王志強(qiáng)，任建煒，溫建新

(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，山東青島 266109)

貓細(xì)小病毒病(Feline panleukopenia，F(xiàn)P)又稱貓泛白細(xì)胞減少癥、貓瘟、貓傳染性腸炎，是由貓細(xì)小病毒(Feline Panleukopenia Virus，F(xiàn)PV)引起的一種急性高度接觸性傳染病，1歲齡以下的貓最容易感染，尤其是3～6月齡的幼貓，病貓主要表現(xiàn)為機(jī)體內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量急劇減少，F(xiàn)PV還對(duì)貓科動(dòng)物的消化道系統(tǒng)造成巨大傷害，病貓表現(xiàn)出嚴(yán)重的消化道癥狀[1]。FP已經(jīng)被歐洲、美洲的多個(gè)國(guó)家定義為貓最嚴(yán)重的傳染病之一。在我國(guó)FP全年均能發(fā)病，在每年的冬季及初春季節(jié)多發(fā)。目前FP的病例量占貓傳染病病例量的60%以上，是名副其實(shí)的貓科動(dòng)物的頭號(hào)殺手。

1 貓細(xì)小病毒病的臨床癥狀

FPV侵入動(dòng)物機(jī)體后通常會(huì)有1周左右的潛伏期，有的動(dòng)物會(huì)長(zhǎng)期少量帶毒[2]，當(dāng)外界環(huán)境出現(xiàn)變化或出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)時(shí)則發(fā)病。由于個(gè)體因素、外界環(huán)境因素、病毒毒株因素等影響，患病貓表現(xiàn)的臨床癥狀也多種多樣，通常會(huì)呈現(xiàn)雙相型熱，先升至40 ℃左右的高溫，隨后體溫恢復(fù)正常，1～2 d后又升至高溫狀態(tài)。發(fā)病早期通常會(huì)出現(xiàn)精神沉郁、食欲減退，甚至廢絕、腹瀉的癥狀，緊接著會(huì)出現(xiàn)脫水、貧血、頑固性腹瀉、嘔吐的癥狀，之后會(huì)出現(xiàn)便血、吐血、眼球下陷、體溫降低等嚴(yán)重癥狀，此時(shí)查血常規(guī)會(huì)發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)量降至2.0×109/L以下(正常為5.50×109/L～19.50×109/L)，淋巴細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞減少的數(shù)量最多[3]，接著白細(xì)胞會(huì)進(jìn)一步降低，當(dāng)白細(xì)胞數(shù)量降至1.0×109/L以下時(shí)，死亡率接近100%。最急性的病例常常會(huì)不見(jiàn)任何癥狀而突然死亡，常被懷疑為中毒死亡。妊娠母貓常會(huì)表現(xiàn)流產(chǎn)的癥狀，因?yàn)镕PV可透過(guò)血胎屏障進(jìn)行垂直傳播感染[2]。

2 貓細(xì)小病毒病的病理變化

被FPV感染的貓，尸體外觀通常為被毛粗亂，暗淡無(wú)光，出現(xiàn)眼球下陷，皮下組織干燥的脫水癥狀。剖檢的病理變化主要在消化道，表現(xiàn)為胃腸擴(kuò)張，腸黏膜充血出血、壞死，腸系膜水腫?？漳c和回腸處出現(xiàn)滲出，腸絨毛變短或消失，腸壁增厚。腸系膜淋巴結(jié)腫大、充血出血，甚至壞死，呈現(xiàn)大理石樣花紋。肝臟、腎臟等實(shí)質(zhì)器官變化不是很明顯，只是出現(xiàn)充血癥狀，脾臟會(huì)有針尖樣出血點(diǎn)[4]。

3 貓細(xì)小病毒病的臨床檢測(cè)方法

FP的檢測(cè)方法有快速試紙板檢測(cè)法、血凝和血凝抑制(HA-HI)試驗(yàn)、電鏡觀察、免疫熒光試紙檢測(cè)、實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)等，但基于操作的方便性及營(yíng)收狀況，主要的臨床確診方法有膠體金試紙板檢測(cè)、免疫熒光試紙檢測(cè)、實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)等方法。

