■張三珊 劉海粟 林妙華 廖紹安 王安利 付勝利

（華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東省水產(chǎn)健康安全養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東普通高校生態(tài)與環(huán)境科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510631）

草魚（Ctenopharyngodon idellus）是我國(guó)重要的淡水養(yǎng)殖魚類，具有生長(zhǎng)快速，營(yíng)養(yǎng)成分豐富、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，養(yǎng)殖的產(chǎn)量也逐年增加[1-2]。由于草魚養(yǎng)殖密度大，導(dǎo)致出血病、腸炎等腸道疾病發(fā)生頻率高[3-4]。魚類腸道具有營(yíng)養(yǎng)吸收功能和屏障功能，腸道屏障主要包括機(jī)械屏障、免疫屏障和微生物屏障[5]，這三大屏障具有保護(hù)腸道結(jié)構(gòu)完整、維持功能穩(wěn)定、提高免疫能力的作用[5-9]。因此，提高腸道屏障能力對(duì)魚體的健康生長(zhǎng)有重要作用。

研究發(fā)現(xiàn)，中草藥飼料可以通過調(diào)節(jié)腸道的緊密連接、維持腸道黏膜上皮的完整性和改善腸道菌群結(jié)構(gòu)來增強(qiáng)腸道的機(jī)械屏障、免疫屏障和微生物屏障[10-13]。部分中草藥之間還具有協(xié)同作用從而提高藥物效果，具有低成本和低感染以及更多的免疫效應(yīng)等優(yōu)勢(shì)[14-17]。大蒜（Allium sativum）、茯苓（Poria cocos）等作為我國(guó)常見中草藥，逐漸被應(yīng)用于飼料中。大蒜，百合科，具有提高機(jī)體SOD和GSH含量達(dá)到增強(qiáng)抗氧化能力的功效，適量的大蒜能顯著增加褐鱒的補(bǔ)體C3的表達(dá)水平，從而提高褐鱒的非特異性免疫能力[18]。茯苓，多孔菌科茯苓屬，作為常見中草藥具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、抗炎、抗菌、抗氧化等藥理活性，存在巨大的開發(fā)利用價(jià)值[19]。飼喂茯苓能提高點(diǎn)帶石斑魚的血清補(bǔ)體、白細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞吞噬率，從而提高非特異性免疫力[20]。但到目前為止，大蒜與茯苓對(duì)草魚腸道屏障的影響以及兩者是否存在協(xié)同作用尚不清楚。因此，有必要對(duì)飼料中添加大蒜和茯苓對(duì)草魚腸道結(jié)構(gòu)和功能的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)兩者是否具有協(xié)同作用進(jìn)行探究。

本文以草魚為試驗(yàn)對(duì)象，檢測(cè)了草魚腸道結(jié)構(gòu)、非特異性免疫功能、抗氧化能力及腸道微生物群落等指標(biāo)，對(duì)比了在飼料中單獨(dú)添加和混合添加大蒜、茯苓對(duì)草魚腸道機(jī)械屏障、免疫屏障和微生物屏障的影響，探究了大蒜和茯苓配合使用是否具有協(xié)同效應(yīng)，為今后選擇中草藥作為飼料添加劑提供參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚

試驗(yàn)用草魚購(gòu)自廣州市花都區(qū)花山粵強(qiáng)豐水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)，選取大小規(guī)格整齊、體表無傷、魚體健壯、體質(zhì)量為（10.0±1.5）g的健康草魚400尾。馴養(yǎng)2周，每天喂2次基礎(chǔ)飼料，無疾病臨床表現(xiàn)（正常游泳、積極進(jìn)食），馴養(yǎng)期間個(gè)體自然死亡率極低（＜1.7%）。試驗(yàn)在循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行，每個(gè)養(yǎng)殖桶中水體容積為500 L。每天檢測(cè)水質(zhì)指標(biāo)（養(yǎng)殖循環(huán)水溫度為23～25℃，pH為7.5～7.7，氨氮＜0.05 mg/L，溶解氧＞7.0 mg/L）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與管理

