王 艷，李 潔

西北師范大學(xué)體育學(xué)院，蘭州 730070

目前國(guó)內(nèi)外一些具有強(qiáng)大生物活性的多肽分子不斷地被發(fā)現(xiàn)與鑒定，如腦肽與機(jī)體的學(xué)習(xí)記憶有密切關(guān)系，肌肽與抗氧化有關(guān)等。駱駝是我國(guó)新疆、青海、甘肅、寧夏、內(nèi)蒙古等地區(qū)的特殊珍貴動(dòng)物，惡劣的生存環(huán)境使駱駝血中的白蛋白不僅明顯高于其他哺乳動(dòng)物，且含有非常高的生理活性[1]。雙峰駝的血清蛋白總量中白蛋白的含量達(dá)73.2%，顯著高于牛、馬、羊等其他類似動(dòng)物。應(yīng)用蛋白酶酶解技術(shù)從駝血中制備的駝血多肽，氨基酸(共18種)含量為88.25%，其中必需氨基酸44.82%，非必需氨基酸43.43%，支鏈氨基酸19.15%，必需氨基酸/總氨基酸50.79%，必需氨基酸/非必需氨基酸103.20%，支鏈氨基酸/必需氨基酸42.72%，支鏈氨基酸/總氨基酸21.7%[2]，遠(yuǎn)超過(guò)WHO/FAO/UNU推薦的質(zhì)量比較好的蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)[3]。駝血多肽中44.82%的必需氨基酸還高于魚皮低聚肽(24.43%)[4]和鹿血低聚肽(36.87%)[5]。駝血多肽不僅可作為生物活性肽加以開發(fā)和利用，還具有作為運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑的前景。另外，運(yùn)動(dòng)與營(yíng)養(yǎng)健康效應(yīng)的機(jī)制能通過(guò)線粒體結(jié)構(gòu)與功能及代謝調(diào)節(jié)發(fā)揮作用。因此，本研究擬通過(guò)補(bǔ)充駝血多肽以及復(fù)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，探討駝血多肽對(duì)大鼠骨骼肌線粒體三羧酸循環(huán)、呼吸鏈功能及骨骼肌自由基代謝的影響，為駝血多肽作為生物活性肽應(yīng)用于運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及分組

健康雄性2月齡Wistar大鼠65只，體重200±20 g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[動(dòng)物合格證書：SCXK(甘)2015-0002]，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物飼料常規(guī)飼養(yǎng)。經(jīng)灌胃和跑臺(tái)適應(yīng)后，保留60只大鼠進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。將60只大鼠隨機(jī)分為6組(n=10)：對(duì)照組(control，C)、運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組(exercise training，E)、駝血多肽組(camel blood polypeptide，P)、駝血多肽+運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組(camel blood polypeptide + exercise training group，PE)、?；撬峤M(taurine group，T)、牛磺酸+運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組(taurine + exercise training group，TE)，各組具體處理情況見表1。

表1 大鼠分組及處理情況Table 1 Grouping and treatment of rats

1.2 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方案

參照文獻(xiàn)[6]，E組、PE和TE組大鼠進(jìn)行遞增負(fù)荷水平跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)。第1周：速度15 m/min，運(yùn)動(dòng)時(shí)間20 min/d；第2周：速度20 m/min，運(yùn)動(dòng)時(shí)間20 min/d；第3～4周：速度25 m/min，運(yùn)動(dòng)時(shí)間40 min/d；第5～6周：速度25 m/min，運(yùn)動(dòng)時(shí)間60 min/d。每周訓(xùn)練6天，共訓(xùn)練6周。

1.3 取材及線粒體的提取

運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練計(jì)劃結(jié)束后，空腹?fàn)顟B(tài)下，按1 mL/100 g劑量腹腔注射0.4%的戊巴比妥鈉麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，4 ℃、3 000 rpm離心10 min制備血清。同時(shí)在冰盤上迅速分離腓腸肌，去除脂肪、筋膜等結(jié)締組織后，用冷生理鹽水清洗，液氮冷凍數(shù)小時(shí)，-20 ℃低溫保存待用。

將腓腸肌樣本取出，0～4 ℃放置10 min左右融化，一部分腓腸肌按課題組前期文獻(xiàn)勻漿組織、提取和懸浮線粒體。其余腓腸肌按試劑盒操作勻漿，用于測(cè)定肌組織中的指標(biāo)。