3.1 膠體金試紙板檢測(cè)

膠體金試紙板檢測(cè)實(shí)際是利用膠體金免疫層析法的技術(shù)，以膠體金作為示蹤標(biāo)志物，樣本抗原滴加到樣品孔內(nèi)，發(fā)生層析作用至膠體金標(biāo)記的抗體處與之結(jié)合，形成金標(biāo)抗原抗體復(fù)合物，在檢測(cè)線處與固定抗體結(jié)合出現(xiàn)結(jié)果，層析至對(duì)照線處與二抗結(jié)合出現(xiàn)對(duì)照結(jié)果[5]。此方法操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果出具迅速，約5～10 min即可判定結(jié)果，當(dāng)病毒含量較低時(shí)，容易出現(xiàn)假陰性或淡淡的一條標(biāo)記，容易導(dǎo)致寵物醫(yī)生漏診，膠體金試紙板檢測(cè)方法逐漸被替代。

3.2 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)

實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)是通過(guò)將標(biāo)有熒光素的Taqman探針與處理后的抗原DNA、正反向引物混合，進(jìn)行DNA擴(kuò)增，擴(kuò)增后DNA酶會(huì)將Taqman探針切斷，使得熒光素游離在體系內(nèi)，進(jìn)而通過(guò)特定光的照射，產(chǎn)生熒光，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，熒光會(huì)呈現(xiàn)指數(shù)式增長(zhǎng)，進(jìn)而求得Ct值[6]。實(shí)時(shí)熒光PCR的檢測(cè)結(jié)果十分準(zhǔn)確，即使較低含量的病毒亦可以檢出，并且可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣本，但目前儀器購(gòu)買和使用成本均較高，市面上常見(jiàn)的8孔儀器大約需要6萬(wàn)元，試劑均價(jià)也在100元/個(gè)左右，并且操作耗時(shí)相對(duì)較長(zhǎng)，寵物醫(yī)院接受率較低，目前只有少數(shù)醫(yī)院使用。

3.3 免疫熒光試紙檢測(cè)

免疫熒光試紙檢測(cè)是一種新興的檢測(cè)技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確率相對(duì)較高的優(yōu)點(diǎn)，目前被大多數(shù)醫(yī)院接受。免疫熒光試紙檢測(cè)采用的是熒光免疫層析技術(shù)，該試紙板由樣品墊、含熒光微球交聯(lián)的檢測(cè)抗體標(biāo)記墊、含二抗的硝酸纖維素、吸水紙及底板組成。具體原理如下：在加樣孔處滴入抗原溶液，抗原溶液沿層析方向擴(kuò)散至標(biāo)記墊處，此時(shí)抗原被抗體結(jié)合形成抗原-抗體-熒光微球復(fù)合物，該復(fù)合物繼續(xù)擴(kuò)散至硝酸纖維素膜處，與二抗結(jié)合，形成二抗-抗原-抗體-熒光微球復(fù)合物，未被二抗標(biāo)記的復(fù)合物繼續(xù)層析被吸水紙吸收，最后根據(jù)熒光信號(hào)強(qiáng)度可以檢測(cè)出抗原的濃度，此法原理與膠體金試紙板類似，不過(guò)相比較而言，它的靈敏性比膠體金試紙板高很多。有研究表明，免疫熒光試紙板的靈敏度是普通膠體金試紙板的10倍，免疫熒光試紙板比實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)節(jié)省大量金錢成本和時(shí)間成本，正在被快速普及[7]。