用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)2周并禁食24 h后，隨機(jī)選擇360條平均重量為（12.11±0.2）g的幼年草魚分為3個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組，每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)放入12個(gè)養(yǎng)殖桶中（500 L，每桶30條魚）。每天在8：30和16：30喂魚2次，每餐飽食投喂。在試驗(yàn)期間，養(yǎng)殖水質(zhì)指標(biāo)與馴養(yǎng)期相同。以魚粉、大豆粉、花生麩等原料配制成基礎(chǔ)飼料，各組飼料的基本成分及營(yíng)養(yǎng)水平見表1[14，21]。對(duì)照組為基礎(chǔ)飼料，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼料上補(bǔ)充大蒜、茯苓。根據(jù)參考文獻(xiàn)及本實(shí)驗(yàn)室之前研究[22-23]，確定試驗(yàn)A組為2%大蒜粉，試驗(yàn)B組為1%茯苓粉，試驗(yàn)AB組為1%大蒜粉和0.5%茯苓粉。飼料水分低于100 g/kg，用密封袋包裝并在20℃下保存使用。

表1 試驗(yàn)飼料的組成和營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ)，%)

1.2.2 取樣

養(yǎng)殖8周后，將試驗(yàn)魚禁食24 h，然后從每個(gè)養(yǎng)殖桶隨機(jī)取樣3條魚，用100 mg/L丁香酚麻醉。解剖后取草魚腸道中部組織，部分用95%乙醇浸泡保存用于16S rRNA高通量測(cè)序，部分用多聚甲醛常溫保存用于制作腸道切片，其余在液氮速凍后-80℃下保存待用。

1.2.3 腸道組織切片觀察

將用多聚甲醛保存的腸道組織固定24 h后，進(jìn)行HE（蘇木精-伊紅染色法）染色，中性膠封藏后制成腸道組織切片[21]。將組織切片置于光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照，利用Image pro plus 6.0軟件統(tǒng)計(jì)分析小腸絨毛數(shù)量、長(zhǎng)度、寬度及內(nèi)壁厚度和杯狀細(xì)胞數(shù)量。

1.2.4 抗氧化能力的測(cè)定

分別使用總蛋白含量、SOD活力和GSH含量試劑盒進(jìn)行草魚抗氧化能力的測(cè)定：取出草魚腸道組織，按Elabscience試劑盒上的說明書測(cè)定草魚腸道組織的總蛋白含量、SOD活力及GSH含量。

1.2.5 總RNA提取和實(shí)時(shí)熒光定量PCR

取出魚樣的腸道組織，使用Trizol試劑（Vazyme，中國(guó)）并按照試劑說明書提取腸道RNA并保存于-80℃。使用NanoDrop 2000（NanoDrop，美國(guó)）測(cè)定RNA濃度和純度，并用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)總RNA的質(zhì)量。根據(jù)提取腸道組織總RNA的質(zhì)量，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa，中國(guó)）并按照試劑盒說明書操作，將1 μg總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA并保存于-80℃待用[14]。將反轉(zhuǎn)錄后的樣品以草魚β-actin（DQ211096.1）作為內(nèi)參基因[14]，按照SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒（Vazyme，中國(guó)）操作，在ABI 7500 real-time PCR儀上進(jìn)行qRT-PCR，測(cè)定C3、LYZ、zo-1、claudin-3的mRNA表達(dá)水平，設(shè)置qRT-PCR程序?yàn)椋?5℃預(yù)熱10 min，然后在95℃下15 s，60 ℃下1 min，循環(huán)40次后得出Ct值。采用2-ΔΔCt法計(jì)算各基因相對(duì)表達(dá)量[24-25]。引物在廣州擎科生物技術(shù)有限公司合成，β-actin及相關(guān)基因引物見表2。

