王芳蕊，袁雪濤，王 鎮(zhèn)，楊 穎，崔 捷

（1.天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 300402；2.天津市農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津 300402）

豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）俗稱豬藍(lán)耳病，按其病原致病力不同，分為經(jīng)典PRRS 和高致病性PRRS[1]，是當(dāng)前造成養(yǎng)豬業(yè)嚴(yán)重?fù)p失的重要疫病之一。因此，豬場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)PRRS 監(jiān)測(cè)，隨時(shí)關(guān)注豬群感染情況，科學(xué)選擇疫苗，做好PRRS 防控。而豬場(chǎng)選擇哪種PRRS 防控方案及疫苗種類，要根據(jù)豬場(chǎng)自身定位來決定。種豬場(chǎng)、育肥場(chǎng)以及PRRS陰性場(chǎng)、陽(yáng)性穩(wěn)定場(chǎng)或不穩(wěn)定場(chǎng)，在疫苗方案選擇上都有一定的區(qū)別。本研究在天津市某PRRS 陽(yáng)性豬場(chǎng)開展了PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）[2]和滅活疫苗聯(lián)合免疫母豬試驗(yàn)，以驗(yàn)證該免疫方案的防控效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)豬場(chǎng)背景

2021 年3 月，天津市薊州區(qū)某豬場(chǎng)發(fā)生PRRS疫情并伴有氣喘病、流行性腹瀉等疾病。該豬場(chǎng)現(xiàn)存欄母豬200 余頭、保育900 頭；采取自繁自養(yǎng)模式，無(wú)購(gòu)入史，曾免疫豬偽狂犬病活疫苗、豬瘟活疫苗、口蹄疫滅活疫苗，近期免疫流行性腹瀉疫苗，抗體均在正常范圍內(nèi)，未實(shí)施PRRS 疫苗免疫。

病死豬臨床表現(xiàn)為整體瘦弱，頭部有略微浮腫，全身出現(xiàn)藍(lán)紫色瘀斑，耳廓邊緣有明顯出血斑。肺臟表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎，呈現(xiàn)花斑肺（圖1），心尖葉有對(duì)稱性蝦肉樣變化，肺臟實(shí)質(zhì)有個(gè)別不規(guī)則分布的紫紅色實(shí)變區(qū)，腸道內(nèi)充滿稀薄的內(nèi)容物。采集病死豬頜下、腸系膜、腹股溝淋巴結(jié)以及肺臟、脾臟，使用高致病性PRRS 實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果為核酸陰性，即非高致病性PRRS 疫情；使用類NADC-30 毒株核酸檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果為核酸陽(yáng)性。隨機(jī)采集30 份血液樣本進(jìn)行PRRSV 抗原和抗體檢測(cè)，結(jié)果抗原檢測(cè)均為陰性，抗體檢測(cè)9 份陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為30%。結(jié)合上述臨床、剖檢及抗原檢測(cè)結(jié)果，判定該養(yǎng)殖場(chǎng)為PRRS 陽(yáng)性場(chǎng)。

圖1 剖檢所見病豬肺部病變

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 試驗(yàn)豬 妊娠40 d 左右的健康母豬和有呼吸道癥狀的母豬[1]，試驗(yàn)前應(yīng)用ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)其PRRSV 抗體水平。

1.2.2 疫苗 PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株），以下稱“疫苗A”，由杭州某動(dòng)物疫苗有限公司提供，疫苗批號(hào)為 201205；PRRS 滅活疫苗，以下稱“疫苗B”，由杭州某動(dòng)物疫苗有限公司提供，疫苗批號(hào)為201258。

1.2.3 試劑盒 PRRSV 間接ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京天之泰生物科技有限公司，批號(hào)為CPA.43X3。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 疫苗安全性試驗(yàn) 因疫苗B 為滅活疫苗，安全性相對(duì)較高，因此正式試驗(yàn)前僅對(duì)疫苗A 開展安全性試驗(yàn)（預(yù)試驗(yàn)）。隨機(jī)選取妊娠40 d 和80 d 的母豬各5 頭，每頭母豬肌內(nèi)注射1 頭份疫苗A，觀察其體溫、精神狀態(tài)及采食量變化。

1.3.2 免疫效果評(píng)價(jià)試驗(yàn)

1.3.2.1 分組 選取生產(chǎn)性能及生產(chǎn)時(shí)間相近的妊娠40 d 左右的健康母豬20 頭，隨機(jī)分成2 組（試驗(yàn)1 組和對(duì)照組），每組10 頭；另選取妊娠40 d左右有呼吸道癥狀的母豬6 頭作為試驗(yàn)2 組，進(jìn)行耳標(biāo)登記。

