李 梅，夏曉娟，陳志雄，楊 夢，李紫瀅，楊 通，孟 爽，楊云慧，胡 蓉

（云南師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,昆明650500）

近年來，真菌毒素的污染情況已變得日益嚴(yán)峻，引起了全球范圍內(nèi)的廣泛關(guān)注.據(jù)統(tǒng)計，世界上約25%的農(nóng)產(chǎn)品均受到真菌毒素不同程度的污染，給人類的健康帶來了不利影響［1~3］.在農(nóng)產(chǎn)品普遍存在的真菌毒素中，赭曲霉毒素是其中一類較為典型且常見的真菌毒素，共包含7種結(jié)構(gòu)類似物.其中，以赭曲霉毒素A（OTA）的污染較為嚴(yán)重，毒性最大，且OTA是一種高度穩(wěn)定的化合物，普遍存在于花生、谷物、玉米、蔬菜等人類和動物的食物供應(yīng)鏈中［4］.OTA由于具有腎毒性、肝毒性、致畸性、免疫抑制和致癌性，已被國際癌癥研究機構(gòu)列為了2B類致癌物質(zhì)［5］.此外，由于OTA與人體內(nèi)必需氨基酸苯丙氨酸的結(jié)構(gòu)相似，會間接地通過影響人體腎臟和肝臟中苯丙氨酸羥化酶的活性，從而阻礙人體內(nèi)蛋白質(zhì)、DNA以及RNA的合成［6，7］.我國的食品國家安全標(biāo)準(zhǔn)對OTA在食品中的含量作了明確規(guī)定：在谷物、豆類、堅果及其制品中的含量不超過5 μg/kg，在飲料中的限量濃度為5~10 μg/kg［8］.目前，已開發(fā)出了表面增強拉曼光譜法［9］、酶聯(lián)免疫吸附法［10］、毛細(xì)管裝置檢測法［11］及熒光分析法等多種OTA檢測方法［12］.這些方法精確、高效，但存在成本高、不易攜帶、需專業(yè)技術(shù)人員等缺點，限制了其在真菌毒素檢測中的應(yīng)用.因此，開發(fā)簡便快捷、靈敏度高且重現(xiàn)性好的OTA現(xiàn)場檢測技術(shù)顯得非常重要.

納米酶是一種仿生納米材料，它與天然酶一樣具有催化生化反應(yīng)的能力，與天然酶相比，納米酶具有穩(wěn)定性好、成本效益高及易修飾等特點，因而成為天然酶的替代物.自2007年發(fā)現(xiàn)Fe3O4納米酶以來，科研人員已開發(fā)出多種具有類酶活性的納米材料，并應(yīng)用于生物傳感、疾病診斷和環(huán)境污染物檢測等多個領(lǐng)域中［13］.其中，納米酶在生物傳感器中的應(yīng)用處于領(lǐng)先地位，其作為天然酶的一種優(yōu)良替代物，已被用于以類似酶的方式產(chǎn)生和放大信號，并用于構(gòu)建生物傳感器［14］.迄今，基于納米酶催化介導(dǎo)產(chǎn)生信號的不同模式，已開發(fā)出多種基于納米模擬酶的新型生物傳感器，包括比色生物傳感器、熒光生物傳感器、化學(xué)發(fā)光生物傳感器、電化學(xué)生物傳感器和表面增強拉曼散射（SERS）等［15~18］.

金屬有機骨架（MOFs）是一類重要的無機有機雜化晶體，獨特的組成、多樣性的結(jié)構(gòu)和可調(diào)的尺寸使其在納米酶領(lǐng)域展現(xiàn)出潛在的應(yīng)用價值.MOFs具有高密度和分散均勻的活性中心以及多孔結(jié)構(gòu)和多通道，有利于小分子底物進入到孔道中與活性中心充分接觸，同時有利于產(chǎn)物的擴散和轉(zhuǎn)移.MOFs還具有優(yōu)良的模擬酶催化性能，引起了廣泛關(guān)注［19，20］.研究發(fā)現(xiàn)，典型的過渡金屬離子如鐵、銅、錳和鈷與對苯二甲酸（H2BDC）及1，3，5-均苯三甲酸（H3BTC）等有機配體反應(yīng)所制備的MIL-53，MIL-88等多種MIL型MOFs都具有模擬酶的性質(zhì).此外，一些貴金屬納米顆粒，如Pt NPs，Au NPs，Ag NPs和Pd NPs均具有模擬酶活性，將納米粒子內(nèi)嵌到MOFs結(jié)構(gòu)中可以增強納米粒子的模擬酶活性，如Au NPs和Ag NPs的表面增強拉曼散射（SERS）活性［21，22］.

