李玉靜，陳哲，胡福初，阮城城，羅志文，王祥和，范鴻雁，張治禮

摘? 要：SVP（short vegetative phase）是一類開花抑制基因，通過調(diào)節(jié)開花相關(guān)基因的表達(dá)，影響植物從營養(yǎng)生長階段向生殖生長階段的轉(zhuǎn)變進(jìn)程。根據(jù)公布的菠蘿基因組信息，從‘臺農(nóng)4號菠蘿中克隆到2個AcSVP基因AcSVP1和AcSVP2。結(jié)果表明：AcSVP1和AcSVP2分別編碼225和230個氨基酸，均含有MADS-box、K-box保守結(jié)構(gòu)域，二者所編碼蛋白均屬M(fèi)ADS-box基因家族成員。定量PCR分析結(jié)果顯示，2個AcSVP基因在菠蘿莖尖、莖基和葉中均有不同程度的表達(dá)，乙烯利處理后主要表現(xiàn)為下調(diào)。乙烯利處理8 h內(nèi)，AcSVP1在莖尖、葉中的表達(dá)顯著下調(diào)，但在莖基組織中呈現(xiàn)先下調(diào)后上升的趨勢;乙烯利處理后8 h，莖基組織中AcSVP1的相對表達(dá)量略高于對照。與AcSVP1不同，乙烯利處理8 h內(nèi)AcSVP2在莖尖、莖基、葉3種組織中均明顯下調(diào);乙烯利處理后8 h，AcSVP2在莖尖、莖基、葉組織中的相對表達(dá)量只有對照的8%、44%和33%。SVP是目前已知的最重要的一類開花抑制基因，AcSVP在響應(yīng)乙烯利的過程中表達(dá)顯著下調(diào)，表明其在乙烯利誘導(dǎo)菠蘿成花過程中可能發(fā)揮重要作用。

關(guān)鍵詞：菠蘿;SVP基因;基因克隆;乙烯利

中圖分類號：S668.3? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

Responses of Pineapple SVP Genes to Ethephon Stimulation

LI Yujing1，2， CHEN Zhe2*， HU Fuchu2， RUAN Chengcheng1，2， LUO Zhiwen2， WANG Xianghe2，

FAN Hongyan2， ZHANG Zhili2*

1. Institute of Life Sciences and Pharmacy， Hainan University， Haikou， Hainan 570228， China; 2. Institute of Tropical Fruit Trees， Hainan Academy of Agricultural Sciences / Key Laboratory of Tropical Fruit Tree Biology of Hainan Province / Haikou Investigation Station of Tropical Fruit Trees， Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Haikou， Hainan 571100， China

Abstract： SVP （short vegetative phase） is a type of flowering suppressor gene， which regulates the expression of flowering-related genes to affect the transition process of plants from the vegetative growth stage to the reproductive growth stage. According to the published pineapple genome information， two AcSVP genes named AcSVP1 and AcSVP2 were cloned in ‘Tainong 4 pineapple. Analyses showed that AcSVP1 and AcSVP2 encoded 225 and 230 amino acids， respectively， and both contained MADS-box and K-box conserved domains. The proteins encoded belonged to the MADS-box gene family members. qRT-PCR analysis showed that the genes were expressed in different degrees in stem tip， stem base and leaf tissues， and after ethephon treatment the genes were mainly down-regulated to varying degrees compared with the control. Within 8 h of ethephon treatment， AcSVP1 was significantly down-regulated in the stem tips and leaves while in the stem-basal tissue which showed a trend of first down and then up-regulation， and the relative expression of AcSVP1 in the stem-basal tissues was slightly higher than that of its control after 8 h of ethephon treatment. Different from AcSVP1， AcSVP2 gene was significantly down-regulated in stem tip， stem base and leaf tissues within 8 h of ethephon treatment， and the relative expression level of AcSVP2 in the stem tip， stem base and leaf tissues was respectively about 8%， 44% and 33% of the control after 8 h of ethylene treatment. SVP was the most important type of flowering suppressor gene. And the down-regulated of AcSVP in response to ethephon stimulation indicated that AcSVP maybe play a key role in the flowering processes of pineapple in responses to ethephon signal.