1.4 測(cè)試指標(biāo)及方法

大鼠力竭跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)速度27 m/min[7]，力竭判斷標(biāo)準(zhǔn):動(dòng)物跟不上預(yù)定的速度，隨轉(zhuǎn)動(dòng)皮帶后拖達(dá)30 s，連續(xù)給予聲、光、機(jī)械刺激后,大鼠不能繼續(xù)跑動(dòng)，記錄各組大鼠跑臺(tái)至力竭的時(shí)間。血紅蛋白采用血常規(guī)儀測(cè)定，血氨、血尿素氮、血乳酸均采用檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。檸檬酸合酶(CS)、α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDHC)、酶復(fù)合體Ⅰ(CⅠ)、Ⅳ(CⅣ)和Ⅴ(CⅤ)的活性均用酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法(ELISA法)進(jìn)行測(cè)定。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量均采用檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定?；钚匝踝杂苫?ROS)熒光強(qiáng)度采用DCFH熒光法在激光共聚焦顯微鏡上檢測(cè)。

1.5 主要儀器及試劑

跑臺(tái)(DSPT-202，中國(guó)杭州錢江科工貿(mào)公司)；紫外分光光度計(jì)(G1115A，日本)；高速冷凍離心機(jī)(Allegra 64R，美國(guó))；酶標(biāo)儀(680型，美國(guó)伯樂(lè)公司)；激光共聚焦顯微鏡(OLMPUS，美國(guó))。

駝血多肽(中國(guó)科學(xué)院蘭州分院化學(xué)物理研究所)；?；撬?、牛血清白蛋白(Sigma公司)；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。血清尿素氮、血氨、血清乳酸、ROS、SOD、MDA、考馬斯亮藍(lán)試劑盒(南京建成生物工程研究所)；CS、α-KGDHC、CⅠ、CⅣ、CⅤ、GSH-Px、CAT檢測(cè)試劑盒(上海樊克生物科技有限公司)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體重、力竭時(shí)間及血液指標(biāo)的比較

實(shí)驗(yàn)前各組大鼠體重均無(wú)顯著性差異，6周后大鼠體重均有不同程度的增加，與C組相比，TE組顯著下降10.48%(P﹤0.05)，E、P、PE和T組分別下降3.82%、5.21%、8.59%、2.76%，但均無(wú)顯著性差異。E、P、PE、T和TE組組間無(wú)顯著性差異。6周后大鼠力竭時(shí)間、血紅蛋白、血氨、血尿素氮及血清乳酸含量各組組間均無(wú)顯著性差異，結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠體重、力竭時(shí)間、血紅蛋白、血尿素氮、血氨和血乳酸含量的比較Table 2 Comparison of body weight,exhaustion time,hemoglobin,blood urea nitrogen,blood ammonia,and blood lactate content of

2.2 各組大鼠腓腸肌線粒體三羧酸循環(huán)限速酶活性的比較

與C組相比，CS活性除P組降低(降低6.02%，無(wú)顯著性差異)外，其余各組均升高，其中PE和TE組顯著升高20.07%(P﹤0.01)和18.71%(P﹤0.05)，E組升高13.63%，T組升高2.45%，但均無(wú)顯著性差異；與E組相比，PE和TE組均無(wú)顯著性差異；與P組相比，PE組顯著升高27.76%(P﹤0.01)，T組無(wú)顯著性差異；與PE組相比，TE組無(wú)顯著性差異，與T組相比，TE組無(wú)顯著性差異，結(jié)果見表3。

與C組相比，各組α-KGDHC活性均升高，其中TE組顯著升高15.32%(P﹤0.01)，E、P、PE和T組分別升高8.18%、0.84%、9.39%和7.78%，但均無(wú)顯著性差異。E、P、PE、T和TE組組間無(wú)顯著性差異，結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠腓腸肌線粒體CS和α-KGDHC活性的比較Table 3 Comparison of activities of citrate synthase (CS) and α-ketoglutarate dehydrogenase(α-KGDHC) in gastrocnemius mitochondrial of rats in each

2.3 各組大鼠腓腸肌線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體活性的比較

與C組相比，各組CⅠ活性均升高，其中E和PE組顯著升高(P﹤0.01)，分別升高17.62%和20.97%，P、T和TE組分別升高5.76%、10.55%和11.62%，但均無(wú)顯著性差異。E、P、PE、T和TE組組間無(wú)顯著性差異。結(jié)果見表4。

