王世銀 張偉 劉曉娜 楊力偉 鄧雙義

摘要：【目的】明確miR-486對(duì)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖及PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響，為揭示miR-486對(duì)綿羊骨骼肌發(fā)育的調(diào)控機(jī)制打下基礎(chǔ)?！痉椒ā恳园褪舶菅?日齡羔羊后肢骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-486 mimics和miR-486 inhibitor致使綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中miR-486水平上調(diào)或下調(diào)，探究miR-486對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖速度及PI3K-Akt信號(hào)通路中PTEN、GSK3b、PRKCα、Raf-1、MAPK1、PKN1、Casp9和SGK1等8個(gè)相關(guān)基因表達(dá)變化的影響?！窘Y(jié)果】空白對(duì)照及轉(zhuǎn)染miR-486 mimics、miR-486 mimics negative control和miR-486 inhibitor negative control的綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞均表現(xiàn)出典型的S形增殖曲線，但各處理間的細(xì)胞增殖速度存在明顯差異。當(dāng)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中miR-486水平上調(diào)可促使細(xì)胞進(jìn)入快速增殖狀態(tài)，而miR-486水平下調(diào)可使細(xì)胞保持靜止?fàn)顟B(tài)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，當(dāng)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中miR-486水平上調(diào)時(shí)，可引起PTEN、Raf-1和MAPK1基因相對(duì)表達(dá)量極顯著下調(diào)（P<0.01，下同），PRKCα和PKN1基因相對(duì)表達(dá)量極顯著上調(diào)，SGK1基因相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05）;而GSK3β和Casp9基因相對(duì)表達(dá)量在不同處理組綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞間的差異均不顯著（P>0.05），可能在維持綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞基本生命活動(dòng)中發(fā)揮作用。【結(jié)論】miR-486通過(guò)調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)而參與綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育及增殖，為深入研究miR-486對(duì)綿羊骨骼肌發(fā)育的調(diào)控機(jī)理及優(yōu)質(zhì)肉羊品種培育打下了理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞： 綿羊;miR-486;骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞;PI3K-Akt信號(hào)通路;增殖;基因表達(dá)

中圖分類(lèi)號(hào)：S826.8 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2021）08-2276-08＼

Effects of miR-486 on proliferation of sheep （Ovis aries） skeletal muscle satellite cells and expression of genes related

to PI3K-Akt signal pathway

WANG Shi-yin， ZHANG Wei*， LIU Xiao-na， YANG Li-wei， DENG Shuang-yi

（Xinjiang Agricultural Professional Technological College， Changji， Xinjiang ?831100， China）

Abstract：【Objective】To investigate the effects of miR-486 on proliferation of sheep （Ovis aries） skeletal muscle sa-tellite cell and expression level of genes related to PI3K-Akt signal pathway， and finally lay the foundation for illumina-ting the ?regulatory mechanism of miR-486 on development of sheep skeletal muscle. 【Method】Here the skeletal muscle satellite cells of one day-old Bashby sheep were applied， and the proliferation of satellite cells and the expression levels of 8 key genes， PTEN， GSK3b， PRKCα， Raf-1， MAPK1， PKN1， Casp9 and SGK1 in PI3K-Akt signal pathway were detected when the level of miR-486 in cells were up- or down-regulated by transferring into miR-486 mimics and miR-486 inhibitor. 【Result】The result showed that the skeletal muscle satellite cells in blank control and treated by miR-486 mi-mics， miR-486 mimics negative control， and miR-486 inhibitor negative control all performed the typical S-shaped proli-feration curve， but thespeed of proliferation existed great differenceamong treatments. The proliferation of satellite cells was accelerated when the level of miR-486 was up-regulated， conversely when the level of miR-486 was down-regulated and the cells kept rest state. The results of real-time fluorescence quantitative PCR showed that the expression levels of PTEN， Raf-1， and MAPK1 were extremely significantly down-regulated （P<0.01， the same below）， levels of PRKCα and PKN1 were extremely significantly up-regulated， and level of SGK1gene was also significantly up-regulated（P<0.05）， when the level of miR-486 was up-regulated in satellite cells， but the relative expression levels of GSK3β and Casp9 gene did not show significantly different（P>0.05） no matter the level of miR-486 was up-regulated or down-regulated in satellite cells， maybe these two genes played important roles in essential activity of satellite cells. 【Conclusion】miR-486 can affect the proliferation of sheep skeletal muscle satellite cell by regulating the expression of genes in PI3K-Akt signal pathway， and provided a theoretical basis for further investigate the regulation mechanism of miR-486 on skeletal muscle development of sheep and breeding of high-quality mutton sheep breeds.