Keywords： Ananas comosus; SVP gene; gene cloning; ethephon

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.10.008

開花是有性生殖植物繁衍的一種重要方式。植物開花過程是營養(yǎng)生長向生殖生長的轉(zhuǎn)變，其以花芽分化為特征[1];菠蘿花芽分化的過程可以劃分為成花誘導(dǎo)期、成花啟動期和花器官發(fā)育期3個時期。成花誘導(dǎo)是高等植物由營養(yǎng)生長向生殖生長過渡的重要步驟[2]。近年來，人們通過對擬南芥、水稻等模式植物開花調(diào)控的研究，將高等植物成花調(diào)控歸納為光周期途徑、自主途徑、發(fā)育年齡控制途徑、赤霉素途徑、春化途徑和環(huán)境溫度途徑等六大途徑[3]。它們既可以單獨(dú)調(diào)節(jié)植株開花過程，也可以彼此影響共同組成一個復(fù)雜的開花調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

菠蘿（Ananas comosus L.）又稱鳳梨，是一種原生長于美洲的熱帶草本果樹，廣泛分布在全球各地。菠蘿是我國主要的經(jīng)濟(jì)作物之一，2018年我國菠蘿種植面積超過8萬hm2，總產(chǎn)量超過200萬t（FAOSTAT數(shù)據(jù)），主要分布在廣東、廣西、云南、福建、海南、臺灣等地[4]。成花率不高和開花時間不一致是菠蘿自然成花過程中經(jīng)常發(fā)生的問題，生產(chǎn)實(shí)踐中常常通過施用乙烯利或乙炔誘導(dǎo)菠蘿成花[5]。雖然乙炔或乙烯在實(shí)際生產(chǎn)中能夠促進(jìn)鳳梨科植物成花，但也存在溫度、濕度、陰雨天氣、菠蘿長勢等影響催花效果甚至導(dǎo)致催化失敗等問題。由于乙炔或乙烯利誘導(dǎo)菠蘿成花的機(jī)制目前并不清楚，生產(chǎn)上改善催花效果往往只能憑種植戶經(jīng)驗(yàn)而非理論的指導(dǎo)。因此，開展乙炔或乙烯利誘導(dǎo)菠蘿成花機(jī)制的研究具有重要的理論價值和實(shí)踐意義。

SVP（short vegetative phase）是一類開花抑制基因。SVP蛋白是通過與FT（FLOWERING LOCUS T）和SOC1（SUPPRESSOR OF OVEREX PRESSION OF CONSTANS 1）的啟動子結(jié)合阻礙其轉(zhuǎn)錄表達(dá)延遲植物成花[6]。借助菠蘿基因組數(shù)據(jù)庫信息，本研究以‘臺農(nóng)4號菠蘿為材料成功克隆到SVP的2個同源基因AcSVP1和AcSVP2，利用生物信息學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)對其進(jìn)行了研究，研究結(jié)果將為深入闡釋SVP基因在乙烯利誘導(dǎo)菠蘿成花中的功能定位提供數(shù)據(jù)支持。

1? 材料與方法

1.1? 材料

以種植于海南省美亭村菠蘿基地、生長時間300 d左右（約25片葉）的‘臺農(nóng)4號菠蘿為材料，40%乙烯利（1600 mg/L）300倍液灌心處理后[7]2 h、4 h、6 h、8 h、1 d、2 d，分別取莖尖、莖基（剝皮后的莖中部組織）、成熟功能葉，液氮速凍后于–80 ℃保存。以同等體積的清水處理作為對照并取樣。