與C組相比，E、P、PE、T和TE組CⅣ活性均顯著升高，分別升高25.97%(P﹤0.01)、15.36%(P﹤0.05)、28.96%(P﹤0.01)、26.16%(P﹤0.01)，和27.73%(P﹤0.01)。E、P、PE、T和TE組組間無(wú)顯著性差異，結(jié)果見表4。

與C組相比，各組CⅤ活性除P組降低外，其余各組均升高，其中TE組顯著升高22.17%(P﹤0.01)，E、PE和T組分別升高2.27%、9.19%和8.97%，P組下降9.98%，但均無(wú)顯著性差異。與E組相比，PE和TE組均升高，TE組顯著升高19.46%(P﹤0.01)，PE組升高6.76%，但無(wú)顯著性差異；與P組相比，PE和T組均顯著升高(P﹤0.01)，分別升高21.3%和21.05%；與PE組相比，TE組顯著升高11.89%(P﹤0.05)，與T組相比，TE組顯著(P﹤0.05)升高12.11%，結(jié)果見表4。

表4 各組大鼠腓腸肌線粒體酶復(fù)合體Ⅰ、Ⅳ和Ⅴ活性的比較Table 4 Comparison of activities of mitochondrial complex enzymes Ⅰ,Ⅳ and Ⅴ ingastrocnemius of rats in each

2.4 各組大鼠腓腸肌自由基代謝相關(guān)指標(biāo)的比較

與C組相比，各組大鼠腓腸肌SOD活性均升高，其中PE組顯著升高43.27%(P﹤0.01)，E、P、T和TE組分別升高29.17%、25.89%、22.61%和23.02%，但均無(wú)顯著性差異。E、P、PE、T和TE組組間無(wú)顯著性差異，結(jié)果見表5。

與C組相比，各組大鼠腓腸肌GSH-Px活性均升高，其中PE、T和TE組顯著升高(P﹤0.01)，分別升高29.49%、16.7%和19.04%，E和P組分別升高8.99%，和2.56%，但均無(wú)顯著性差異；與E組相比，PE組顯著升高18.81%(P﹤0.01)，TE組升高9.22%，但無(wú)顯著性差異；與P組相比，PE和T組均顯著升高(P﹤0.05)，分別升高26.26%和13.79%；與PE組相比，TE組無(wú)顯著性差異；與T組相比，TE組無(wú)顯著性差異，結(jié)果見表5。

表5 各組大鼠腓腸肌SOD、GSH-Px和CAT活性的比較Table 5 Comparison of activities of SOD,GSH-Px and CAT in gastrocnemius of rats in each group

與C組相比，大鼠腓腸肌CAT活性除P組下降外，其余各組均升高，其中PE組顯著升高21.8%(P﹤0.01)，E、T和TE組分別升高13.58%、5.76%和15%，P組下降10.9%，但均無(wú)顯著性差異；與E組相比，PE和TE組分別升高7.23%，和1.24%，但均無(wú)顯著性差異；與P組相比，PE和T組均顯著升高(P﹤0.05)，分別升高36.7%和18.7%；與PE組相比，TE組下降5.59%，但無(wú)顯著性差異，與T組相比，TE組上升8.73%，但無(wú)顯著性差異，結(jié)果見表5。

與C組相比，各組腓腸肌ROS熒光強(qiáng)度均降低，除E組下降5.73%無(wú)顯著性外，P、PE、T和TE組均顯著下降，分別下降39.21%(P﹤0.05)、89.89%(P﹤0.01)、85.09%(P﹤0.01)和63.15%(P﹤0.01)；與E組相比，PE和TE組均顯著下降(P﹤0.01)，分別下降89.27%和60.91%；與P組相比，PE和T組均顯著下降(P﹤0.01)，分別下降83.36%和75.47%；與PE組相比，TE組顯著上升264.35%(P﹤0.05)，與T組相比，TE組顯著(P﹤0.05)升高147.08%，結(jié)果見表6和圖1。

圖1 大鼠腓腸肌ROS共聚焦顯微鏡照片F(xiàn)ig.1 ROS confocal microscope photomicrograph of rat gastrocnemius