Key words： sheep; miR-486; skeletal muscle satellite cell; PI3K-Akt signal pathway; proliferation; gene expression

Foundation item： Xinjiang Natural Science Foundation （2017D01A51）

0 引言

【研究意義】提高產(chǎn)肉性能一直是綿羊育種的重要目標(biāo)。在動(dòng)物骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，從胚胎期成肌細(xì)胞的遷移、增殖和分化，到出生后骨骼肌細(xì)胞的進(jìn)一步生長(zhǎng)發(fā)育及穩(wěn)態(tài)維持，均受一個(gè)分子網(wǎng)絡(luò)的精細(xì)調(diào)控（Puri and Sartorelli，2000），但目前對(duì)于這一網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的作用機(jī)制知之甚少。因此，深入研究并闡明綿羊骨骼肌發(fā)育的分子調(diào)控機(jī)制，尋找與綿羊骨骼肌發(fā)育密切相關(guān)的基因及信號(hào)通路，并應(yīng)用于分子育種方案，能有效提高綿羊育種效率及促進(jìn)優(yōu)良肉羊品種培育。【前人研究進(jìn)展】miRNA是一類(lèi)由22個(gè)左右核苷酸構(gòu)成的小分子非編碼RNA，參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化，以及機(jī)體發(fā)育、代謝和腫瘤轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)過(guò)程的調(diào)控（Cheng et al.，2005;Croce and Calin，2005;Hwang and Mendel，2006;Tavazoie et al.，2008）。miRNA-148（miR-486）來(lái)源于Ankyrin-1基因（Ank-1）的第40個(gè)內(nèi)含子，最早發(fā)現(xiàn)于人類(lèi)胚胎肝組織中（Small et al.，2010）。PI3K-Akt信號(hào)通路參與肌肉生長(zhǎng)發(fā)育、代謝調(diào)控及穩(wěn)態(tài)維持等重要生物學(xué)過(guò)程的調(diào)控，在抗肌萎縮蛋白缺陷型肌肉和杜氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥等疾病中均能檢測(cè)到PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因的異常表達(dá)或蛋白的異常磷酸化（Small et al.，2010;Alexander et al.，2011）。已有研究表明，miR-486通過(guò)調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)，而在肌肉發(fā)育及杜氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥等疾病發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用（Alexander et al.，2011;Hitachi et al.，2014）。骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞來(lái)源于胚胎階段的成肌細(xì)胞（Myoblast），對(duì)骨骼肌組織的損傷修復(fù)及穩(wěn)態(tài)維持至關(guān)重要（Shahini et al.，2018）。骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞附著在肌纖維肌膜與基底膜之間，保持靜息狀態(tài)，當(dāng)骨骼肌組織受損時(shí)，衛(wèi)星細(xì)胞被激活，并進(jìn)入增殖和分化狀態(tài)，最終形成新的肌纖維以修復(fù)受損的骨骼肌組織（解一凡等，2019;秦本源等，2020）。綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在體外易于培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化，是研究骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控機(jī)制的理想材料（張偉等，2019）。豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖能力強(qiáng)且具有多向分化潛能，可作為種子細(xì)胞用于未來(lái)組織工程研究（秦本源等，2020）。【本研究切入點(diǎn)】miR-486在綿羊骨骼肌和心肌中高表達(dá)，且在出生后綿羊骨骼肌中的表達(dá)量顯著上調(diào)（張偉等，2018，2020），但在綿羊骨骼肌發(fā)育過(guò)程中miR-486是否是通過(guò)調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)而發(fā)揮其生物學(xué)功能仍有待進(jìn)一步探究?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)上調(diào)或下調(diào)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的miR-486，探究miR-486對(duì)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖及PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響，以期為闡明miR-486對(duì)綿羊骨骼肌發(fā)育的調(diào)控機(jī)制打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞為省部共建綿羊遺傳改良與健康養(yǎng)殖國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室使用巴什拜羊1日齡羔羊后肢骨骼肌組織通過(guò)原代培養(yǎng)獲得，保存于液氮中。DMEM培養(yǎng)基、0.25%胰酶-EDTA和胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，青霉素+鏈霉素（雙抗）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，Lipofectamine 3000、TRIzol和反轉(zhuǎn)錄試劑購(gòu)自美國(guó)Thermo公司，實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司，細(xì)胞培養(yǎng)皿和24孔板購(gòu)自美國(guó)Corning公司，miR-486 mimics和miR-486 inhibitor及其陰性對(duì)照序列（表1）委托GenePharma公司合成，對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增引物委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 細(xì)胞培養(yǎng) 從液氮罐中取出1支綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞凍存管，迅速置于50 ℃水浴鍋中，待完全解凍后取出，擦干水，并以75%酒精消毒凍存管表面，然后轉(zhuǎn)入6 cm培養(yǎng)皿中，加入完全培養(yǎng)基（89% DMEM+10%胎牛血清+1%雙抗），然后置于5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