本文將Mn2+和2，5-二羥基對苯二甲酸置于高壓反應(yīng)釜中反應(yīng)，制備了具有過氧化物酶活性的Mn-MOF-74，將鉑納米顆粒負(fù)載在Mn-MOF-74上制得Pt NPs@Mn-MOF納米復(fù)合材料，并利用其模擬酶活性在絲網(wǎng)印刷電極上構(gòu)建了一種無標(biāo)記電化學(xué)適體傳感器，用于OTA的定量檢測.將具有優(yōu)良催化性能的Pt NPs負(fù)載到Mn-MOF結(jié)構(gòu)上，不僅有利于協(xié)同提高納米酶的催化活性，還可用于固定修飾有巰基的OTA適體.在H2O2存在的條件下，Pt NPs@Mn-MOF可催化H2O2還原而產(chǎn)生電流變化，并通過計時電流法來測定Pt NPs@Mn-MOF對H2O2的電流響應(yīng).由于加入的檢測目標(biāo)物OTA與適體形成閉環(huán)結(jié)構(gòu)，封閉了Pt NPs@Mn-MOF的部分催化活性位點，導(dǎo)致納米酶的催化活性降低，電流響應(yīng)信號減小，從而實現(xiàn)了OTA的定量檢測.當(dāng)OTA濃度在0.01~300 ng/mL范圍內(nèi)，電流響應(yīng)信號與OTA濃度成反比.該傳感器選擇性好、靈敏度高，檢出限低至3.33 pg/mL，且可用于真實玉米樣品中OTA的檢測，在真菌毒素檢測以及其它小分子檢測領(lǐng)域中展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景.

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

四水合氯化錳（MnCl4˙4H2O）、2，5-二羥基對苯二甲酸和赭曲霉毒素A（OTA）購于美國Sigma公司；氯鉑酸（H2PtCl6）購于上海源葉生物科技有限公司；無水乙醇（C2H6OH）購于天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；雙氧水（H2O2）購于北京百靈威科技有限公司；OTA aptamer 5'-SH-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3'購于生工生物工程（上海）股份有限公司.實驗用水均為去離子水；玉米粉購自當(dāng)?shù)爻?

絲網(wǎng)印刷電極（參比電極為Ag/AgCl電極）購于百勝儀器（廣州）有限公司；計時電流（i-t）曲線，循環(huán)伏安（CV）曲線和電化學(xué)阻抗譜（EIS）通過U盤式電化學(xué)工作站（Sensit Smart，PalmSens BV公司）測試得到；JEM-2100型透射電子顯微鏡（TEM，日本JEOL有限公司）；UV-8000S型紫外-可見吸收光譜儀（UV-Vis，上海元析儀器有限公司）；DX-2700型X射線粉末衍射儀（XRD，丹東方圓儀器有限公司）.

1.2 材料的制備

1.2.1 金屬有機骨架（Mn-MOF-74）的合成參照文獻［23］方法，稱取0.8784 g MnCl4·4H2O和0.2664 g 2，5-二羥基對苯二甲酸加入120 mL體積比為15∶1∶1的DMF/乙醇/水混合溶液中，將其超聲溶解后，轉(zhuǎn)移到高壓反應(yīng)釜中.將高壓反應(yīng)釜轉(zhuǎn)移至鼓風(fēng)干燥箱中，于135℃反應(yīng)24 h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，采用DMF和甲醇分別離心洗滌2次，最后將紅棕色的固體置于真空干燥箱中于200℃干燥過夜，得到棕色固體粉末狀Mn-MOF-74.

1.2.2 鉑納米顆粒（Pt NPs）的合成參照文獻［24］方法，在圓底燒瓶中加入40 mL去離子水和1 mL 1%的H2PtCl6，經(jīng)超聲分散均勻后加熱攪拌至沸騰，然后向反應(yīng)瓶中緩慢加入1%的檸檬酸三鈉（6 mL），繼續(xù)加熱40 min，溶液逐漸變?yōu)榭Х壬珪r停止加熱，冷卻至室溫后于4℃保存?zhèn)溆?