1.2? AcSVP基因克隆

從Pineapple Genomics Database（http：// pineapple.angiosperms.org/pineapple/html/index. html）中下載菠蘿基因組所有蛋白序列，從NCBI下載不同物種SVP蛋白序列，通過本地Blast（e<0.01）搜索，將菠蘿基因組中疑似SVP蛋白進(jìn)行Blast p，所有序列均通過CD-search（https：// www.ncbi. nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi）檢索以確定其含有MADS-box和K-box結(jié)構(gòu)域，發(fā)現(xiàn)菠蘿基因組中存在3條SVP序列。

采用華越洋植物RNA提取試劑盒提取菠蘿葉片組織總RNA，使用TaKaRa生物公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒獲得cDNA。根據(jù)預(yù)測的3條SVP基因序列設(shè)計相應(yīng)引物（表1），擴(kuò)增菠蘿SVP基因的CDS區(qū)。PCR擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性3 min;后95 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，32個循環(huán);最后72 ℃再延伸5 min。對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠檢測并分析結(jié)果。由天一輝遠(yuǎn)生物試劑公司開展引物合成和測序工作。

1.3? AcSVP蛋白序列結(jié)構(gòu)分析

借助NCBI提供的BLAST（https：//blast.ncbi. nlm.nih.gov/Blast.cgi）在線工具對測序結(jié)果進(jìn)行搜索分析，ORF Finder（https：//www.ncbi.nlm.nih. gov/orffinder/）分析AcSVP基因編碼區(qū);利用ProtParam（http：//web.expasy. org/protparam/）對成功克隆到的2個AcSVP蛋白的基本理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測，用GOV IV（http：//npsa-prabi.ibcp.fr）分析蛋白二級結(jié)構(gòu)，Blast p在線檢索菠蘿2個SVP蛋白的其他物種來源的同源蛋白序列，借助DNAMAN 6.06和MEGA 6.0工具分別完成不同來源SVP蛋白的同源比對分析工作和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.4? 熒光定量PCR

以‘臺農(nóng)4號菠蘿莖尖、莖基或葉片組織總RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA作為PCR模板，引物見表1，EF1為內(nèi)參基因[8]，每個處理重復(fù)3次。采用10 μL反應(yīng)體系：1 μL cDNA，5 μL SYBR Green I Master，10 μmol/L的正反向引物各0.5 μL，3 μL ddH2O。用2-ΔΔCT法[9]對2個AcSVP基因進(jìn)行相對定量分析，利用Excel、SPSS相關(guān)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 菠蘿SVP基因家族基因的挖掘與結(jié)構(gòu)分析

利用生物信息學(xué)技術(shù)，通過對菠蘿基因組數(shù)據(jù)庫的分析，發(fā)現(xiàn)3條SVP序列，分別命名為AcSVP1、AcSVP2和AcSVP3。DNAMAN 6.06分析研究結(jié)果顯示，預(yù)測中的AcSVP1和AcSVP2開放閱讀框堿基相似度高達(dá)72.58%，大約有

190 bp核苷酸的差異，涉及82個氨基酸的差異;AcSVP1和AcSVP3相似度高達(dá)72.58%，有188 bp核苷酸差異，涉及83個氨基酸的差異;AcSVP2和AcSVP3相似度高達(dá)99.71%，有2 bp核苷酸的差異，涉及1個氨基酸的差異。GSDS（http：//gsds. gao-lab.org/index.php）分析表明（圖1），AcSVP1含有9個外顯子，8個內(nèi)含子;AcSVP2和AcSVP3均含有8個外顯子和8個內(nèi)含子。

2.2? 菠蘿AcSVP基因編碼區(qū)克隆與序列分析

根據(jù)公布的菠蘿基因組數(shù)據(jù)庫信息設(shè)計引物，以菠蘿葉片總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，從‘臺農(nóng)4號菠蘿基因組中成功克隆到AcSVP1和AcSVP2。序列分析結(jié)果表明，‘臺農(nóng)4號AcSVP1和AcSVP2與公布的菠蘿基因組相應(yīng)基因的cDNA ORF序列完全一致，分別為678 bp和693 bp，分別編碼225和230個氨基酸。

