段群棚，趙 碩，周英寧，盧冰霞，何文娜，全琛宇，陳婷婷，許心婷，秦毅斌，趙 武，梁家幸，蔣冬福，李 斌，盧敬專，陳忠偉，何 穎

（1.廣西獸醫(yī)研究所，廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點實驗室，廣西南寧 530001；2.廣西大學(xué)，廣西南寧 530005）

偽狂犬病（pseudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，以妊娠母豬繁殖障礙，新生仔豬神經(jīng)紊亂、腹瀉與高死亡率，育肥豬呼吸障礙和生長緩慢為主要特征，各年齡段豬對其均易感，其中成年豬多表現(xiàn)為隱性感染，可長期帶毒、排毒，因而給PR 防制和根除帶來了巨大困難[1-3]。

gE基因是PRV 主要毒力基因之一，其編碼蛋白在介導(dǎo)感染細胞融合、病毒在細胞間擴散、病毒粒子釋放及病毒延神經(jīng)突觸擴散等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[4-5]。同時，gE基因是病毒增殖的非必須基因，缺失后的病毒既可保持免疫原性，毒力也會大大降低，因此國內(nèi)外普遍采用PRVgE基因缺失疫苗進行PR 免疫，同時配套使用PRV gE 抗體檢測試劑盒，評價豬群的PRV 野毒感染狀況[6-7]，淘汰感染豬只，從而凈化豬場PR。PRVgB基因是PRV 最為保守的基因之一，其編碼的蛋白為PRV增殖所必需的囊膜糖蛋白，在病毒粘附細胞及隨后病毒囊膜與細胞膜融合過程中發(fā)揮重要作用，可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體[8]，因而在gE 抗體陰性的情況下，gB 抗體可以用來評價豬場的PR 免疫效果。PRVgE基因缺失疫苗對預(yù)防和控制豬PR 起到了重要作用，使得PR 在我國得到有效控制。但自2011 年以來，我國出現(xiàn)了PRV 新型變異毒株，而PRVgE基因缺失弱毒疫苗對其不能提供足夠保護，導(dǎo)致免疫豬群仍感染發(fā)病，因此加強豬場PR 監(jiān)測及防控研究對促進和保障養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展有重要意義[9-11]。

廣西獸醫(yī)研究所病毒研究室于2017 年1 月—2020 年12 月，應(yīng)用 ELISA 方法對來自廣西14 個地市部分豬場送檢的血清樣品進行PRV 抗體檢測，并對不同年份、不同季節(jié)、不同地區(qū)、不同生長階段豬群的檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計豬場PRV 野毒感染陽性比例分布狀況，以了解廣西豬場PRV 野毒感染情況和免疫狀況，為豬場防控和凈化PR 提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試劑盒 美國IDEXX 公司的PRV gpI（gE）抗體檢測試劑盒和PRV gB 抗體檢測試劑盒，均購自北京愛德仕元亨生物科技有限公司。

1.1.2 血清樣品 血清樣品均為各豬場被動送檢樣品，為各豬場隨機采樣，采樣豬群均免疫過PRVgE基因缺失活疫苗。2017 年1 月—2020 年12 月，廣西14 個地級市687 個豬場先后自主送檢了15 326 份血清樣品，其中597 個豬場13 291 份血清檢測了PRV gE 抗體，436 個豬場9 582 份血清檢測了PRV gB 抗體。采樣豬群涵蓋6 個生長階段，即哺乳仔豬（1～4 周齡）、保育豬（4～9 周齡）、育肥豬（9 周齡及以上）、種公豬、后備母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬。不同豬場的檢測項目及送檢血清樣品數(shù)量不一（表1）。

表1 2017—2020 年血清樣品送檢情況

1.2 方法

1.2.1 血清樣品制備 經(jīng)豬前腔靜脈或耳緣靜脈無菌采集非抗凝血液樣本2～3 mL，室溫靜置2～4 h后，3 000 r/min 離心3～5 min，取上清置于滅菌離心管中，置-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 PRV gE、gB 抗體檢測 血清樣品抗體檢測均嚴格按照IDEXX 公司生產(chǎn)的PRV gE 抗體檢測試劑盒和PRV gB抗體檢測試劑盒說明書進行操作。

1.2.3 結(jié)果判定 PRV gE 和gB 抗體檢測結(jié)果判定，均按照檢測試劑盒中提供的說明書進行。本次檢測的豬血清樣品均來自使用PRVgE基因缺失疫苗免疫的豬場。在對豬場進行結(jié)果判定時，只要豬場有1 個樣品PRV gE 抗體判定為陽性，則判定該豬場為PRV 感染場。根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定，PRV gB抗體個體陽性率≥70%的豬場，判為免疫合格場。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理與分析 2017 年1 月—2020 年12 月，應(yīng)用 ELISA 方法對來自廣西14 個地市687個豬場送檢的15 326 份血清樣品進行PRV 抗體檢測，分析不同年份、不同季節(jié)、不同地區(qū)、不同生長階段豬群的PRV 感染和疫苗免疫情況，并統(tǒng)計豬場PRV 感染比例分布狀況。3—5 月為春季、6—8 月為夏季、9—11 月為秋季、12 月至次年2 月為冬季。應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 19.0，對檢測結(jié)果數(shù)據(jù)進行卡方檢驗（χ2檢驗），統(tǒng)計分析其差異性。