表2 試驗(yàn)所用引物序列

1.2.6 DNA提取和16S rRNA高通量測(cè)序

將用95%乙醇浸泡的草魚腸道樣品送至廣州吉瑞基因技術(shù)有限公司（廣州），提取草魚腸道中的微生物基因組DNA，并通過Illumina MiSeq測(cè)序平臺(tái)技術(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。根據(jù)以往描述的方法分析DNA的質(zhì)量和進(jìn)行高通量測(cè)序，并進(jìn)行草魚腸道微生物群落結(jié)構(gòu)分析[26]。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）”表示。數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件，以one-way ANOVA及LSD法（最小顯著性差異法）進(jìn)行單因素方差分析及顯著性檢驗(yàn)，若0.01＜P＜0.05，表示差異顯著（*）；若P＜0.01，表示差異極顯著（**）。用Graph Pad Prism 5.0數(shù)據(jù)繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中添加大蒜和茯苓對(duì)草魚腸道組織形態(tài)的影響（見圖1、表3）

表3 大蒜和茯苓對(duì)草魚腸道形態(tài)指標(biāo)的影響

圖1 飼料中添加大蒜和茯苓對(duì)草魚幼魚腸道結(jié)構(gòu)形態(tài)的影響

經(jīng)顯微鏡觀察和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)A組和試驗(yàn)B組草魚腸道的絨毛長(zhǎng)度都顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），而絨毛寬度及杯狀細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05），其中A組草魚腸道絨毛長(zhǎng)度相對(duì)值最高。試驗(yàn)AB組與對(duì)照組的腸道杯狀細(xì)胞數(shù)量、絨毛長(zhǎng)度、絨毛寬度都有顯著差異（P＜0.05），其中腸道杯狀細(xì)胞數(shù)是對(duì)照組的2.29倍（P＜0.05）。

2.2 飼料中添加大蒜和茯苓對(duì)草魚緊密連接蛋白基因相對(duì)表達(dá)水平的影響（見圖2）

本試驗(yàn)檢測(cè)了各組草魚腸道組織內(nèi)的連接蛋白基因zo-1和claudin-3相對(duì)表達(dá)量。在圖2a中，3個(gè)試驗(yàn)組zo-1的相對(duì)表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。在圖2b中，試驗(yàn)A組、B組與對(duì)照組的claudin-3基因的相對(duì)表達(dá)量無顯著差異，而試驗(yàn)AB組claudin-3表達(dá)量最高，且極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。

圖2 飼料中添加大蒜和茯苓對(duì)草魚腸道zo-1（a）和claudin-3（b）基因表達(dá)的影響

2.3 飼料中添加大蒜、茯苓對(duì)草魚腸道抗氧化酶活力表達(dá)水平的影響（見圖3）

由圖3所示，試驗(yàn)A組與對(duì)照組的SOD活力及GSH含量均無顯著差異，而試驗(yàn)B組和AB組的SOD活力和GSH含量顯著或極顯著高于對(duì)照組（P＜0.05，P＜0.01），且試驗(yàn)AB組的這兩種腸道抗氧化能力指標(biāo)都比其他試驗(yàn)組的高。

圖3 飼料中添加大蒜和茯苓對(duì)草魚腸道SOD活力（a）和GSH（b）含量的影響

2.4 飼料中添加大蒜、茯苓對(duì)草魚腸道非特異免疫功能的影響（見圖4）

如圖4所示，3個(gè)試驗(yàn)組的草魚腸道免疫因子補(bǔ)體C3和溶菌酶（LYZ）的相對(duì)表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組水平（P＜0.01）。其中，試驗(yàn)B組的C3相對(duì)表達(dá)量最高且顯著高于其余試驗(yàn)組，而LYZ的相對(duì)表達(dá)量在3個(gè)試驗(yàn)組中相差不大。