4 貓細(xì)小病毒病的治療

臨床上對(duì)FP的治療一般都遵循對(duì)癥治療原則，采用鎮(zhèn)痛消炎、適當(dāng)止吐、強(qiáng)力止瀉、營(yíng)養(yǎng)支持、補(bǔ)液補(bǔ)鉀的治療方法?；疾∝?jiān)谇?～2 d的治療是非常關(guān)鍵的，如果治療得當(dāng)，病情將會(huì)逐漸好轉(zhuǎn)，體內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量將恢復(fù)正常，預(yù)后也將會(huì)良好；倘若治療不當(dāng)或者遇到強(qiáng)毒株感染，在第3～4 d患貓就會(huì)出現(xiàn)便血、吐血等癥狀，白細(xì)胞數(shù)量會(huì)迅速下降至3.0×109/L以下，甚至?xí)椭?.0×109/L，之后常常會(huì)愈后不良；并且被FPV感染后的第2～3 d，患貓就可對(duì)外界排毒，造成其他寵物貓的感染，最長(zhǎng)可達(dá)30 d左右[8]。所以住院治療既是治療的需要，也是對(duì)家庭環(huán)境的保護(hù)。被FPV感染后的治療方案分為特異性治療和對(duì)癥治療。

特異性治療主要是抗病毒治療，首選是貓重組干擾素-ω(Feline recombinant interferon-ω, feIFN-ω)、FPV單克隆抗體等生物制品。臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)feIFN-ω具有廣譜的抗病毒作用，對(duì)FP的治療有較好的效果，它主要通過(guò)與靶細(xì)胞表面的受體結(jié)合、調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫效果、強(qiáng)化免疫細(xì)胞活性、誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗體蛋白，從而從多方面抑制病毒的復(fù)制。feIFN-ω最早是在1994年由日本批準(zhǔn)生產(chǎn)的用于貓杯狀病毒治療的生物制劑，慢慢的經(jīng)過(guò)多年發(fā)展，也被用作FP病例的治療[9]。在國(guó)內(nèi)的試驗(yàn)研究證實(shí)，feIFN-ω對(duì)FPV有很好的臨床效果，feIFN-ω對(duì) γ-球蛋白和免疫球蛋白的產(chǎn)生有較好的刺激作用[10]；其次，特異性治療可以選用FPV單克隆抗體和FPV血清等。目前常用的FPV單克隆抗體的效果不如CPV單克隆抗體效果已成為獸醫(yī)界的共識(shí)，許多生物制品廠家也在加速研發(fā)，并進(jìn)行大量臨床投放試驗(yàn)，其臨床效果還有待證實(shí)。

對(duì)癥治療主要是輔助性抗菌治療，這是治療方案中重要的一環(huán)，F(xiàn)PV入侵消化道系統(tǒng)，會(huì)給腸道帶來(lái)巨大的破壞作用，使得黏膜屏障損傷，有害菌會(huì)輕易的進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，造成敗血癥的發(fā)生，所以使用抗菌藥物會(huì)起到至關(guān)重要的作用。常用的藥物有頭孢菌素類藥物如頭孢噻呋、頭孢喹肟等，氟喹諾酮類藥物也可以起到較好的效果[11]，這些藥物對(duì)腸道內(nèi)的厭氧菌、革蘭氏陰性菌的作用效果良好，對(duì)敗血癥的預(yù)防起到關(guān)鍵作用。針對(duì)嘔吐腹瀉的癥狀，常采用強(qiáng)力止瀉、適度止吐的方法，避免電解質(zhì)的大量流失，止瀉藥物常采用穿心蓮注射液等藥物，可以在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到止瀉的效果。止吐一般采用檸檬酸馬羅匹坦等藥物，但應(yīng)該注意使用的用量和頻率，過(guò)分的止吐會(huì)導(dǎo)致患貓出現(xiàn)腸套疊、腸梗阻等癥狀，更容易引起敗血癥的發(fā)生，所以在治療時(shí)應(yīng)該時(shí)常關(guān)注寵物狀態(tài)，每天用B超進(jìn)行掃查，降低發(fā)生率。對(duì)于補(bǔ)液常采用靜脈滴注5%的葡萄糖溶液、0.9%的生理鹽水溶液和乳酸林格溶液進(jìn)行補(bǔ)液，靜脈補(bǔ)液可以較好的補(bǔ)充丟失的水分，調(diào)節(jié)PH值，補(bǔ)充流失的電解質(zhì)；補(bǔ)液的量會(huì)參照患貓的脫水程度進(jìn)行判定，通常為80～100 mL/kg；當(dāng)血液膠體滲透壓出現(xiàn)變化時(shí)，還要對(duì)血漿蛋白進(jìn)行補(bǔ)充，常用的有白蛋白和球蛋白等[12]。當(dāng)出現(xiàn)便血癥狀時(shí)需要對(duì)其進(jìn)行凝血治療。