1.2.3 Pt NPs@Mn-MOF-74的合成稱取10 mg Mn-MOF-74固體粉末置于小棕色瓶中，加入1 mL鉑納米顆粒溶膠，常溫下攪拌48 h使Pt納米顆粒充分吸附在Mn-MOF-74上，產(chǎn)物置于4℃下保存?zhèn)溆?

1.2.4 玉米樣品液的制備稱取5 g未受污染的玉米粉溶于10 mL濃度為90%的甲醇溶液中，密封后將其置于室溫下攪拌30 min，在用孔徑為0.22 μm的濾膜進行過濾，收集濾液，所得濾液以1∶20的比例用重蒸水稀釋后置于4℃環(huán)境下保存?zhèn)溆?

1.3 檢測原理

利用Pt NPs@Mn-MOF-74納米復(fù)合材料的類過氧化物酶特性，借助殼聚糖的成膜性將該納米復(fù)合材料修飾到絲網(wǎng)印刷電極的表面，然后將修飾有巰基的OTA適體鏈固定在電極表面的Pt NPs上；加入目標(biāo)分子OTA，由于OTA分子與適體形成閉合結(jié)構(gòu)封閉了Pt NPs@Mn-MOF-74的部分催化活性位點，導(dǎo)致納米酶的催化活性降低，因此電流響應(yīng)信號減小，最后通過U盤式小型電化學(xué)工作站采用計時電流法檢測電流變化，從而實現(xiàn)對OTA的定量檢測.該傳感器的檢測原理如Scheme 1所示.

Scheme 1 Schematic diagram of the construction of label?free OTA aptasensor

1.4 檢測方法

將絲網(wǎng)印刷電極的表面用去離子水沖洗60 s，室溫下晾干，重復(fù)操作2次.將電極片置于乙醇溶液中浸泡15 min，用去離子水沖洗晾干，除去電極表面的氧化膜以活化電極.將0.5%的殼聚糖和Pt NPs@Mn-MOF-74按體積比1∶1混合，取8 μL混合液滴加到電極表面，室溫下晾干，然后在電極上滴加8 μL濃度為1 μmol/L修飾有巰基的OTA適體鏈，置于37℃恒溫水浴箱中培育90 min，通過Pt NPs與OTA適體上的巰基形成化學(xué)鍵而將OTA適體固定在電極表面.培育完成后，用100 μL Tris-HCl緩沖溶液（pH=7.0）沖洗電極表面并于室溫下晾干，以除去未結(jié)合的OTA適體，然后在電極上滴加8 μL 1%的β-巰基乙醇（MCH）并于37℃恒溫水浴箱中培育90 min以封閉非特異性結(jié)合位點.用100 μL pH=7.0的Tris-HCl緩沖溶液沖洗電極并吹干，最后在電極表面滴加8 μL不同濃度的檢測目標(biāo)物OTA，于37℃恒溫水浴箱中培育90 min后，取出電極并用Tris-HCl緩沖溶液沖洗，除去未結(jié)合的OTA小分子.將電極片插在U盤式小型電化學(xué)工作站上，并在電極上滴加100 μL Tris-HCl緩沖溶液，采用計時電流法測定Pt NPs@Mn-MOF對加入的2 μL濃度為1 mol/L的H2O2的電流響應(yīng)值.

2 結(jié)果與討論

2.1 Mn?MOF?74材料的表征

2.1.1 X射線衍射（XRD）分析采用XRD儀對Mn-MOF-74的結(jié)構(gòu)進行了表征，其與標(biāo)準(zhǔn)XRD譜圖的對比結(jié)果［23］如圖1所示.可以發(fā)現(xiàn)，兩者的出峰位置一致，證明確已制備出Mn-MOF-74.

2.1.2 傅里葉變換紅外光譜（FTIR）表征通過FTIR對Mn-MOF-74的結(jié)構(gòu)進行了表征，譜圖如圖2所示.Mn-MOF-74通過金屬離子與有機配體中的羧酸鹽配位形成，在1552 cm?1和1386—1409 cm?1處的吸收帶歸屬于羧酸化配體（COO—）的對稱和不對稱特征伸縮振動，與文獻［25］報道中Mn-MOF-74的COO—的振動模式一致，證明Mn-MOF-74的成功合成.