1. 2. 2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 將綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞按每孔約5000個(gè)細(xì)胞的密度接種至24孔板，使用完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞良好貼壁生長(zhǎng)后參照Lipofectamine 3000的操作說(shuō)明將miR-486 mimics、miR-486 mimics negative control、miR-486 inhibitor和miR-486 inhibitor negative control分別轉(zhuǎn)染綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，以不轉(zhuǎn)染任何試劑的細(xì)胞組為空白對(duì)照。每處理轉(zhuǎn)染8孔細(xì)胞，共計(jì)40孔細(xì)胞。

1. 2. 3 細(xì)胞增殖速度測(cè)定 上述轉(zhuǎn)染細(xì)胞每組留1孔用于觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，其余各孔每隔24 h消化1孔，采用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，評(píng)估不同處理對(duì)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖速度的影響。

1. 2. 4 細(xì)胞RNA提取及反轉(zhuǎn)錄 上述培養(yǎng)72 h的轉(zhuǎn)染細(xì)胞待完成細(xì)胞計(jì)數(shù)后，參照TRIzol說(shuō)明提取細(xì)胞總RNA，使用微量分光光度計(jì)（ND2000，美國(guó)Thermo公司）和1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA質(zhì)量。檢測(cè)合格的RNA參照SuperScript IV VILO（美國(guó)Thermo公司）操作說(shuō)明反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，-20 ℃保存，用于相關(guān)基因表達(dá)的定量檢測(cè)。

1. 2. 5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè) 選擇PI3K-Akt信號(hào)通路關(guān)鍵基因PTEN（Phosphatase and tensin homolog）、GSK3b（Glycogen synthase kinase-3 beta）、PRKCα（Protein kinase C alpha）、Raf-1（Raf-1 proto-oncogene，serine/threonine kinase）、MAPK1（Mitogen-activated protein kinase 1）、 PKN1（Protein kinase N1）、Casp9（Caspase 9）和SGK1（Serum/glucocorticoid regulated kinase 1），檢索Ensembl數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取其mRNA序列，然后使用Oligo 6.0設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增引物（表2），以β-actin為內(nèi)參基因，空白對(duì)照組細(xì)胞中相應(yīng)基因的表達(dá)量為對(duì)照，對(duì)上述基因在不同處理組綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的表達(dá)變化進(jìn)行定量分析。上述基因在Ensembl數(shù)據(jù)庫(kù)中的登錄號(hào)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增引物見(jiàn)表2。實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系20.0 μL：TB Green Premix Ex TaqⅡ（Tli RNaseH Plus）（2×）10.0 μL，上、下游引物（10 μmol/L）各0.8 μL，cDNA模板2.0 μL，ddH2O 6.4 μL。擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性30 s;95 ℃ 10 s，58 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量分析在Roche LightCycler 96（德國(guó)Germany公司）上完成，擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后以0.1 ℃/s的速度進(jìn)行熔解曲線分析。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