1.3.2.2 免疫方案 試驗(yàn)預(yù)飼期為15 d，試驗(yàn)豬只臨床無(wú)異常。試驗(yàn)1 組10 頭母豬和試驗(yàn)2 組6頭母豬均于妊娠42 d 每頭同時(shí)接種1 頭份疫苗A和2 mL 疫苗B，于頸部?jī)蓚?cè)肌肉分開注射，對(duì)照組10 頭母豬于妊娠42 d 同時(shí)注射同等劑量疫苗稀釋液。所有試驗(yàn)豬群均在隔離狀態(tài)下飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境和管理方式相同。

1.3.2.3 安全性觀察 觀察并記錄接種后1～7 d母豬每天上午和下午體溫以及精神狀態(tài)和采食量變化，持續(xù)觀察60 d，并于免疫后不同時(shí)間采集肛拭子、豬舍糞土與水樣進(jìn)行疫苗毒RT-PCR 檢測(cè)。

1.3.2.4 免疫抗體檢測(cè) 在疫苗免疫后0、14、28、42、70 d，各采集5 mL 血液（對(duì)照組28 d 后不再采集），分離血清，測(cè)定PRRSV 抗體水平，并進(jìn)行抗體IRPC 值及其變異系數(shù)（CV）比較分析。CV=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值×100%。

1.3.2.5 母豬生產(chǎn)成績(jī)觀察 記錄每頭試驗(yàn)豬的分娩時(shí)間、產(chǎn)仔總數(shù)、健仔數(shù)，以及產(chǎn)木乃伊胎和死胎數(shù)等。

2 結(jié)果與分析

2.1 安全性

接種疫苗A 后7 d 內(nèi)，妊娠40 d 和80 d 母豬均未表現(xiàn)精神異常、采食下降等不良反應(yīng)[3]。體溫測(cè)定結(jié)果（圖2）顯示：妊娠40 d 母豬注射疫苗A后，全程7 d 最高體溫為38.7 ℃，最低為38.2 ℃；妊娠80 d 母豬全程7 d 最高體溫為38.7 ℃，最低為38.3℃。兩個(gè)妊娠階段的試驗(yàn)?zāi)肛i體溫均未見異常，符合健康母豬的正常體溫標(biāo)準(zhǔn)（38.0～39.5 ℃），表明疫苗A 具有良好的安全性。

圖2 妊娠母豬接種疫苗A 后平均體溫變化規(guī)律

2.2 免疫效果

2.2.1 安全性 接種聯(lián)合疫苗后7 d 內(nèi)，妊娠42 d母豬均未表現(xiàn)精神異常和采食下降等不良反應(yīng)。體溫測(cè)定結(jié)果（圖3）顯示：對(duì)照組母豬全程7 d 最高體溫為38.4 ℃，最低為38.0 ℃；試驗(yàn)1 組母豬全程7 d 最高體溫為38.7 ℃，最低為38.2 ℃；試驗(yàn)2 組母豬全程7 d 最高體溫為38.7 ℃，最低為38.1 ℃。免疫后7、14、21、28、35、42、49 和60 d 采集試驗(yàn)組豬肛拭子進(jìn)行病毒檢測(cè)，均未檢測(cè)到病毒；對(duì)試驗(yàn)豬群飼養(yǎng)環(huán)境采集的豬舍糞土與水樣進(jìn)行RT-PCR 檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。綜上，兩個(gè)試驗(yàn)組豬體溫均正常，符合健康母豬正常體溫標(biāo)準(zhǔn)[4]（38.0～39.5 ℃），疫苗不存在通過糞便向外排毒的風(fēng)險(xiǎn)，表明疫苗A+疫苗B 具有良好的安全性。

圖3 全部試驗(yàn)妊娠母豬接種疫苗A+疫苗B 后平均體溫變化規(guī)律

2.2.2 抗體陽(yáng)性率 采用PRRSV 間接ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒，對(duì)采集的血清樣品進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：免疫前（妊娠42 d），試驗(yàn)1 組10 頭母豬抗體全部為陰性，試驗(yàn)2 組有2 頭母豬抗體為陽(yáng)性，但抗原為陰性；免疫后14、28、42、70 d，2 個(gè)試驗(yàn)組母豬采集樣品的PRRSV 抗體陽(yáng)性率均為100%。對(duì)照組均為陰性。

2.2.3 抗體IRPC 值 統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表1）顯示：試驗(yàn)1 組在免疫后28 d（妊娠70 d）抗體IRPC 平均值達(dá)到高峰195.5，免疫后42 d（妊娠84 d）仍維持在較高水平；試驗(yàn)2 組雖然有2 頭母豬在免疫前曾受野毒感染，但免疫后14 d（妊娠56 d）抗體IRPC 值也快速上升，免疫后28 d（妊娠70 d）達(dá)到高峰172.3，免疫后42 d（妊娠84 d）仍維持在較高水平。結(jié)果表明，試驗(yàn)?zāi)肛i注射疫苗A+疫苗B 可以很好地誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生正常的免疫反應(yīng)[5]。