Fig.1 XRD patterns of Mn?MOF?74(a)and the simulated(b)

Fig.2 FTIR spectrum of Mn?MOF?74

2.1.3 微觀形貌表征采用掃描電子顯微鏡（SEM）對Mn-MOF-74的微觀形貌進行了表征，同時通過透射電子顯微鏡（TEM）觀察了復(fù)合材料Pt NPs@Mn-MOF-74的微觀形貌，結(jié)果如圖3所示.圖3（A1~A3）和（B1，B2）顯示，Mn-MOF-74呈現(xiàn)花狀、正方體狀及尖端棒狀等多種形貌.由圖3（C1）可見，Mn-MOF-74在摻雜Pt NPs后其晶體結(jié)構(gòu)有所改變，由摻雜前大小不等、形貌不一的晶體顆粒變成了細(xì)小顆粒，且從圖3（C2）可以觀察到Pt NPs均勻地負(fù)載到了Mn-MOF-74的表面，其粒徑約為1 nm.

Fig.3 SEM images of Mn?MOF?74(A1—A3,B1,B2)and TEM images of Pt NPs@Mn?MOF?74(C1,C2)

2.2 可行性分析

對本實驗設(shè)計的方案進行了可行性驗證實驗.圖4（A）示出了所制備的無標(biāo)記電化學(xué)適體傳感器在pH=7.0的Tris-HCl緩沖溶液中，采用計時電流法測得的有、無檢測目標(biāo)物OTA時的電流響應(yīng)信號變化曲線.曲線a為不加檢測目標(biāo)物OTA時的電流響應(yīng)信號曲線（空白實驗），曲線b是加入濃度為200 ng/mL的檢測目標(biāo)物OTA時的電流響應(yīng)信號曲線，可見，傳感器對H2O2還原的催化電流響應(yīng)信號明顯降低，可以歸因為當(dāng)體系中加入檢測目標(biāo)物OTA后，由于OTA與適體鏈特異性識別，形成閉環(huán)式結(jié)構(gòu)，封閉了電極上納米模擬酶Pt NPs@Mn-MOF-74的催化活性位點.以上結(jié)果證明本實驗方案具有可行性.在相同條件下又分別對Pt NPs，10 mg/mL的Mn-MOF-74及10 mg/mL的Pt NPs@Mn-MOF-74納米模擬酶的催化活性進行了測定，結(jié)果如圖4（B）所示.可見，摻雜了Pt NPs后的Mn-MOF-74具有更好的催化活性，這可能是由于兩者摻雜后，協(xié)同提高了納米酶的催化作用，同時也證明實驗采用的納米酶摻雜聯(lián)用策略有效提高了納米模擬酶的催化活性.

2.3 不同修飾電極表面的交流阻抗行為與循環(huán)伏安行為

Fig.4 Feasibility analysis of the experimental scheme(A)and catalytic activity analysis of nanomimetic enzyme(B)

Fig.5 AC impedance curves(A)and cyclic voltammetryvolt?ampere curves(B)measured at 5 mmol/L[K3Fe(CN)6]/[K4Fe(CN)6]with different modified electrodes

為了探究該傳感器是否修飾成功，采用電化學(xué)交流阻抗法（EIS）和循環(huán)伏安法（CV）表征了電極表面的層層修飾過程.圖5為在5 mmol/L的K3Fe（CN）4/K4Fe（CN）6溶液中測得的不同電極修飾界面的EIS曲線［圖5（A）］及CV曲線［圖5（B）］.圖5（A）中曲線a為裸絲網(wǎng)印刷電極的EIS曲線（Rct=1600 Ω）；曲線b為修飾了Pt NPs@Mn-MOF-74納米復(fù)合材料的電極的EIS曲線，由于Pt NPs@Mn-MOF-74的導(dǎo)電性較好，因而阻抗值最?。≧ct=800 Ω）；曲線c為在基底上滴加了OTA適體鏈后的EIS曲線，由于DNA鏈不導(dǎo)電，導(dǎo)致阻抗值增大（Rct=2300 Ω）；曲線d為使用MCH封閉非特異性結(jié)合位點后的EIS曲線，由于MCH不導(dǎo)電，因而阻抗值進一步增大（Rct=2800 Ω）；曲線e是在曲線d的基礎(chǔ)上滴加檢測目標(biāo)OTA后的EIS曲線，由于OTA是不導(dǎo)電小分子，且OTA與適體鏈特異性識別，形成閉環(huán)式結(jié)構(gòu)，阻礙電子傳遞，因此阻抗值最大（Rct=3600 Ω）.以上結(jié)果表明，該傳感器層層修飾成功.