2 結(jié)果

2.1 不同年份

由表2 可知，2020 年P(guān)RV gE 抗體場陽性率最低，與2017 年、2019 年相比差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于2018 年（P＜0.05）；2017—2020 年P(guān)RV gB 抗體場合格率差異均不顯著（P＞0.05）；2018 年P(guān)RV gE 抗體個體陽性率顯著高于2017 年（P＜0.05），但2018 年后PRV gE 抗體個體陽性率呈顯著下降趨勢（P＜0.05）；2019年P(guān)RV gB 抗體個體陽性率最低，均顯著低于其他年份（P＜0.05）。

表2 不同年份豬PRV 抗體檢測結(jié)果 %

2.2 不同季節(jié)

由表3 可知，冬季PRV gE 抗體場陽性率最低，與春季、秋季差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于夏季（P＜0.05）；PRV gB 抗體場合格率在一年四季差異均不顯著（P＞0.05）。冬季PRV gE、gB 抗體個體陽性率均最低，與春季、夏季和秋季差異均顯著（P＜0.05）。

表3 不同季節(jié)豬PRV 抗體檢測結(jié)果 %

2.3 不同地區(qū)

由表4 可知，廣西14 個地市均存在不同程度的PRV 野毒感染，不同地區(qū)感染率差異明顯，其中桂東地區(qū)的玉林市和貴港市野毒感染最為嚴重，桂南地區(qū)的北海市、防城港市、欽州市，桂東地區(qū)的賀州市和梧州市，桂西地區(qū)的百色市和河池市野毒感染相對較輕。廣西14 個地市PRV gB 抗體個體陽性率均較高，PRV gB 場合格率方面，除梧州偏低外，其他地市均較高。

表4 不同地區(qū)豬PRV 抗體檢測結(jié)果 %

2.4 不同生長階段豬群

由表5 可知，2017—2020 年，后備母豬、育肥豬PRV gE 和gB 抗體個體陽性率均顯著低于其他生長階段豬群（P＜0.05）。

表5 2017—2020 年不同生長階段豬群PRV 抗體檢測結(jié)果 %

2.5 感染比例分布

由表6 可知，2017—2020 年受檢豬場的PRV gE 抗體陰性豬場占比分別為50.69%、42.29%、56.67%和68.65%，其中2018 年后PRV gE 抗體陰性豬場占比呈逐年上升趨勢，即PRV gE 抗體陽性豬場占比呈逐年下降趨勢。2017—2020 年受檢豬場血清樣本gE 抗體個體陽性率在50%以上的豬場占比分別為19.35%、22.92%、18.33%和10.45%，表明2018 年后廣西受檢豬場PRV 感染率逐年下降。

表6 2017—2020 年豬場PRV 感染比例分布統(tǒng)計結(jié)果

3 討論

3.1 免疫情況

PR 仍是嚴重威脅我國豬養(yǎng)殖業(yè)的重要疫病之一。疫苗免疫是預(yù)防和控制PR 的重要手段，同時建立豬場合理科學(xué)的免疫程序至關(guān)重要。通過定期監(jiān)測PRV gB 抗體情況，可及時了解豬群的免疫情況，優(yōu)化疫苗免疫程序。本次調(diào)查對全區(qū)采集的436 個豬場9 582 份血清樣品進行了PRV 免疫抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2017—2020 年P(guān)RV gB 抗體個體陽性率均明顯高于國家規(guī)定的群體免疫合格水平（70%），說明近年來廣西豬群PRV 免疫抗體一直維持在較高水平。從不同季節(jié)PRV 抗體檢測結(jié)果來看，冬季PRV gB 抗體個體陽性率均顯著低于其他季節(jié)，說明較低的溫度和高濕度有可能對疫苗免疫效力產(chǎn)生影響。從不同地區(qū)豬場PRV 抗體檢測結(jié)果來看，各地區(qū)豬PRV gB 抗體個體陽性率雖然存在一定差異，但均在84%以上，說明廣西各地區(qū)PRV 免疫抗體水平均較高。從不同生長階段豬群PRV 抗體檢測結(jié)果來看，不同生長階段豬群豬PRV gB 抗體個體陽性率存在顯著差異，后備母豬、育肥豬PRV gB 抗體水平較低，個體陽性率均顯著低于其他生長階段豬群，說明后備母豬、育肥豬存在免疫空白，需加強免疫；另一方面，公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、哺乳仔豬和保育豬PRV gB 抗體和gE抗體個體陽性率均顯著高于后備母豬和育肥豬，表明較高的gB 抗體個體陽性率并不能完全保護豬群不受PRV 野毒感染，這與李海琴等[12]的調(diào)查結(jié)論一致，也反映出PRV 野毒感染可能還存在其他較高的風(fēng)險因素，與寧慧波等[13]在2016—2018 年我國規(guī)?；i場PRV 感染的血清學(xué)及傳播風(fēng)險因素調(diào)查中發(fā)現(xiàn)的一點式生產(chǎn)模式、公豬感染、仔豬肌注免疫頻率等17 項因素與PRV 傳播有較強聯(lián)系的結(jié)論相符合，說明僅依靠疫苗免疫并不能徹底控制PR 發(fā)生與流行。