PI3K-Akt號(hào)通路關(guān)鍵基因的相對(duì)表達(dá)量采用2-△△Ct法進(jìn)行換算，并以SPSS 13.0進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA）。各試驗(yàn)均重復(fù)3次。

2 結(jié)果與分析

2. 1 miR-486對(duì)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的影響

由圖1可知，空白對(duì)照組及轉(zhuǎn)染miR-486 mimics、miR-486 mimics negative control和miR-486 inhibitor negative control的綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞表現(xiàn)出典型的S形增殖曲線，但各處理間的細(xì)胞增殖速度存在明顯差異。轉(zhuǎn)染miR-486 mimics能使綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的miR-486水平上調(diào)，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖速度加快，培養(yǎng)至48 h即開(kāi)始進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段;而空白對(duì)照組及轉(zhuǎn)染miR-486 mimics negative control和miR-486 inhibitor negative control的綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖速度未見(jiàn)明顯變化;轉(zhuǎn)染miR-486 inhibitor致使綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的miR-486水平下調(diào)，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖基本停滯（圖2），提示miR-486在促進(jìn)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

2. 2 PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)變化

PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的熔解曲線均為單峰，實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，均獲得明亮的單一條帶，且條帶大小與預(yù)期結(jié)果相符（圖3），說(shuō)明實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)效率和特異性均較高，檢測(cè)結(jié)果可靠。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果（圖4）表明，PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因在不同處理組綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量存在明顯差異。其中，PTEN、Raf-1和MAPK1基因在轉(zhuǎn)染miR-486 mimics綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量極顯著低于其他處理組（P<0.01，下同），但在其他處理組間的差異不顯著（P>0.05，下同）;PRKCα和PKN1基因在轉(zhuǎn)染miR-486 mimics綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量極顯著高于其他處理組，但在其他處理組間的差異不顯著;SGK1基因在轉(zhuǎn)染miR-486 mimics綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他處理組（P<0.05，下同），但在其他處理組間的差異不顯著;GSK3β和Casp9基因在不同處理組綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞間的差異均不顯著。

綜合不同處理組綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖情況可知，轉(zhuǎn)染miR-486 mimics綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖速度的加快，可能與細(xì)胞中PTEN、Raf-1和MAPK1基因下調(diào)表達(dá)，以及PRKCα、PKN1和SGK1基因上調(diào)表達(dá)有關(guān);而GSK3β和Casp9基因可能在維持綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞基本生命活動(dòng)中發(fā)揮作用，因此其相對(duì)表達(dá)量在不同處理組間無(wú)顯著差異。

3 討論

骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞由胚胎期的成肌細(xì)胞分化而來(lái)，屬于肌源性干細(xì)胞（Shahini et al.，2018）。在體內(nèi)，當(dāng)骨骼肌受高強(qiáng)度鍛煉、損傷或其他刺激后，處于靜止?fàn)顟B(tài)的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞被激活，通過(guò)增殖和分化成肌纖維以維持骨骼肌組織的進(jìn)一步生長(zhǎng)或完成受損組織修復(fù)（Griffin et al.，2010;Yin et al.，2013;鄭琪等，2017）。在體外，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞不僅可被誘導(dǎo)分化為肌管，還能通過(guò)不同誘導(dǎo)方式使其分化為脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞及胰島素生成細(xì)胞等（薛科等，2014;任宇等，2018;秦本源等，2020;張軍芳等，2020）?？梢?jiàn)，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞是體外研究細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)分化調(diào)控機(jī)制的理想材料。本研究結(jié)果表明，上調(diào)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中miR-486的水平可其進(jìn)入快速分裂增殖狀態(tài)，而骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中miR-486的水平下調(diào)后，即使在增殖培養(yǎng)基中其仍保持靜止?fàn)顟B(tài)，故推測(cè)miR-486水平上調(diào)可激活骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，并促進(jìn)其增殖。在杜氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥患者的肌組織中，肌纖維出現(xiàn)萎縮，處于靜止?fàn)顟B(tài)的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞未被激活而直接進(jìn)入增殖及分化狀態(tài)，因此無(wú)法修復(fù)萎縮的肌組織（仝昕煒，2017）。已有研究表明，肌組織中miR-486的表達(dá)水平顯著低于正常值，故推測(cè)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞無(wú)法被激活與miR-486表達(dá)水平下調(diào)有關(guān)（Small et al.，2010;Alexander et al.，2014），提示miR-486的表達(dá)對(duì)骨骼肌組織正常生長(zhǎng)發(fā)育及穩(wěn)態(tài)維持具有重要意義。