為進一步證實該傳感器層層修飾成功，采用CV法對其進行了表征.圖5（B）中曲線a為裸絲網(wǎng)印刷電極的CV曲線，曲線b為修飾了Pt NPs@Mn-MOF納米酶的電極的CV曲線，納米酶不僅具有催化性能，同時具有良好的導(dǎo)電性能，因而此時的電流值最大；曲線c是在修飾了納米酶的電極上（Pt NPs@Mn MOF-74/SPE）滴加OTA適體鏈后的CV曲線，由于適體鏈不導(dǎo)電以及鏈中的帶負(fù)電荷的磷酸基團對Fe（CN）63?/4?的負(fù)負(fù)排斥，因而電流值減?。磺€d為采用MCH封閉非特異性結(jié)合位點后的CV曲線，MCH是不導(dǎo)電物質(zhì)，導(dǎo)致電流值進一步減?。磺€e為滴加OTA后的CV曲線，由于OTA不導(dǎo)電，所以此時的電流值最小，CV表征再一次證實所構(gòu)建的傳感器層層修飾成功.

2.4 實驗條件的優(yōu)化

2.4.1 納米酶濃度的影響納米酶的濃度是影響傳感器性能的關(guān)鍵因素，因此對其進行了優(yōu)化.取0.5%的殼聚糖分別與不同濃度（1，2，5，10，20 mg/mL）的Pt NPs@Mn-MOF-74按體積比1∶1混合后，取8 μL混合液滴加到電極表面，室溫下晾干，然后在電極上滴加100 μL Tris-HCl緩沖溶液，采用計時電流法測定不同濃度的Pt NPs@Mn-MOF對加入的2 μL濃度為1 mol/L的H2O2的電流響應(yīng)值.如圖6（A）所示，當(dāng)Pt NPs@Mn-MOF納米酶的濃度較低時，傳感器的電流值較??；隨著納米酶濃度的增加，電流值逐漸增大；當(dāng)Pt NPs@Mn-MOF納米酶的濃度達到10 mg/mL時，電流值最大；繼續(xù)增加納米酶濃度，傳感器的電流值略有減小.因此，選擇10 mg/mL作為納米酶的最優(yōu)濃度.

2.4.2 測量電位的影響為獲取最優(yōu)實驗條件，對該傳感器的測量電位進行了優(yōu)化.如圖6（B）所示，當(dāng)測量電位達到?0.6 V時，傳感器的響應(yīng)電流值（ΔI=I0-Ix，I0為無OTA時的電流值，Ix為有OTA時的電流值）最大.因此，選擇?0.6 V作為該傳感器的最優(yōu)測量電位.

Fig.6 Optimization of experimental conditions

2.4.3 緩沖溶液pH值的影響由于緩沖溶液pH值會對傳感器的響應(yīng)電流產(chǎn)生較大影響，因而對使用的Tris-HCl緩沖溶液的pH值進行了優(yōu)化.由圖6（C）可見，當(dāng)緩沖溶液pH在4~7范圍內(nèi)時，隨著pH值的增大，傳感器的響應(yīng)電流ΔI也增大，并在pH=7.0時達到最大值；當(dāng)繼續(xù)增大緩沖溶液的pH值時，傳感器的響應(yīng)電流反而降低.因此，選擇pH=7.0作為緩沖溶液的最優(yōu)pH值.

2.4.4 OTA適體鏈濃度的影響為獲取最優(yōu)實驗條件，對OTA適體鏈的濃度進行了優(yōu)化，實驗結(jié)果如圖6（D）所示.在OTA適體鏈濃度較低的情況下，增大適體鏈的濃度有助于增大傳感器的響應(yīng)電流，當(dāng)適體鏈濃度增大到1 μmol/L時，傳感器響應(yīng)電流ΔI最大；繼續(xù)增加適體鏈的濃度，傳感器的響應(yīng)略有降低.因此，選擇1 μmol/L作為該傳感器OTA適體鏈的最優(yōu)濃度.

2.5 OTA電化學(xué)適體傳感器的響應(yīng)性能

在最優(yōu)實驗條件下，使用該傳感器對一系列不同濃度的OTA進行了測定，結(jié)果如圖7所示.其中，圖7（A）為該傳感器對不同濃度OTA的計時電流（i-t）曲線，圖7（B）為該傳感器的校正曲線.由圖7可見，在0.01~300 ng/mL濃度范圍內(nèi)，傳感器的響應(yīng)電流與OTA的濃度成正比，線性方程為ΔI=5.64lgc+12.71，相關(guān)系數(shù)R2=0.9921，檢出限為3.33 pg/mL.

