèi)動脈瘤的易感性相關(guān)[8]。但由于復(fù)雜的連鎖不平衡，種族構(gòu)成不同和潛在的遺傳變異與環(huán)境因素相互作用不同，同一種基因變異影響的大小根據(jù)種族不同而有差異，所以目前尚未找到與所有種族顱內(nèi)動脈瘤均相關(guān)的變異基因位點[9]。因此，對于顱內(nèi)動脈瘤的基因研究仍舊需進一步深入。

ELN基因位于7p11區(qū)，跨度約45 Kb，包含34個外顯子，不僅能編碼彈性蛋白，還能編碼Ⅰ型膠原蛋白A2[10]。彈性蛋白為一種細胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)蛋白，可以作為小分子物質(zhì)，調(diào)控血管內(nèi)皮細胞生成和平滑肌細胞的增殖[11-12]。LIMK-1是7p11 區(qū)上緊鄰彈性蛋白基因的另一個與顱內(nèi)動脈瘤相關(guān)基因，含有39 499 個堿基，具有16 個外顯子，該基因產(chǎn)生信使mRNA，可編碼LIMK-1 蛋白[13-14]。目前ELN 基因多態(tài)性與動脈瘤的相關(guān)性在歐洲、芬蘭、英國等歐美國家的病例對照分析中顯示相關(guān)，但是在日本、韓國及國內(nèi)的幾篇文章中結(jié)論并不一致[15]。而LIMK-1基因，為近幾年發(fā)現(xiàn)的與顱內(nèi)動脈瘤發(fā)生相關(guān)的新候選基因，目前國內(nèi)并無此基因與顱內(nèi)動脈瘤相關(guān)性的報告。進一步分析發(fā)現(xiàn)，觀察組ELN基因的 3'-UTR（+502）、3'-UTR（+659）以及LIMK-1基因的Pro（-961）、Pro（-428）、Pro（-187）五個位點的分布頻率與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明ELN、LIMK-1基因多態(tài)性對江西漢族人分群顱內(nèi)動脈瘤有明顯的影響。但是本研究也存在一定的不足，如納入研究的樣本數(shù)量不是非常多，可能對研究的結(jié)果產(chǎn)生一定影響，因此在今后的研究過程中應(yīng)加以改進。

綜上所述，高齡、高血壓、高血糖、高吸煙頻率、家族史是江西漢族顱內(nèi)動脈瘤發(fā)病的危險因素，ELN 與LIMK-1基因是與顱內(nèi)動脈瘤相關(guān)的候選基因，對江西漢族散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤有明顯的影響。

[參考文獻]

[1] 劉雪，溫超. 顱內(nèi)動脈瘤介入治療手術(shù)麻醉中丙泊酚及舒芬太尼聯(lián)合應(yīng)用效果研究[J]. 醫(yī)學(xué)與哲學(xué)，2018， 39（8）：33-36.

[2] 江遠龍，王智. 4D-CTA在評估未破裂顱內(nèi)動脈瘤破裂風(fēng)險中的運用和進展[J]. 中國微侵襲神經(jīng)外科雜志，2019，20（15）：714-716.

[3] 葛志華，鄧曉紅，張京芬. 彈性蛋白基因多態(tài)性與破裂的顱內(nèi)動脈瘤的關(guān)系[J]. 腦與神經(jīng)疾病雜志，2018，26（11）：661-667.

[4] Milinis K，Thapar A，O'Neill K，et al.History of aneurysmal spontaneous subarachnoid hemorrhage[J].Stroke，2017， 48（10）：e280-e283.

[5] Longo M，Granata F，Racchiusa S，et al.Role of hemodynamics forces in unruptured intracranial aneurysms：An overview of a complex scenario[J].World Neurosurg，2017， 94（5）：632-642.

[6] 吳鵬飛，李連祥，潘起展，等. COIAA1基因多態(tài)性與中國東北地區(qū)散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤的相關(guān)性研究[J]. 山東醫(yī)藥，2018，31（15）：126-128.

[7] 陳瑞，高奕瑤，楊建增，等. LIMK1調(diào)控骨肉瘤細胞耐藥的實驗研究及機制分析[J]. 中國實驗診斷學(xué)，2018， 22（1）：99-103.

[8] 李航，白衛(wèi)星，賀迎坤，等. PipelineTM栓塞裝置治療顱內(nèi)動脈瘤術(shù)后并發(fā)癥研究進展[J]. 介入放射學(xué)雜志，2017，26（8）：760-764.

[9] 李路路，葉偉. 顱內(nèi)動脈瘤破裂危險因素的研究進展[J].中國綜合臨床，2018，34（6）：567-570.

[10] Skaria T，Bachli E，Schoedon G. WIF1 prevents Wnt5A mediated LIMK/CFL phosphorylation and adherens junction disruption in human vascular endothelial cells[J]. Journal of Inflammation，2017，14（1）：412-416.

[11] 楊邦敏，向姝霖，夏紅，等. 沉默LIMK1抑制人胃癌BGC823細胞遷移與侵襲[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2019，21（7）：426-432.

[12] 史濤，杭震宇，沈露明. LIMK1和Cofilin蛋白在前列腺癌組織中的表達及其臨床意義[J]. 醫(yī)學(xué)臨床研究，2020， 37（4）：525-527，531.

[13] 王龍，于燕妮，賀曉燕. p57kip2基因，LIMK-1基因及其蛋白在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中的作用及研究進展[J]. 貴州醫(yī)藥，2011，15（7）：655-657.

[14] 李曉波，吳波，曾義，等. EDNRA和JDP1基因與中國漢族人群散發(fā)顱內(nèi)動脈瘤關(guān)聯(lián)分析[J]. 中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2019，16（4）：385-386.

[15] 歐陽嶷，閻雪晶，劉穎，等. CDKN2A和CDKN2B區(qū)域間的基因多態(tài)性與漢族人群顱內(nèi)動脈瘤性別差異性的關(guān)聯(lián)分析[J]. 中國血液流變學(xué)雜志，2020，30（1）：16-21.

（收稿日期：2021-02-23）