楊勇環(huán)，林甲凌，饒中程，黃子涵，謝 靜，王海燕

（江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇泰州 225300）

1960 年英國倫敦發(fā)生“火雞X 病”，后來被確診為黃曲霉毒素（Aflatoxins，AF）中毒。AF 是由黃曲霉等霉菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物[1]，1993 年國際致癌研究機構(gòu)將其列為一級致癌物質(zhì)[2]。AF 種類較多，目前已鑒定出B1、B2、G1、G2、M1、M2 等20 余種，其中B1 最常見且毒性最強，能夠引起嚴重的肝損傷，是我國評價飼料、糧食和動物產(chǎn)品（奶制品除外）安全性的重要指標之一[3]。

玉米等糧食作物或其他飼料原料常因保存不當(dāng)、濕度較大等原因?qū)е曼S曲霉等霉菌大量繁殖。AF 性質(zhì)較為穩(wěn)定，發(fā)生污染后很難消除[2]。動物食用被AF 污染的飼料，會導(dǎo)致毒素在各種器官和組織中殘留[4]，并通過肉、蛋、奶等畜牧產(chǎn)品，隨食物鏈傳遞進入人體，進而威脅人類健康。AF 潛在的經(jīng)濟、生態(tài)和健康風(fēng)險已經(jīng)成為關(guān)注的焦點[4-10]。目前，針對農(nóng)產(chǎn)品AF 污染的影響，各國開展了廣泛調(diào)查研究，且根據(jù)自身實際情況，在相關(guān)法律法規(guī)中制定了不同食品及動物飼料中AF 的最大限量標準，以控制或降低AF 污染對人類健康造成的危害[1]。但是也有不少食品沒有規(guī)定最大限量標準，如禽蛋。雞蛋作為人們常食用的動物源性食品，其安全的重要性不言而喻。為此，購買了江蘇省泰州市多個超市和集貿(mào)市場不同產(chǎn)地、不同批次的在售雞蛋，抽取樣本進行AFB1 檢測，了解雞蛋中AFB1 的污染情況，以期為雞蛋產(chǎn)品的衛(wèi)生安全保障提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

2020 年12 月上旬，在泰州市不同超市、集貿(mào)市場采集不同廠家、不同品種、不同時間的60 個種類/批次的雞蛋各30 枚，每個種類/批次隨機選取3 枚進行檢測，總計抽檢了180 枚雞蛋樣品，樣品信息見表1。

表1 雞蛋樣品基本信息

1.2 儀器

SunriseTM酶標儀，購自瑞士帝肯集團公司；Eppendorf 5810R 多功能臺式離心機，購自德國艾本德股份有限公司；Thermo Scientific 微量移液器（8 道30～300 μL），購自賽默飛世爾科技有限公司；Dragon Med 微量移液器（單道20～200 μL、單道200～1 000 μL），購自大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.3 試劑與耗材

AFB1 ELISA 檢測試劑盒（PZ-MM-HQMB01），購自北京普贊生物技術(shù)有限公司；甲醇（AR）、氯化鈉（AR），購自天津市津東天正精細化學(xué)試劑廠；去離子水，由實驗室自行制備。

1.4 方法

1.4.1 提取液配制 稱取氯化鈉180 g，加入去離子水1 350 mL，完全溶解后，再加入甲醇，振蕩混勻，共配制樣品提取液4 500 mL，用于雞蛋中AFB1提取。

1.4.2 樣品處理 參考試劑盒說明書，剔除雞蛋中的蛋清，稱取5 g 蛋黃放置于50 mL 離心管中，然后加入25 mL樣品提取液，劇烈振蕩使充分混勻，4 000 r/min 離心5 min，吸取50 μL 上清液于2 mL帶蓋試管中，再加入950 μL 去離子水（稀釋倍數(shù)為100），搖勻后待檢。

1.4.3 AFB1 殘留量測定 將檢測試劑盒從4 ℃冰箱中取出，于室溫回溫至20～25 ℃（內(nèi)含6 個標準品，分別為0、0.01、0.04、0.16、0.64、2.56 μg/kg），放置1 h，開始檢測。將樣品和標準品對應(yīng)酶標板微孔按序編號，每個樣品和標準品做2 孔平行。首先加標準品/樣品 50 μL 到對應(yīng)的微孔中，再加入 AFB1 酶標物 50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板室溫避光反應(yīng)20 min 后，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300 μL/孔，充分洗滌5 次，每次間隔30 s，最后一次用吸水紙拍干；加入顯色液100 μL/孔，用蓋板膜蓋板室溫避光反應(yīng)10 min；加入終止液50 μL/孔，輕輕振搖混勻，設(shè)定酶標儀于450 nm 處，測定每孔OD 值。

1.4.4 檢測結(jié)果判定 《食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）[3]規(guī)定固體、液體食品中的AFB1 最高限量為20 μg/kg。所檢測的樣品中AFB1 殘留量高于20 μg/kg，判為超標，否則判為未超標。但該標準并未對雞蛋中的AFB1 殘留限量作限定。本次檢測將每個樣品的平均OD 值與標準品OD 值進行比較，確定殘留量范圍，分析污染狀況。設(shè)0.16 μg/kg 參比液的OD 值為0.825，0.64 μg/kg 參比液的OD 值為0.311。當(dāng)0.311 ≤OD ＜0.500（0.20～0.64 μg/kg），表示有微量的殘留；當(dāng)OD ＜0.311（＞0.64 μg/kg）表示為一定的殘留。