與C組相比，各組腓腸肌MDA含量均降低，其中P、PE和T組顯著下降(P﹤0.05)，分別下降55.12%、57.6%和55.95%，E和TE組分別下降41.68%和46.85%，但均無(wú)顯著性差異；E、P、PE、T和TE組組間無(wú)顯著性差異，結(jié)果見表6。

表6 各組大鼠腓腸肌ROS熒光強(qiáng)度和MDA含量的比較Table 6 Comparison of Fluorescence Intensity of ROS and contents of MDA in gastrocnemius of rats in each

3 討論與結(jié)論

3.1 駝血多肽及運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)大鼠體重的影響

已有研究表明，服用大豆多肽可促進(jìn)中長(zhǎng)跑運(yùn)動(dòng)員體重和瘦體重增加[8]。本研究結(jié)果顯示，6周后各組大鼠體重均低于對(duì)照組，其中TE組具有顯著性差異。各組大鼠體重由低到高順序?yàn)椋篢E組﹤PE組﹤P組﹤E組﹤T組﹤C組，表明各干預(yù)手段均有控制體重的趨勢(shì)，補(bǔ)劑結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練較單純補(bǔ)劑、單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果要好，且補(bǔ)劑和運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練在控制體重方面有協(xié)同效應(yīng)，其中?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳，其次為駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。與其他氨基酸及多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)控制體重的研究結(jié)果不盡一致，其原因可能與氨基酸種類、運(yùn)動(dòng)水平和運(yùn)動(dòng)負(fù)荷有關(guān)。

3.2 駝血多肽及運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)大鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間的影響

大鼠跑臺(tái)力竭的時(shí)間是反映運(yùn)動(dòng)能力的最常用客觀指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，6周的牛磺酸和駝血多肽灌胃補(bǔ)充有延長(zhǎng)大鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間趨勢(shì)，這與羅非魚鱗膠原多肽[9]和豬血多肽[10]能顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重或力竭游泳時(shí)間的研究結(jié)果類似，提示駝血多肽補(bǔ)充可能對(duì)延緩運(yùn)動(dòng)型疲勞具有功效。駝血多肽或?；撬嵫a(bǔ)充結(jié)合有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間雖有延長(zhǎng)趨勢(shì)，但效果不顯著，可能由于跑臺(tái)力竭運(yùn)動(dòng)不同于游泳運(yùn)動(dòng)研究，駝血多肽促進(jìn)肌肉組織蛋白合成，大鼠體重雖未明顯增加，但瘦體重可能增加，跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)下肢負(fù)荷過(guò)大，還需配合游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練評(píng)價(jià)駝血多肽的抗疲勞效果。

3.3 駝血多肽及運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)大鼠血液指標(biāo)的影響

已有研究表明，補(bǔ)充大豆多肽對(duì)運(yùn)動(dòng)員血紅蛋白含量無(wú)顯著影響[8]。本研究結(jié)果相似，各組間血紅蛋白含量均無(wú)顯著性差異，各組血紅蛋白含量由高到低順序?yàn)椋篍組>TE組>PE組>P組>C組>T組。由此可以看出，單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、牛磺酸結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、單純補(bǔ)充駝血多肽均有升高血紅蛋白含量的趨勢(shì)，其中單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最好，單純補(bǔ)充?；撬嵊薪档脱t蛋白的趨勢(shì)。本研究中各干預(yù)手段均不能顯著影響血紅蛋白含量,可能與運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方案、血紅蛋白的主要成分——亞鐵離子等因素有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，各組間血氨含量均無(wú)顯著性差異，各組血氨含量由低到高順序?yàn)椋篢組﹤TE組﹤P組﹤C組﹤E組﹤PE組，提示，?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、單純補(bǔ)充牛磺酸、單純補(bǔ)充駝血多肽有降低血氨的趨勢(shì)，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練有升高血氨的趨勢(shì)，但各干預(yù)手段對(duì)大鼠安靜狀態(tài)時(shí)血氨含量無(wú)顯著影響，提示各干預(yù)手段均不會(huì)對(duì)機(jī)體氨基酸代謝產(chǎn)生顯著影響，機(jī)體氨的產(chǎn)生和消除之間仍保持動(dòng)態(tài)平衡。