GOR IV預(yù)測發(fā)現(xiàn)，AcSVP1與AcSVP2均含有無規(guī)則卷曲、α-螺旋和延伸鏈等結(jié)構(gòu)（圖2）。三類結(jié)構(gòu)在AcSVP1蛋白中所占比例分別為27.56%、56.89%、15.56%;在AcSVP2蛋白中所占比例分別為29.13%、59.13%、11.74%。

豎線從長到短依次為α-螺旋、折疊延伸鏈和無規(guī)則卷曲。

The vertical line from length to short is alpha helix， folding

extension chain and irregular curl.

Protparam在線預(yù)測2個AcSVP蛋白的理化特性結(jié)果表明，AcSVP1蛋白理論等電點(diǎn)（pI）為6.33、蛋白的不穩(wěn)定參數(shù)為51.27，脂溶指數(shù)為88;AcSVP2蛋白理論pI為8.44，蛋白的不穩(wěn)定參數(shù)為47.67，脂溶指數(shù)為89.52，表明AcSVP1、AcSVP2蛋白可能都是親脂性蛋白。

2.3? 菠蘿AcSVP蛋白同源性分析

將AcSVP1和AcSVP2的蛋白序列與其他21個物種SVP類基因編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行序列比對（圖3），發(fā)現(xiàn)二者都屬于典型的Type Ⅱ型MADS-box蛋白。Blast p比對發(fā)現(xiàn)，菠蘿AcSVP1蛋白序列與油棕（Elaeis guineensis）SVP相似度較高，為73.68%;AcSVP2與油棕的STMADS11-1的相似度較高，為72.44%。菠蘿AcSVP1與AcSVP2相似度為72.58%，有82個氨基酸的差異。

借助MEGA 6.0構(gòu)建了2個AcSVP蛋白與其他21個物種的SVP同源蛋白系統(tǒng)發(fā)育樹。分析表明（圖4），AcSVP1與油棕的SVP遺傳距離較近;AcSVP2與油棕的STMADS11-1遺傳距離較近。

EgSVP： Elaeis guineensis， XP_010942683.1; CsSVP： Crocus sativus， QIH12017.1; DcSVP： Dendrobium catenatum， XP_020692709.1; ZmSVP： Zea mays， NP_001105154.2; EgSTMADS11-1： Elaeis guineensis， AAW66885.1; HbSVP： Hevea brasiliensis， XP_021662492.1; VvSVP： Vitis vinifera， XP_019073897.1; VrSVP： Vitis riparia， XP_034692566.1; MeSVP： Manihot esculenta， XP_021631111.1; CaSVP： Coffea arabica， XP_027075278.1; AtSVP： Arabidopsis thaliana， NM_001335800.1; BjSVP1： Brassica juncea， JQ906715.1; MaSVP： Morus alba var. alba， AYK27570.1; BjSVP2： Brassica juncea， AFM77906.1; BnSVP： Brassica napus， AFM77910.1; LdSVP： Lansium domesticum， AST22412.1; CtSVP： Citrus trifoliate， ACJ09170.1; SiSVP： Sesamum indicum， XP_020554864.1; GmSVP： Glycine max， XP_006574410.1; SlSVP： Solanum lycopersicum， XP_004237993.1; PsSVP： Paeonia suffruticosa， AHJ60267.1.