5 貓細(xì)小病毒疫苗的研究進(jìn)展

5.1 傳統(tǒng)疫苗概述

FP主要是通過(guò)注射疫苗的方式進(jìn)行預(yù)防。目前預(yù)防FP的傳統(tǒng)疫苗主要有兩種，一種是美國(guó)碩騰公司生產(chǎn)的“妙三多”疫苗，此疫苗為滅活苗，不易產(chǎn)生病毒擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)；另一種是美國(guó)默沙東(原荷蘭英特威)公司生產(chǎn)的“貓三聯(lián)”疫苗，它是一種弱毒苗?！懊钊唷笔俏覈?guó)目前唯一在用的一款FP疫苗?！懊钊唷币呙绯丝梢灶A(yù)防貓細(xì)小病毒病外，還可以預(yù)防貓杯狀病毒病和貓皰疹病毒病?！懊钊唷币呙绲某Ｒ?guī)免疫程序?yàn)椋贺?月齡時(shí)進(jìn)行首免，3月齡時(shí)進(jìn)行二免，4月齡時(shí)進(jìn)行三免，如果錯(cuò)過(guò)首免日期，二免、三免日期也隨之后延。基礎(chǔ)免疫完成后，以后每年再進(jìn)行加強(qiáng)免疫1次。“妙三多”疫苗的FPV毒株采用的是標(biāo)準(zhǔn)株FPV-CU4毒株，F(xiàn)PV-CU4毒株是在1990年報(bào)道的，目前FPV-CU4毒株被用作多種抗體的制備及疫苗生產(chǎn)。

5.2 新型疫苗概述

隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，許多學(xué)者正在加緊研制亞單位疫苗、基因工程疫苗等新型疫苗，用于FPV的預(yù)防?；蚬こ桃呙缡侵笇⒒虮磉_(dá)的蛋白加以純化，制作成抗原，從而達(dá)到制備新型疫苗的目的，這種疫苗具有安全性高、可量產(chǎn)等特點(diǎn)[13]。曾有報(bào)道指出，昆蟲(chóng)的細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)可以表達(dá)VP2蛋白，作為制備疫苗的免疫原[14]。將表達(dá)的VP2蛋白注射小鼠，采集小鼠血清可將VP2的特異性中和抗體生產(chǎn)出來(lái)，而且產(chǎn)生速度較快[15]。基因疫苗又稱作核苷酸疫苗，是指將含有抗原基因的序列導(dǎo)入質(zhì)粒中，以質(zhì)粒作為載體注入到宿主體內(nèi)，誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，達(dá)到預(yù)防疾病的目的[15]。目前我國(guó)關(guān)于VP2基因疫苗的研究表明將VP2基因的主要抗原表位克隆在表達(dá)載體pVAX1中，結(jié)果顯示能夠在細(xì)胞中產(chǎn)生較好的免疫原性，也可以在小鼠體內(nèi)成功表達(dá)[16]。但是目前這些新型疫苗都還處于試驗(yàn)階段，并沒(méi)有真正用于臨床，但這些技術(shù)已漸趨于成熟，相信隨著科技的不斷發(fā)展，新型疫苗的成本也將大大降低，最終實(shí)現(xiàn)臨床應(yīng)用。