不同處理組綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，當(dāng)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中miR-486表達(dá)上調(diào)時(shí)，PTEN、Raf-1和MAPK1基因的相對(duì)表達(dá)量極顯著下調(diào)，PRKCα和PKN1基因的相對(duì)表達(dá)量極顯著上調(diào)，SGK1基因的相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)，而GSK3β和Casp9基因的相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著變化，提示在綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中miR-486通過(guò)調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)而影響其生長(zhǎng)發(fā)育。本課題組對(duì)綿羊骨骼肌中miR-486靶基因cDNA文庫(kù)的研究表明，PI3K-Akt信號(hào)通路中的PTEN、Foxo1和PIK3R1基因直接受miR-486靶向調(diào)控，說(shuō)明本研究檢測(cè)到因miR-486表達(dá)上調(diào)引起的PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)變化是通過(guò)PTEN和PIK3R1基因表達(dá)下調(diào)而引起，而在細(xì)胞水平上表現(xiàn)為骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)入快速增殖狀態(tài)。此外，PI3K-Akt信號(hào)通路在骨骼肌穩(wěn)態(tài)的維持中也發(fā)揮重要作用。Small等（2010）研究表明，miR-486可通過(guò)激活PI3K-Akt信號(hào)通路而參與小鼠肌肉的生長(zhǎng)調(diào)控及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定維持;Alexander等（2014）在杜氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥的動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)提高肌組織中的miR-486表達(dá)水平，可有效降低DOCK3和PTEN基因表達(dá)量，提高Akt磷酸化水平，最終促使肌肉營(yíng)養(yǎng)不良的癥狀得到緩解;Yue等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，在成年人骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中若敲除PTEN基因，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞將不經(jīng)過(guò)增殖而直接轉(zhuǎn)入成熟分化狀態(tài)，導(dǎo)致骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)量消耗，這種情況若發(fā)生在體內(nèi)則會(huì)影響骨骼肌損傷的修復(fù)和再生;石田培等（2020）對(duì)綿羊胚胎不同發(fā)育階段骨骼肌中circRNA的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，大量差異表達(dá)基因富集于PI3K-Akt信號(hào)通路上。可見(jiàn)，在綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中miR-486通過(guò)調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)而參與細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中miR-486也可能通過(guò)調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路中的其他基因而發(fā)揮作用，但具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

miR-486通過(guò)調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)而參與綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育及增殖，為深入研究miR-486對(duì)綿羊骨骼肌發(fā)育的調(diào)控機(jī)理及優(yōu)質(zhì)肉羊品種培育打下了理論基礎(chǔ)。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）

收稿日期：2020-07-15

基金項(xiàng)目：新疆自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2017D01A51）

通訊作者：張偉（1978-），https：//orcid.org/0000-0003-1007-1681，博士，副教授，主要從事畜禽功能基因研究工作，E-mail：zhangweigsau@163.com

第一作者：王世銀（1979-），https：//orcid.org/0000-0003-3460-7671，副教授，主要從事動(dòng)物遺傳育種研究工作，E-mail：wangshiyin xjnzy@163.com