圖4 飼料中添加大蒜和茯苓對(duì)草魚腸道免疫基因C3（a）和LYZ（b）表達(dá)水平的影響

2.5 飼料中添加大蒜和茯苓對(duì)草魚腸道微生物群落組成的影響

通過Illumina MiSeq平臺(tái)共獲得665 972條質(zhì)量過濾序列，有效序列數(shù)為37 447～95 907條。以97%的一致性進(jìn)行聚類分析顯示，草魚腸道菌群可分為227個(gè)操作分類單元(OTUs)，其中對(duì)照組共197個(gè)OTUs，試驗(yàn) A 組共163個(gè)OTUS，試驗(yàn) B組共 174個(gè)OTUS，試驗(yàn)AB組共198個(gè)OTUs，4個(gè)組共同的OTUs有135個(gè)（見圖5）。對(duì)比各組之間的OTUs數(shù)量可以發(fā)現(xiàn)，添加大蒜或茯苓對(duì)草魚腸道微生物群落的OTUs指數(shù)無顯著影響。進(jìn)一步對(duì)比試驗(yàn)AB組與對(duì)照組之間草魚腸道微生物重要類群，并對(duì)兩組樣本進(jìn)行LDA評(píng)分，發(fā)現(xiàn)混合添加大蒜和茯苓對(duì)腸道微生物類群的組成影響顯著，如圖6所示，對(duì)照組中草魚腸道微生物特征類群為g__Escherichia_Shigella，而試驗(yàn)AB組中草魚腸道微生物特征類群較為豐富，分別為f__Brevinemataceae、c__Spirochaetia、o__Brevinematales、p__Spirochaetes、g__Brevinema、f__Rhodobacteraceae、o__Rhodobacterales和g__Defluviimonas。

圖5 飼料中添加大蒜和茯苓各組草魚幼魚腸道微生物分類韋恩圖

圖6 對(duì)照組和AB組腸道微生物的腸道微生物類群LDA值分布柱狀圖（a）和腸道微生物類群LDA進(jìn)化分支圖（b）

2.6 飼料中添加大蒜和茯苓對(duì)草魚腸道微生物主要細(xì)菌豐度的影響

在科水平上，物種相對(duì)豐度圖顯示出草魚腸道微生物的30個(gè)主要菌群（見圖7a），其中對(duì)照組最優(yōu)勢(shì)菌群為擬桿菌科（Bacteroidaceae），較優(yōu)勢(shì)菌群為梭桿菌科（Fusobacteriaceae）＞弧菌科（Vibrionaceae）＞乳桿菌科（Lactobacillaceae）。A組和B組最優(yōu)勢(shì)菌群為梭桿菌科（Fusobacteriaceae）。A組較優(yōu)勢(shì)菌群為擬桿菌科（Bacteroidaceae）＞芽孢桿菌科（Bacillaceae）＞毛螺菌科（Lachnospiraceae），B組較為優(yōu)勢(shì)菌為Brevinemataceae＞巴斯德氏菌科（Pasteurellaceae）＞纖毛菌科（leptotrichiaceae）。AB組最優(yōu)勢(shì)菌群為硝化細(xì)菌螺旋體（Brevinemataceae），較優(yōu)勢(shì)菌群為擬桿菌科（Bacteroidaceae）＞瘤胃菌科（Ruminococcaceae）＞腸桿菌科（Enterobacteriaceae）。

將1種有益菌和2種有害菌的相對(duì)豐度繪制成柱狀統(tǒng)計(jì)圖（見圖7b），對(duì)照組草魚腸道中擬桿菌科的相對(duì)豐度極顯著高于試驗(yàn)B組（P＜0.01）和顯著高于試驗(yàn)AB組（P＜0.05）。對(duì)照組草魚腸道弧菌科相對(duì)豐度極顯著高于A組（P＜0.01），顯著高于試驗(yàn)B組和試驗(yàn)AB組（P＜0.05）。試驗(yàn)B組和試驗(yàn)AB組的Brevinemataceae相對(duì)豐度水平極顯著高于對(duì)照組及試驗(yàn)A組（P＜0.01），其中試驗(yàn)AB組Brevinemataceae相對(duì)豐度最大，接近30%，高于對(duì)照組水平20%以上。