本研究結(jié)果顯示，各組間血尿素氮含量均無(wú)顯著性差異，各組血尿素氮含量由低到高順序?yàn)椋篢E組﹤P組﹤T組﹤E組﹤PE組﹤C組，表明各干預(yù)手段使大鼠血尿素氮有下降趨勢(shì)，但不會(huì)顯著影響機(jī)體蛋白質(zhì)代謝。已有類似的研究表明，補(bǔ)充大豆多肽可使運(yùn)動(dòng)員血尿素氮略有下降但不顯著[8]。另有研究表明，補(bǔ)充牡蠣多肽緩解游泳力竭大鼠BUN的升高[11]。提示運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、駝血多肽、?；撬帷Ⅰ勓嚯慕Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練均不會(huì)顯著增加機(jī)體蛋白質(zhì)分解過(guò)程。

本研究結(jié)果顯示，血清乳酸含量各組間均無(wú)顯著性差異，各組血清乳酸含量由低到高順序?yàn)椋篢E組﹤T組﹤C組﹤P組﹤E組﹤PE組。已有研究表明，補(bǔ)充牡蠣多肽緩解游泳力竭大鼠BLA的升高[11]。提示，?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和單純補(bǔ)充?；撬嵊薪档脱迦樗岬内厔?shì)，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、單純補(bǔ)充駝血多肽和駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練有升高血清乳酸的趨勢(shì)，但各干預(yù)手段對(duì)大鼠安靜狀態(tài)時(shí)血清乳酸含量無(wú)顯著影響，不會(huì)顯著影響機(jī)體糖的無(wú)氧代謝。

以上研究結(jié)果表明，駝血多肽、?；撬?、運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)機(jī)體安靜時(shí)氨基酸代謝，蛋白質(zhì)合成和分解，糖的無(wú)氧代謝均無(wú)顯著性影響。

3.4 駝血多肽及運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)大鼠腓腸肌線粒體三羧酸循環(huán)功能的影響

已有研究表明，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練通過(guò)誘導(dǎo)骨骼肌適應(yīng)，從而提高機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力和健康水平。在此過(guò)程中，線粒體具有顯著的可塑性，對(duì)骨骼肌收縮所引發(fā)的一系列信號(hào)刺激做出相應(yīng)的應(yīng)答反應(yīng)，以適應(yīng)骨骼肌對(duì)代謝的需求[12]。耐力訓(xùn)練可以顯著提高田徑運(yùn)動(dòng)員肌肉CS活性。13周65%VO2max持續(xù)中等強(qiáng)度訓(xùn)練顯著提高股薄肌CS活性[13]。還有研究表明，多肽類制劑能夠被機(jī)體快速吸收，且吸收效果比蛋白質(zhì)好，加快葡萄糖、氨基酸和蛋白質(zhì)的利用速率。本研究結(jié)果表明，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、?；撬?、駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練均能提高大鼠腓腸肌線粒體CS活性，其中駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、牛磺酸結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練顯著性提高，單純補(bǔ)充駝血多肽使大鼠腓腸肌CS活性降低，但無(wú)顯著性差異，各組CS活性由高到低順序?yàn)椋篜E組>TE組>E組>T組>C組>P組。表明，補(bǔ)劑結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練在改善三羧酸循環(huán)關(guān)鍵酶CS活性方面效果較佳，且駝血多肽要好于?；撬?。這可能與駝血多肽中富含的氨基酸及支鏈氨基酸碳骨架被機(jī)體吸收作為能源底物，從而提高了三羧酸循環(huán)酶的活性，增加肌肉的產(chǎn)能速率，滿足機(jī)體運(yùn)動(dòng)中對(duì)能量的需求有關(guān)。本研究結(jié)果還顯示，在提高CS活性方面駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練顯著高于單純補(bǔ)充駝血多肽，提示，擬通過(guò)相關(guān)補(bǔ)劑更好地提高三羧酸循環(huán)速率，結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練是必要的。

已有研究表明，長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)有利于骨骼肌α-KGDHC活性和有氧工作能力的提高[14]。本研究結(jié)果顯示，各組α-KGDHC活性均有所升高，其中只有?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練具有顯著性，且效果最佳，其次為駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。各組α-KGDHC活性由高到低順序?yàn)門E組>PE組>E組>T組>P組>C組。提示，擬通過(guò)相關(guān)補(bǔ)劑更好地提高三羧酸循環(huán)速率，結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練是必要的。另外，駝血多肽與?；撬釋?duì)三羧酸循環(huán)關(guān)鍵酶活性的影響程度是有差異的。