Fig.7 Chronoamperometry curves(A)and calibration curves(B)of aptasensor to different concentrations of OTA

2.6 OTA電化學(xué)適體傳感器的抗干擾能力

采用混合溶液法考察了該傳感器的抗干擾能力.實驗中選擇了5種可能存在的干擾物，包括黃曲霉毒素B1（AFB1）、黃曲霉毒素B2（AFB2）、赭曲霉毒素B（OTB）、伏馬毒素B1（FB1）和玉米赤霉烯酮（ZEN）.將200 ng/mL的OTA分別與2000 ng/mL的上述5種干擾物等體積混合，并使用該傳感器進行測定，結(jié)果如圖8所示.可見，與單獨的OTA對傳感器的響應(yīng)性能相比，OTA與干擾物混合后響應(yīng)電流值幾乎保持一致，可見該傳感器具有良好的抗干擾能力.

Fig.8 Anti?interference ability of OTA electro?chemical aptasensor

Fig.9 Reproducibility of OTA electrochemical aptasensor

2.7 OTA電化學(xué)適體傳感器的重現(xiàn)性

使用5片單獨制備的電極在相同條件下考察了該傳感器的重現(xiàn)性，每片電極平行測定3次.結(jié)果如圖9所示（RSD=0.57%，n=5），可見該傳感器重現(xiàn)性較好.

2.8 回收率的測定

為探究該傳感器在真實樣品中的實用性能，使用該傳感器對真實樣品進行了回收率測定.采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，分別將2.00，300.0，600.0 ng/mL的OTA與制備的玉米樣品液（1∶20）按體積比1∶1混合，使玉米樣品液的最終稀釋比為1∶40，每組樣品平行測定3次，結(jié)果如表1所示，可見其回收率在96.0%~103.0%之間，能夠用于真實樣品中的檢測.

Table 1 Recovery of OTA electrochemical aptasensor

2.9 與商業(yè)化酶聯(lián)免疫法(ELISA)及其它OTA檢測方法的比較

采用商業(yè)化的酶聯(lián)免疫試劑盒進行了回收率測定，并將測定結(jié)果與該傳感器的測定結(jié)果進行比較，以評估該傳感器的檢測可信度.如圖10所示，ELISA方法中隨著檢測目標(biāo)物濃度的增加，吸光度逐漸增大，其檢測線性范圍為0.625~20 ng/mL，線性方程為y=0.1831x+0.345，R2=0.995.對比發(fā)現(xiàn)，本實驗構(gòu)建的傳感器的檢出限明顯低于ELISA的檢出限.此外，將2 ng/mL的OTA與1∶20的玉米樣品液按體積比1∶1混合后，采用ELISA試劑盒平行測定3次，結(jié)果如表2所示，可見本實驗研制的傳感器與商業(yè)ELISA試劑盒一樣，具有較高的準(zhǔn)確度.

不同OTA檢測方法的對比如表3所示，可見，所構(gòu)建的無標(biāo)記型電化學(xué)適體傳感器與其它OTA檢測方法相比，具有較寬的線性范圍和較低的檢出限.

Fig.10 UV absorption spectra(A)and calibration curve(B)of ELISA kit for OTA at different concentrations

Table 2 Comparison of OTA detection results between the ELISA kit and the electrochemical aptasensor constructed in this paper in corn samples

Table 3 Comparison between the aptasensor constructed in this work and other OTA detection methods

3 結(jié) 論

基于負(fù)載鉑納米顆粒的金屬有機骨架納米酶（Pt NPs@Mn-MOF），采用絲網(wǎng)印刷電極構(gòu)建了一種無標(biāo)記型電化學(xué)適體傳感器，用于OTA的定量檢測.利用MnCl4·4H2O和2，5-二羥基對苯二甲酸在高壓反應(yīng)釜中制備了具有良好過氧化物酶活性的Mn-MOF-74，將其用于負(fù)載具有模擬酶活性的Pt NPs上，不僅有助于增強納米酶的催化性能，還可用于固定大量的OTA適體，從而有效提高傳感器的檢測靈敏度，降低其檢出限.該生物傳感器不僅重現(xiàn)性好、靈敏度高，且采用的U盤式小型電化學(xué)工作站小巧方便，易于攜帶，可用于真實樣品中的真菌毒素的現(xiàn)場檢測，為保護食品安全提供了檢測新方法.