2 結(jié)果與分析

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)：有15 枚樣品的AFB1 殘留量為0.20～0.64 μg/kg，全部來自超市，占檢測雞蛋總數(shù)的8.33%（15/180），占超市雞蛋樣品的13.89%（15/108）；來自集貿(mào)市場的24 個品種共計72 枚雞蛋樣品AFB1 殘留量均小于0.16 μg/kg（表2）。

表2 泰州市抽檢雞蛋中AFB1 檢測結(jié)果（OD 值）

來自超市的13 個場家的雞蛋樣本中，有8 個場家的不同批次樣品AFB1 殘留量遠低于0.16 μg/kg，5 個場家存在介于0.20～0.64 μg/kg 的樣品，檢出可疑樣本百分比由高到低分別為，9 號場家（66.67%）、10 號場家（55.56%）、5 號場家（33.33%）、12號場家（33.33%），7號場家（8.30%），詳見表3。

表3 超市中部分場家雞蛋樣品AFB1 殘留檢出情況

3 討論

人類長期攝入含有AF 的食物，如玉米、谷類及動物產(chǎn)品等，會出現(xiàn)毒素蓄積，嚴重時會出現(xiàn)急性中毒，引起肝臟壞死出血，而慢性中毒則會引起肝癌等疾病[9]。據(jù)有關(guān)調(diào)查[5-7]，我國的糧食和飼料中AFB1 污染率很高。為此，在食品安全國家標準GB 2761—2017 中，我國明確規(guī)定了不同食品中的AFB1 的最高限量。但是，在國標中我國并未對雞蛋中AFB1 含量作出限定，而世界范圍內(nèi)到目前為止也還沒有對雞蛋中AF 殘留量作出限量規(guī)定[3，10]，這從某種程度上增加了危害食品安全與人類健康的風(fēng)險[1，10]。

目前，我國對雞蛋中AFB1 殘留量的研究報道較少[4]。雞蛋被AFB1 污染的主要原因是在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中產(chǎn)蛋雞食用的飼料發(fā)霉，真菌大量繁殖后產(chǎn)生了大量的AF。當(dāng)產(chǎn)蛋雞攝入過量AF 后可發(fā)生食欲減退、產(chǎn)蛋率下降、免疫機能下降等問題，毒素還可經(jīng)輸卵管傳遞至雞蛋中，集中于蛋黃，從而導(dǎo)致雞蛋中出現(xiàn)AFB1 殘留[4，8]。本研究對泰州市部分地區(qū)市場上銷售的雞蛋應(yīng)用商品化的ELISA試劑盒進行了AFB1 殘留檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在抽檢的180 枚雞蛋樣品中，15 枚樣品中的AFB1 殘留量為0.20～0.64 μg/kg，占8.33%，全部來自超市，占超市樣品13.89%；而購自集貿(mào)市場的雞蛋樣品（多為農(nóng)村散養(yǎng)雞所產(chǎn)）中AFB1 殘留量較低，遠低于0.16 μg/kg，這可能與散養(yǎng)雞不使用飼料飼喂相關(guān)。養(yǎng)殖場的飼料很多來自同一批原料，如果有污染，則可能出現(xiàn)一定量的殘留。

本次調(diào)查中采用的是ELISA 試劑盒檢測法，與液相色譜等方法相比，可靠性略低，但操作方便，成本較低?？梢韵扔迷摲椒▽Υ罅繕颖具M行初篩，對可疑或陽性的樣本再用其他更可靠的方法進一步驗證。

預(yù)防雞蛋中AF 污染要從源頭入手。首先，在糧食貯藏過程中，要保持通風(fēng)，控制好貯藏環(huán)境的溫度和濕度，降低霉菌的滋生概率，保持良好的衛(wèi)生環(huán)境。其次，在飼料的生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，應(yīng)當(dāng)嚴格控制飼料原料質(zhì)量，盡量選擇抗霉菌作物或者霉菌毒素污染程度較輕地區(qū)的作物，嚴格控制原料的含水量，在不影響飼料的正常生產(chǎn)和使用的前提下，盡量縮短飼料原料的庫存期；在生產(chǎn)過程中要嚴格控制生產(chǎn)條件，防止飼料吸濕發(fā)潮。最后，在飼料的貯存、運輸和使用過程中，盡量縮短庫存時間，加強通風(fēng)除濕，可配合使用一定的防霉劑和吸附劑。在蛋雞飼養(yǎng)環(huán)節(jié)，要嚴格把控飼料質(zhì)量，定期對飼料做好檢測和監(jiān)測，及時更換問題飼料。

本研究僅對泰州市部分超市和集貿(mào)市場進行了采樣，樣品數(shù)量和地域的代表性有一定局限性。希望今后更多的研究單位和研究者對此進一步深入研究，也建議相關(guān)主管職能部門加快開展禽蛋中AFB1 殘留量的檢測和監(jiān)管工作，制定相應(yīng)的最高殘留量標準，以保障禽蛋產(chǎn)品安全。

4 結(jié)論

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，泰州市部分超市規(guī)模場雞蛋中有一定的AFB1 殘留，而集貿(mào)市場雞蛋中的AFB1 殘留量較超市中的要低。因此，規(guī)模場在蛋雞飼養(yǎng)環(huán)節(jié)，要嚴格把控飼料的質(zhì)量安全，定期對飼料做好檢測和監(jiān)測。