HbSVP： Hevea brasiliensis， XP_021662492.1; MeSVP： Manihot esculenta， XP_021631111.1; SiSVP： Sesamum indicum， XP_020554864.1; VvSVP： Vitis vinifera， XP_019073897.1; VrSVP： Vitis riparia， XP_034692566.1; CaSVP： Coffea arabica， XP_027075278.1; GmSVP： Glycine max， XP_006574410.1; LdSVP： Lansium domesticum， AST22412.1; CtSVP： Citrus trifoliate， ACJ09170.1; PsSVP： Paeonia suffruticosa， AHJ60267.1; BjSVP2： Brassica juncea， AFM77906.1; ; AtSVP： Arabidopsis thaliana， NM_001335800.1; BjSVP1： Brassica juncea， JQ906715.1; BnSVP： Brassica napus， AFM77910.1; EgSTMADS11-1： Elaeis guineensis， AAW66885.1; CsSVP： Crocus sativus， QIH12017.1; DcSVP： Dendrobium catenatum， XP_020692709.1; ZmSVP： Zea mays， NP_001105154.2; EgSVP： Elaeis guineensis， XP_010942683.1; SlSVP： Solanum lycopersicum， XP_004237993.1;.MaSVP： Morus alba var. alba， AYK27570.1.

2.4? 菠蘿AcSVP基因表達(dá)對乙烯利刺激的響應(yīng)

乙烯利處理后，AcSVP1和AcSVP2基因?qū)σ蚁┑捻憫?yīng)總體表現(xiàn)為下調(diào)，但不同組織、不同處理時間表達(dá)量略有差異;乙烯利處理后2 d，2個基因的表達(dá)都表現(xiàn)為下調(diào)，但下調(diào)幅度不同，其中AcSVP2基因在3種組織中下調(diào)的更為明顯（圖5A～圖5F）。乙烯利處理的8 h內(nèi)，AcSVP1在莖尖、葉組織中的表達(dá)下調(diào)明顯，但在莖基組織中呈現(xiàn)出先下調(diào)后上升的趨勢。乙烯利處理后4 h，AcSVP1在莖尖部位的表達(dá)量處于最小值，約為對照的37%。施用乙烯利后6 h，莖基組織中表達(dá)量達(dá)最小值，約為對照的7%;乙烯利處理后8 h，AcSVP1的相對表達(dá)量略高于對照。施用乙烯利8 h，葉中表達(dá)量達(dá)最小值，約為對照的8%（圖5A～圖5C）。AcSVP2的表現(xiàn)與AcSVP1略為不同。乙烯利處理的8 h內(nèi)，AcSVP2在莖尖、莖基、葉3種組織中均明顯表現(xiàn)為下調(diào)。乙烯利處理后8 h，AcSVP2在莖尖、莖基、葉組織中的相對表達(dá)量只有對照的8%、44%和33%（圖5D～圖5F）。

AcSVP1和AcSVP2基因在莖尖、莖基和葉組織中均有不同程度的表達(dá)，乙烯利處理后，AcSVP1、AcSVP2均在莖尖組織中相對表達(dá)量處于最小值;而未處理時，AcSVP1和AcSVP2在莖基組織中相對表達(dá)量處于最小值（圖5G～圖5H）。

3? 討論

MADS-box基因家族有11個亞族，SVP作為MADS-box基因家族第11個亞族——STMADS11亞族的成員，主要是作為成花負(fù)調(diào)節(jié)因子參與植物的花發(fā)育和開花進(jìn)程的調(diào)控[3， 10-12]。目前已經(jīng)克隆到多種植物的SVP同源基因，如甘薯[13]、番茄[14]、獼猴桃[15]等。根據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果，我們在公布的菠蘿基因組數(shù)據(jù)庫中找到了3條AcSVP，分別命名為AcSVP1、AcSVP2和AcSVP3。本研究成功克隆到‘臺農(nóng)4號菠蘿AcSVP1和AcSVP2基因，編碼蛋白都含有MADS-box結(jié)構(gòu)域和K-box結(jié)構(gòu)域，均屬于MADS-box基因家族的STMADS11亞族。生物信息學(xué)分析顯示，預(yù)測中的AcSVP2和AcSVP3雖然位于不同的染色體上，但cDNA序列長度一致，只有中間位置有2 bp的核苷酸差異，利用同一對引物同時克隆AcSVP2、AcSVP3，未能克隆到AcSVP3基因，可能是由于‘臺農(nóng)4號菠蘿基因組與公布的數(shù)據(jù)庫（來自F153菠蘿品種和MD2菠蘿品種）[16]存在差異有關(guān)，也有可能這2個預(yù)測的基因是同一個基因。