3.2 感染情況

本次調(diào)查共檢測來自廣西14 個地級市597個豬場的13 291 份血清樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2017—2020 年廣西豬場PRV gE 抗體平均場陽性率為50.25%，PRV gE 抗體平均個體陽性率為19.37%，相比陳馳等[14]報道的2018—2019 年江蘇場陽性率75.61%、個體陽性率38.44%，河南場陽性率88.24%、個體陽性率63.28%，江西場陽性率71.70%、個體陽性率30.48%，廣西豬場PRV 感染程度均低于上述省份。2018—2020 年廣西PRV gE抗體場陽性率和個體陽性率均呈下降趨勢，說明近年來廣西豬場PRV 野毒感染狀況有明顯好轉(zhuǎn)。其原因可能受非洲豬瘟疫情影響，大量PRV 野毒感染嚴重且生物安全等級較低的中小規(guī)模豬場轉(zhuǎn)行或被淘汰，大批生物安全等級較高的大型規(guī)模豬場逐漸增多，以及豬場普遍加強生物安全管理。但目前PRV 野毒感染情況在廣西豬場中仍普遍存在，須繼續(xù)加強豬場PR 綜合防控和凈化。

不同季節(jié)檢測結(jié)果顯示，PR 一年四季均有發(fā)生，夏季的PRV gE 抗體場陽性率和個體陽性率最高，均顯著高于冬季，說明廣西PR 具有季節(jié)性流行特點，夏季多發(fā)，冬季發(fā)病率較低，這與王昌建等[15]報道的2018 年湖南規(guī)模豬場夏季PRV gE 抗體陽性率最高（25.1%），冬季PRV gE 抗體陽性率最低（13.2%）的結(jié)論基本一致，但與早期研究報道的冬春兩季多發(fā)不一致[3]。分析原因可能是，當(dāng)前流行的PRV 新型變異毒株流行特點出現(xiàn)了新變化，具體原因有待深入研究探討。

不同地區(qū)的檢測結(jié)果表明，廣西14 個地級市均存在PRV 野毒感染，不同地區(qū)感染率差異明顯，其中生豬主產(chǎn)區(qū)玉林市、貴港市的感染率均顯著高于其他地區(qū)。這是因為玉林、貴港市送檢血清樣品多來自中小規(guī)模豬場，而中小規(guī)模豬場多存在免疫及檢疫程序不合理、生物安全意識不強、飼養(yǎng)管理水平不高等疫病防控缺陷問題，從而導(dǎo)致豬場PRV 野毒感染情況嚴重。這一分析與黃曉慧等[16]、高建鵬等[17]報道的中小型規(guī)模豬場PRV野毒感染率較高的研究結(jié)論一致。

本次檢測發(fā)現(xiàn)，不同生長階段的豬群均有PRV 感染，說明不同生長階段豬群對 PRV 均易感。哺乳仔豬、保育豬、育肥豬PRV gE 抗體個體陽性率呈逐漸下降趨勢，很可能是來自經(jīng)產(chǎn)母豬的PRV 母源抗體隨著時間逐漸消失所致。研究表明，自然狀態(tài)下，PRV 母源抗體在120 d 左右才消失[18]。廣西育肥豬PRV gE 抗體個體陽性率最低，與傅宏慶等[19]報道的2016—2018 年江蘇省育肥豬PRV 感染率最高，李海琴等[20]報道的2016—2017年江西省育肥豬PRV 感染率最高，林日丹等[21]報道的2013—2018 年福建省育肥豬感染率較高等研究結(jié)論均不一致，說明相較于江蘇、江西、福建，廣西育肥豬PRV 感染率偏低。公豬、后備母豬均存在不同程度的感染，說明豬場需加強引種前檢疫，確保引進的公豬、后備母豬均未感染PRV。種豬群較高的PRV 野毒陽性率是導(dǎo)致整個豬場持續(xù)陽性的根本原因，而由于種豬飼養(yǎng)時間較長，一旦感染PRV 野毒，可長期帶毒排毒，引起持續(xù)性感染。

4 結(jié)論

本次檢測發(fā)現(xiàn)，近年來隨著疫苗免疫的加強，廣西規(guī)模豬場PRV 的防控凈化已初見成效，但PRV 野毒感染情況仍普遍存在，說明僅依靠疫苗免疫并不能徹底控制PR 的發(fā)生與流行。因此，還需加強引種前檢疫，提高豬場飼養(yǎng)管理水平，建立完善的豬場生物安全防控體系，同時定期開展血清抗體監(jiān)測，制定合理的免疫程序，及時淘汰感染豬，最終達到凈化PR 的目的。