3.5 駝血多肽及運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)大鼠腓腸肌線粒體呼吸鏈功能的影響

已有研究表明，大強(qiáng)度耐力運(yùn)動(dòng)能顯著提高大鼠骨骼肌線粒體呼吸鏈CⅠ活性[15]。補(bǔ)充牡蠣多肽緩解游泳力竭大鼠骨骼肌呼吸鏈復(fù)合體CⅠ～Ⅳ活性的降低[11]。補(bǔ)充支鏈氨基酸(branched chain amino acid,BCAA)能減少游泳運(yùn)動(dòng)后大鼠骨骼肌線粒體K+、Ca2+和Mg2+含量的下降，改善運(yùn)動(dòng)后線粒體功能，有利于提高大鼠運(yùn)動(dòng)能力。本研究結(jié)果顯示，各組CⅠ活性均有所升高，其中駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練具有顯著性，各組CⅠ活性由高到低順序?yàn)镻E組>E組>TE組>T組>P組>C組，表明，在提高大鼠腓腸肌線粒體呼吸鏈CⅠ活性方面，駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳。這可能與駝血多肽富含BCAA，為適應(yīng)機(jī)體運(yùn)動(dòng)對(duì)能量的需求，增加了三羧酸循環(huán)速率，使呼吸鏈底物NADH增多，從而使CⅠ活性提高有關(guān)。

本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)[6]，肉堿結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能顯著提高大鼠骨骼肌線粒體呼吸鏈CⅣ活性。本研究結(jié)果顯示，各組線粒體呼吸鏈CⅣ活性均顯著升高，CⅣ活性由高到低順序?yàn)镻E組>TE組>T組>E組>P組>C組，表明各干預(yù)手段均可顯著提高呼吸鏈CⅣ活性，其中駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳。已有研究表明，線粒體呼吸鏈超級(jí)復(fù)合體(mitochondrial respiratory chain supercomplex,mitoSC)mito SCI1+III2+IV1-4是哺乳動(dòng)物線粒體中最豐富的，且肌肉組織中mitoSC具有特異性，CⅠ幾乎全部存在于mitoSC中[16]。運(yùn)動(dòng)能促進(jìn)mito SCI1+III2+IV1-4含量和活性的提高[17]。駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練提高了CⅠ活性，由于骨骼肌線粒體呼吸鏈超級(jí)復(fù)合體的存在，從而促使CⅣ活性也得到提高。CⅠ與CⅣ活性的提高可能還與mito SCI1+III2+IV1-4的組裝增多有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，CⅤ活性除補(bǔ)充駝血多肽不及安靜組(無(wú)顯著性差異)外，其余各組CⅤ活性均升高，其中只有?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練具有顯著性差異，牛磺酸結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練還顯著高于駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練顯著高于單純補(bǔ)充駝血多肽，單純補(bǔ)充?；撬犸@著高于單純補(bǔ)充駝血多肽。各組CⅤ活性由高到低順序?yàn)門E組>PE組>T組>E組>C組>P組，表明，補(bǔ)劑結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練在提高呼吸鏈CⅤ方面要好于單純補(bǔ)劑和單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，且?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳，其次為駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。這可能與補(bǔ)劑結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練提高了呼吸鏈CⅠ、CⅣ活性，在氧供充足的情況下，CⅣ不僅可促進(jìn)下游的氧代謝，還能提高線粒體膜電位[18]，進(jìn)而激活CⅤ活性有關(guān)。以上研究表明，駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練在提高大鼠骨骼肌線粒體呼吸鏈功能方面，效果較好，擬通過(guò)相關(guān)補(bǔ)劑提高線粒體呼吸鏈功能，結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練是必要的。