包含SVP基因的STMADS11亞族基因被認(rèn)為在植物營養(yǎng)生長以及營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)變過程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用[17]。擬南芥SVP突變體表現(xiàn)為嚴(yán)重的早期開花表型，AtSVP過量表達(dá)可以使擬南芥開花時間推遲[6， 18]。桂花花芽分化需要一定時間的低溫環(huán)境。低溫處理后3個桂花OfSVP基因的表達(dá)均顯著下調(diào)，同時位于下游的OfSOC1和OfFT的表達(dá)量卻明顯升高[19]。SVP1基因在成花誘導(dǎo)期可以響應(yīng)乙烯，并且相比對照明顯呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)，但與成花啟動期對照相比表達(dá)無明顯差異;而SVP2基因在成花誘導(dǎo)期和成花啟動期的表達(dá)相比對照均呈現(xiàn)明顯下調(diào)表達(dá)，鑒于成花誘導(dǎo)是開花的第一步，SVP1與SVP2 2個基因的表達(dá)在成花誘導(dǎo)期和成花啟動期的表達(dá)與對照相比差異逐漸減弱，因此并沒有對花器官發(fā)

SA：莖尖;SB：莖基;L：葉;不同小寫字母表示在0.05水平上差異顯著。

SA： Stem apex; SB： Stem base; L： Leaf; Different lowercase letters in the figure show significant difference at 0.05 level.

育期進(jìn)行表達(dá)分析，如有需要，在以后的實(shí)驗(yàn)中將會對這2個SVP基因在花器官發(fā)育時期的表達(dá)情況進(jìn)行分析。已有越來越多的證據(jù)證實(shí)，SVP抑制植物成花可能是通過抑制下游基因SOC1和FT的表達(dá)參與植物開花進(jìn)程調(diào)控。低溫和乙烯利處理都可以誘導(dǎo)菠蘿成花，即低溫和乙烯可以加速菠蘿營養(yǎng)生長向生殖生長的轉(zhuǎn)變。乙烯利明顯下調(diào)‘臺農(nóng)4號菠蘿AcSVP1和AcSVP2基因在莖尖和葉組織中的表達(dá)，表明AcSVP1和AcSVP2基因可能參與了乙烯利誘導(dǎo)菠蘿營養(yǎng)生長向生殖生長的轉(zhuǎn)變過程。

已有研究表明，乙烯通過加速DELLE蛋白的富集影響赤霉素途徑從而達(dá)到延緩成花的目的，AtSVP可以通過抑制赤霉素合成酶基因GA20ox2的表達(dá)降低赤霉素含量進(jìn)而延遲擬南芥成花[20-21]。乙烯處理能夠延遲擬南芥開花、刺激菠蘿成花，表明乙烯對不同植物開花的調(diào)節(jié)不同，乙烯促進(jìn)菠蘿成花是單獨(dú)作用還是與其他開花途徑共同作用值得關(guān)注[22-23]。

參考文獻(xiàn)

[1] 宋? 崢. 油菜花芽分化調(diào)節(jié)機(jī)理研究[D]. 武漢： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2009.

[2] 宋? 楊， 竇連登， 張紅軍. 高等植物成花誘導(dǎo)調(diào)控的分子和遺傳機(jī)制[J]. 植物生理學(xué)報， 2014， 50（10）： 1459-1468.