表1 免疫前后不同時(shí)間各組母豬PRRSV 抗體IRPC 值

2.2.4 CV 統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表2）顯示：與免疫前相比，免疫后14 d，試驗(yàn)1 組和2 組CV 分別下降31 個(gè)和44 個(gè)百分點(diǎn)，表明免疫后血清抗體水平整齊度明顯上升。隨著免疫時(shí)間的延長(zhǎng)，抗體IRPC值變異系數(shù)逐步升高；試驗(yàn)2 組CV 值較試驗(yàn)1 組CV 值變化更小。

表2 免疫前后不同時(shí)間各組母豬PRRSV 抗體CV 值 %

2.3 母豬生產(chǎn)成績(jī)

統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表3）顯示：各組母豬分娩時(shí)間均正常，其中對(duì)照組各項(xiàng)生產(chǎn)指標(biāo)均低于試驗(yàn)組；試驗(yàn)2 組平均窩產(chǎn)活仔數(shù)略低于試驗(yàn)1 組，但2 個(gè)試驗(yàn)組的死胎和木乃伊胎總數(shù)占產(chǎn)仔數(shù)比例明顯低于對(duì)照組。試驗(yàn)組母豬所產(chǎn)仔豬的均勻度、活潑程度均高于對(duì)照組。

表3 各組母豬生產(chǎn)成績(jī)匯總

3 討論

PRRSV 在我國(guó)豬群中呈現(xiàn)遺傳多樣性特征，不同個(gè)體對(duì)同一毒株的易感性也不同[6]，變異毒株間異源保護(hù)性不足造成缺少“通用疫苗”。因此，診斷監(jiān)測(cè)是防控PRRS 的重要前提[7]。豬場(chǎng)要確切了解PRRSV 本身及其感染狀態(tài)的變化和對(duì)生產(chǎn)造成的影響，追蹤后備母豬是否馴化成功以及母豬群的穩(wěn)定性、生長(zhǎng)育肥豬感染狀況，這樣才能科學(xué)合理地選擇疫苗免疫方案，精準(zhǔn)控制PRRS[8]。

PRRS 活疫苗（PC 株）是利用基因嵌合技術(shù)，通過反向遺傳操作方法構(gòu)建的PC 株制備的，（既含有經(jīng)典株的部分基因，又含有高致病性變異株的部分基因），可同時(shí)預(yù)防經(jīng)典和高致病性PRRS。PC 株活疫苗與滅活疫苗聯(lián)合免疫母豬，能更好地產(chǎn)生中和抗體和細(xì)胞介導(dǎo)免疫，在預(yù)防兩種類型PRRS 時(shí)，既能刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，又能激發(fā)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答，實(shí)現(xiàn)更好的防控效果。

在本試驗(yàn)中，母豬同時(shí)免疫PC 株活疫苗與滅活疫苗，1 周內(nèi)體溫變化范圍為0～0.6 ℃，對(duì)母豬分娩時(shí)間也沒有影響；免疫后60 d 試驗(yàn)豬群肛拭子、豬舍糞土與水樣中均沒有檢測(cè)到病毒，證明疫苗不存在通過糞便向外排毒的風(fēng)險(xiǎn)；在產(chǎn)仔性能方面，試驗(yàn)1 組成績(jī)最好，成活率為100%；在仔豬初生重、均勻度和健壯活潑程度方面，試驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組。綜上，初步證明聯(lián)合免疫對(duì)母豬具有較好的安全性。母豬于妊娠42 d 同時(shí)接種PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）和滅活疫苗，免疫后28 d抗體達(dá)到峰值，而CV 值明顯降低，表明該疫苗免疫能夠很好地激發(fā)機(jī)體建立免疫反應(yīng)，并提高豬群抗體的整齊度。通過觀察母豬生產(chǎn)情況，試驗(yàn)各組的生產(chǎn)成績(jī)均優(yōu)于對(duì)照組，證明臨床應(yīng)用PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）和滅活疫苗聯(lián)合免疫母豬效果良好。

本研究采用嵌合病毒活疫苗（PC 株）和滅活疫苗聯(lián)合免疫方案，進(jìn)行病原、應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)以及免疫抗體檢測(cè)[9]，為PRRS 陽(yáng)性豬場(chǎng)科學(xué)制定免疫程序提供了依據(jù)。但本次試驗(yàn)受各方面條件限制，試驗(yàn)動(dòng)物較少（26 頭母豬），結(jié)論基于較少試驗(yàn)動(dòng)物得出具有一定局限性。若要對(duì)生產(chǎn)實(shí)際起到指導(dǎo)作用還需要大數(shù)據(jù)的驗(yàn)證和支持[10]。下一步，將繼續(xù)追蹤觀察該場(chǎng)仔豬生長(zhǎng)情況及PRRS 防控效果，并向同類型豬場(chǎng)推廣該項(xiàng)聯(lián)合免疫技術(shù)方案。