圖7 各組草魚腸道科水平上的物種相對(duì)豐度圖（a）與Brevinemataceae、Bacteroidaceae和Vibrionaceae的相對(duì)豐度（b）

3 討論

魚類腸道具有營(yíng)養(yǎng)吸收功能和屏障功能，腸道屏障包括機(jī)械屏障、免疫屏障和微生物屏障等[5]。絨毛長(zhǎng)度和寬度的增加是腸道養(yǎng)分吸收表面積增加的標(biāo)志[1]，杯狀細(xì)胞則主要通過產(chǎn)生黏蛋白而增加腸道的消化吸收功能[27]。本試驗(yàn)飼料中添加大蒜或茯苓對(duì)腸道絨毛的生長(zhǎng)有促進(jìn)的效果，除了絨毛長(zhǎng)度顯著增加外，絨毛寬度及杯狀細(xì)胞數(shù)也增加，說明大蒜和茯苓對(duì)草魚幼魚腸道絨毛的發(fā)育及杯狀細(xì)胞的分裂具有促進(jìn)作用，有利于增強(qiáng)草魚腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收功能。兩個(gè)相鄰腸上皮細(xì)胞之間的連接是腸黏膜機(jī)械屏障的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，跨膜蛋白如claudin-3和胞質(zhì)蛋白zo-1所組成的復(fù)雜蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)在相鄰腸上皮細(xì)胞的連接中發(fā)揮重要作用[28]。本研究中，3個(gè)試驗(yàn)組的zo-1均極顯著高于對(duì)照組，其對(duì)應(yīng)的絨毛長(zhǎng)度也顯著高于對(duì)照組，這與任衛(wèi)英等的研究結(jié)果：腸道絨毛高度與腸道緊密連接蛋白表達(dá)量成正相關(guān)的結(jié)論相符合[29]。對(duì)比單獨(dú)添加大蒜或茯苓，混合添加后腸道緊密連接蛋白claudin-3表達(dá)水平極顯著提高，說明大蒜和茯苓在腸道可能通過協(xié)同作用對(duì)草魚腸道上皮機(jī)械屏障的結(jié)構(gòu)穩(wěn)固有明顯的促進(jìn)作用，有利于保護(hù)機(jī)體抵御外界毒性物質(zhì)的侵入[30]。

SOD是腸道中常見的抗氧化酶，而GSH含量則常用于反映機(jī)體抗氧化能力的指標(biāo)。SOD和GSH具有清除代謝副產(chǎn)物氧化自由基（ROS）的功能，在維持腸道的穩(wěn)態(tài)和活性氧平衡中起重要作用[5，30]。在本研究中，飼料添加茯苓后，提高了草魚腸道SOD的活力和GSH酶的含量，這與劉紅柏等[31]及黃聰亮等[32]研究的結(jié)果相似，這說明茯苓具有提高草魚腸道抗氧化能力的功能。然而飼料單獨(dú)添加2%大蒜喂養(yǎng)的草魚的SOD的活力與對(duì)照組相比無顯著變化，有研究表明添加大蒜粉2.5%可顯著提高鏡鯉的SOD活性[22]。當(dāng)本研究用茯苓與1%大蒜混合添加后，藥物的抗氧化功能高于單獨(dú)添加大蒜或茯苓，說明大蒜和茯苓具有協(xié)同提高草魚腸道抗氧化能力的作用。

