葉兵兵 楊什補(bǔ) 李萬(wàn)輝

（四川民族學(xué)院農(nóng)學(xué)院 626001）

松茸是一類稀有的野生食、藥用真菌，在我國(guó)主要分布于東北地區(qū)、西藏地區(qū)、云南省及四川省。四川省的松茸又主要分布于甘孜藏族自治州的康定市、雅江縣、稻城縣、丹巴縣、九龍縣等，松茸的組成成分比較復(fù)雜，含有多糖物質(zhì)、多肽類物質(zhì)、油脂類物質(zhì)、萜類物質(zhì)及各種酶等活性物質(zhì)，相關(guān)研究不斷表明松茸多糖具有良好的藥用價(jià)值及生物活性，同時(shí)還具有抗輻射、抗腫瘤、提高免疫力的作用[1]。為了更好地開(kāi)發(fā)松茸的藥用價(jià)值，了解松茸對(duì)其他病癥的治療效果，特選取甘孜州地區(qū)的松茸作為提取松茸多糖的原材料進(jìn)行松茸多糖降血糖作用實(shí)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

昆明系小鼠20 只(雌雄各半)，體重為18～22g。由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

松茸采購(gòu)于甘孜州地區(qū)；水浴恒溫鍋采購(gòu)于群安實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；離心機(jī)采購(gòu)于群安實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；血糖檢測(cè)試紙條、血糖檢測(cè)儀采購(gòu)自江蘇魚(yú)躍醫(yī)療設(shè)備股份有限公司；四氧嘧啶（ALX）5g 購(gòu)自上海伊卡生物技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取松茸多糖的方法

松茸粉碎并過(guò)篩備用，在水浴恒溫鍋中料液比1：15，溫度90℃的條件下浸提3h。然后在4000r/min 的條件下離心10min，重復(fù)合并上層清澈的液體，沉淀的物質(zhì)及液體再次按照正交表再加入15 倍蒸餾水，再重復(fù)2 次，然后合并上層清澈的液體以備用[2]。蛋白質(zhì)的脫除采用Sevag 法，重復(fù)3 次后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式濃縮到原體積的1/3，待到濃縮液完全冷卻后再往濃縮液中加入適量的無(wú)水乙醇，讓濃縮液中的乙醇濃度達(dá)到預(yù)先設(shè)計(jì)的量。在4℃下低溫靜置24h 醇沉，然后4000r/min 離心10min，分離乙醇與沉淀。在醇沉結(jié)束后往水層中加入足量乙醇，乙醇的濃度達(dá)到75%時(shí)開(kāi)始沉淀，除去水層然后再用丙酮進(jìn)行洗滌除水。將已經(jīng)用丙酮進(jìn)行除水后的沉淀物放到溫度為50℃的鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥5h，待到重量恒定不變后稱量出的物質(zhì)即為粗多糖提取物。

1.2.2 高血糖小鼠模型的建立

將實(shí)驗(yàn)小鼠分為2 組，分別為松茸高血糖組、喂水高血糖組，每組10 只，公母隨機(jī)。并對(duì)每只小鼠進(jìn)行編號(hào)與標(biāo)記，同時(shí)記錄下每只小鼠的血糖值。然后分別對(duì)松茸高血糖組及喂水高血糖組的小鼠腹腔注射3.6mg 四氧嘧啶，即濃度為18mg/ml 的四氧嘧啶（ALX）0.2ml，并在7d 后對(duì)每只小白鼠的血糖值進(jìn)行測(cè)量[3]。

1.2.3 檢測(cè)松茸多糖對(duì)小鼠降血糖的作用

先設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以建立了的高血糖小鼠模型為基礎(chǔ)，在22～25℃的條件下將20 只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7d，并測(cè)定每只小鼠的血糖值，觀察是否造模成功及每一組小鼠的血糖值變化情況。在第7 天造模成功后，松茸組的小白鼠只投喂松茸多糖提取液及每日定量的飼料；喂水組的小白鼠也只投喂水及每日定量的飼料。在持續(xù)飼喂7d 后(即實(shí)驗(yàn)的第14 天）開(kāi)始測(cè)量每組小鼠的血糖值，并比較分析每組小鼠的血糖值變化。

連續(xù)灌喂14d，在1、7、14d 用血糖檢測(cè)儀和血糖檢測(cè)試紙條分別測(cè)定每組小鼠的血糖值并記錄數(shù)據(jù)，保證小白鼠的生命活力，可以采用剪尾法對(duì)小白鼠進(jìn)行采血檢測(cè)，但需要注意每次剪尾不能超過(guò)1cm。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠造模前和造模后血糖檢測(cè)

血糖檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1 和表2，由表1 和表2 可知小鼠造模成功。

2.2 松茸多糖對(duì)小鼠降血糖作用的影響

3 討論

表1 小白鼠血糖值均在7mmol/L 左右，該部分小鼠的血糖值屬于正常區(qū)間，表明實(shí)驗(yàn)小鼠健康無(wú)不適合實(shí)驗(yàn)的個(gè)例；表2 中高血糖建模組中的大部分小鼠的血糖值均高于11.1mmol/L，表明建模成功，建模未成功的小白鼠不做重點(diǎn)觀察；表3中在經(jīng)過(guò)同等時(shí)間的松茸多糖投喂后，投喂松茸多糖的高血糖小鼠的血糖值下降幅度遠(yuǎn)大于喂水高血糖對(duì)照組的血糖下降值。

表1 造模前血糖檢測(cè)（第1 天）（單位：MMOL/L）

表2 造模成功后血糖檢測(cè)（第7 天）（單位：MMOL/L）

表3 小白鼠平均血糖值與標(biāo)準(zhǔn)差

因此，甘孜州地區(qū)富含松茸多糖的松茸的提取及其在降血糖方面的作用將在治療糖尿病、高血壓等方面有廣闊的的發(fā)展前景[4]，松茸多糖在降血糖作用上的應(yīng)用也將更加廣泛地被群眾和患者所接受。