3.6 駝血多肽及運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)大鼠腓腸肌抗氧化酶活性的影響

已有研究表明，強(qiáng)度較低的有氧運(yùn)動(dòng)可提高機(jī)體的抗氧化能力，有氧運(yùn)動(dòng)可提高大鼠骨骼肌SOD和GSH-Px的活性，補(bǔ)充BCAA有利于抗氧化酶活性的提高以及機(jī)體運(yùn)動(dòng)后自由基的減少。本研究結(jié)果顯示，各組腓腸肌SOD活性均升高，其中駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練具有顯著性差異。各組SOD活性由高到低順序?yàn)椋篜E組>E組>P組>TE組>T組>C組，說(shuō)明，各干預(yù)手段均可提高大鼠腓腸肌SOD活性，其中駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳。已有研究表明，BCAA能夠抑制小鼠脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，清除生成的過(guò)量自由基。本研究結(jié)果顯示，各組大鼠腓腸肌GSH-Px活性均升高，其中駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和單純補(bǔ)充?；撬峋哂酗@著性差異，駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練還顯著高于單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和單純補(bǔ)充駝血多肽，單純補(bǔ)充?；撬犸@著高于單純補(bǔ)充駝血多肽，各組GSH-Px活性由高到低順序?yàn)镻E組>TE組>T組>E組>P組>C組，說(shuō)明，各干預(yù)手段均可提高大鼠腓腸肌GSH-Px活性，補(bǔ)劑結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練在提高骨骼肌GSH-Px活性方面要好于單純補(bǔ)劑和單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，且駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳。

已有研究表明，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能夠提高青年大鼠體內(nèi)的CAT活性。本研究結(jié)果顯示，除單純補(bǔ)充駝血多肽CAT活性有所降低(無(wú)顯著性差異)外，其余各組均升高，其中駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練具有顯著性差異，駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和單純補(bǔ)充牛磺酸還顯著高于單純補(bǔ)充駝血多肽，CAT活性由高到低順序?yàn)镻E組>TE組>E組>T組>C組>P組。說(shuō)明，補(bǔ)劑結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練在提高骨骼肌CAT活性方面要好于單純的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和單純的補(bǔ)劑，其中駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳。以上研究表明，在提高大鼠骨骼肌抗氧化能力方面，駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳。其機(jī)制可能與駝血多肽富含BCAA有關(guān)，這是因?yàn)橐延醒芯空J(rèn)為，BCAA通過(guò)某些通路調(diào)節(jié)蛋白的合成，增加機(jī)體SOD等抗氧化酶的合成以消除運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的自由基。

3.7 駝血多肽及運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)氧自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化終產(chǎn)物的影響

已有研究表明，6周中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)大鼠腓腸肌·OH生成率顯著低于安靜對(duì)照大鼠[19]。已知大豆多肽抗氧化能力強(qiáng)，作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞[20]。本研究結(jié)果也顯示，各干預(yù)手段均可降低大鼠腓腸肌ROS熒光強(qiáng)度。除單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練無(wú)顯著性差異外，單純補(bǔ)充駝血多肽和?；撬帷⒀a(bǔ)充駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和補(bǔ)充?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練均具有顯著性差異，補(bǔ)劑結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練還顯著低于單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，補(bǔ)充駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和單純補(bǔ)充牛磺酸顯著低于單純補(bǔ)充駝血多肽，補(bǔ)充?；撬峤Y(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練顯著高于單純補(bǔ)充牛磺酸和駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。各組大鼠腓腸肌ROS熒光強(qiáng)度由低到高順序?yàn)镻E組﹤T組﹤TE組﹤P組﹤E組﹤C組，提示，在降低大鼠腓腸肌ROS方面，駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳。已有研究表明，有氧運(yùn)動(dòng)能降低機(jī)體或組織的MDA水平，牛磺酸具有抗疲勞功效，也可以降低機(jī)體MDA水平。服用支鏈氨基酸、?；撬岷蛷?fù)合氨基酸可有效降低骨骼肌MDA含量。本研究結(jié)果顯示，各干預(yù)手段均可降低大鼠腓腸肌MDA含量，其中補(bǔ)充駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練、單純補(bǔ)充駝血多肽和牛磺酸具有顯著性差異，各組MDA含量由低到高順序?yàn)椋篜E組﹤T組﹤P組﹤TE組﹤E組﹤C組。說(shuō)明，在降低大鼠腓腸肌MDA含量方面，駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳。其機(jī)制可能與本研究結(jié)果顯示的駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練增強(qiáng)了腓腸肌抗氧化酶活性有關(guān)。以上研究表明，在減少大鼠腓腸肌氧自由基產(chǎn)生、降低脂質(zhì)過(guò)氧化方面，駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練效果最佳。

駝血多肽結(jié)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可提高骨骼肌線粒體三羧酸循環(huán)和呼吸鏈功能，提高骨骼肌抗氧化能力，減少自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，且效果優(yōu)于單純補(bǔ)充駝血多肽或單純運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。

致謝：感謝中國(guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所邸多隆、劉永峰和李云春研究員為本研究提供的資源和技術(shù)幫助。