魚類的腸道免疫屏障具有防止致病性抗原入侵機(jī)體的功能[24]。在魚類中，補(bǔ)體C3參與吞噬和多種免疫調(diào)節(jié)過程，溶菌酶LYZ是一種能攻擊細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖的陽(yáng)離子酶，起非特異性天然免疫分子的作用，因此C3和LYZ在腸道的免疫屏障功能中起重要作用[33-34]。本研究結(jié)果表明，添加大蒜或茯苓對(duì)草魚的腸道中免疫因子C3和LYZ轉(zhuǎn)錄水平有顯著的促進(jìn)作用，且茯苓促進(jìn)補(bǔ)體C3基因表達(dá)的效果更好，說明大蒜或茯苓都能增強(qiáng)腸道的非特異性免疫功能，茯苓的效果可能更突出。這可能是由于大蒜可激活單核細(xì)胞的分泌功能，促使溶菌酶大量釋放，從而增強(qiáng)非特異性免疫功能[15]，茯苓中的主要成分是活性物質(zhì)茯苓多糖，茯苓多糖中的β（1-3）-葡聚糖與巨噬細(xì)胞上的受體蛋白結(jié)合激發(fā)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)，除此之外，活性多糖與補(bǔ)體因子結(jié)合進(jìn)一步激活魚類非特異性免疫系統(tǒng)[19]。以往研究還表明添加10 g/kg的茯苓可增加鯉魚紅細(xì)胞補(bǔ)體C3受體的數(shù)量[23]，可見茯苓增強(qiáng)魚類免疫功能的途徑是復(fù)雜多樣的。

腸道微生物屏障由微生物群落組成，能促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞增殖分化和增強(qiáng)腸道黏膜的免疫反應(yīng)，在營(yíng)養(yǎng)吸收、機(jī)體抵御病原菌入侵及腸道穩(wěn)態(tài)等方面發(fā)揮重要作用[9，35]。腸道微生物以寄主的食物為食，餌料的組成影響著魚類腸道微生物群落的結(jié)構(gòu)[36-37]。本研究的各組草魚腸道的最優(yōu)勢(shì)菌群存在差異，其中對(duì)照組為擬桿菌科，添加大蒜或茯苓后都變?yōu)樗髼U菌科，而大蒜茯苓混合時(shí)變?yōu)橄趸?xì)菌螺旋體（Brevinemataceae），可能是因?yàn)榇笏夂蛙蜍咴谀c道中代謝產(chǎn)物協(xié)同抑制了擬桿菌科及梭桿菌科，而使得Brevinemataceae的占比增大，說明大蒜或茯苓能改變草魚腸道的優(yōu)勢(shì)菌群。除此之外，添加大蒜和茯苓也降低弧菌科的豐度。擬桿菌和弧菌是動(dòng)物腸道內(nèi)常見的致病菌，與機(jī)體腸道炎癥、免疫失調(diào)等疾病密切相關(guān)[38-39]。梭桿菌門則與低密度脂蛋白膽固醇和總膽固醇的含量呈正相關(guān)，梭桿菌門豐度降低可能促進(jìn)機(jī)體對(duì)脂類的利用[40]。Brevinemataceae屬于硝化細(xì)菌，能減緩由于氨氮脅迫對(duì)魚的損害[41]。因此添加大蒜、茯苓不僅可抑制致病菌促進(jìn)益生菌來提高機(jī)體免疫力，還可能通過降低梭桿菌提高對(duì)脂質(zhì)的利用，從而改善草魚的消化吸收能力。

4 結(jié)論

本研究初步表明飼料中添加大蒜或茯苓都能改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，增加腸道免疫因子，改善腸道微生物的群落結(jié)構(gòu)。不同飼料添加劑在效果上存在差異，如添加大蒜能改善腸道結(jié)構(gòu)并降低腸道病原菌豐度，添加茯苓能提高腸道非特異性免疫因子的表達(dá)。當(dāng)大蒜和茯苓混合添加后，對(duì)草魚的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)、非特異免疫功能和腸道微生物群落有更好的改善效果，說明茯苓與大蒜對(duì)腸道結(jié)構(gòu)功能的改善存在協(xié)同促進(jìn)作用，但其最適配比以及協(xié)同作用的機(jī)理有待進(jìn)一步研究。本文可為中草藥添加劑的研發(fā)、促進(jìn)水產(chǎn)健康養(yǎng)殖方面上提供一定的參考價(jià)值。