[3] 高耀輝， 馬? 斌， 魏光普， 等. 菊花SVP和AGL24基因的克隆及序列分析[J]. 分子植物育種， 2021， 19（13）： 4286-4292.

[4] 楊? 眉， 遲曉君. 我國菠蘿皮渣綜合利用的研究進(jìn)展[J]. 中國果菜， 2019， 39（8）： 48-51.

[5] Chandra Das S， Prakash J， Suresh C P， et al. Pineapple cultivation in hilly Tripura with year around production： improving livelihood opportunities in rural areas of Tripura[J]. Acta Horticulturae， 2011（902）： 291-298.

[6] Li D， Liu C， Shen L S， et al. A repressor complex governs the integration of flowering signals in Arabidopsis[J]. Developmental Cell， 2008， 15（1）： 110-120.

[7] 華? 敏， 王祥和， 何? 凡， 等. 臺農(nóng)16號菠蘿催花試驗(yàn)[J]. 中國南方果樹， 2009， 38（4）： 49-51.

[8] 李瑞雪， 余三淼， 李? 夏， 等. 紅苞鳳梨實(shí)時熒光定量PCR分析中內(nèi)參基因的篩選[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報， 2017， 25（3）： 250-256.

[9] Livak K J， Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2?ΔΔCT method[J]. Methods， 2001， 25（4）： 402-408.

[10] Brill E M， Watson J M. Ectopic expression of a Eucalyptus grandis SVP orthologue alters the flowering time of Arabidopsis thaliana[J]. 2004， 31（3）： 217.

[11] Lee J H， Park S H， Lee J S， et al. A conserved role of SHORT VEGETATIVE PHASE （SVP） in controlling flowering time of Brassica plants[J]. 2007， 1769（7/8）： 455-461.

[12] Jaudal M， Monash J， Zhang L， et al. Overexpression of Medicago SVP genes causes floral defects and delayed flowering in Arabidopsis but only affects floral development in Medicago[J]. Journal of Experimental Botany， 2014， 65（2）： 429-442.

[13] Kim S H， Mizuno K， Fujimura T. Isolation of MADS-box genes from sweet potato [Ipomoea batatas （L.）Lam.] expressed specifically in vegetative tissues[J]. Plant and Cell Physiology， 2002， 43（3）： 314-322.

[14] Mao L， Begum D， Chuang H W， et al. JOINTLESS is a MADS-box gene controlling tomato flower abscission zone development[J]. Nature， 2000， 406（6798）： 910-913.

[15] Wu R M， Walton E F， Richardson A C， et al. Conservation and divergence of four kiwifruit SVP-like MADS-box genes suggest distinct roles in kiwifruit bud dormancy and flowering[J]. Journal of Experimental Botany， 2012， 63（2）： 797-807.

[16] 徐慧敏. 甘蔗現(xiàn)代栽培雜種及其兩個祖先種全長轉(zhuǎn)錄組比較研究和菠蘿基因組數(shù)據(jù)庫[D]. 福州： 福建農(nóng)林大學(xué)， 2019.

[17] 李玉舒， 楊煒茹， 程堂仁， 等. 梅花2個SVP基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 西北植物學(xué)報， 2019， 39（7）： 1163-1171.

[18] Hartmann U， Hohmann S， Nettesheim K， et al. Molecular cloning of SVP： a negative regulator of the floral transition in Arabidopsis[J]. The Plant Journal， 2000， 21（4）： 351-360.

[19] 朱益民， 王千千， 董? 彬， 等. 桂花OfSVP響應(yīng)環(huán)境低溫對花芽分化的影響[J]. 園藝學(xué)報， 2019， 46（6）： 1134-1144.

[20] Achard P， Baghour M， Chapple A， et al. The plant stress hormone ethylene controls floral transition via DELLA- dependent regulation of floral meristem-identity genes[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2007， 104（15）： 6484-6489.

[21] 李朝闖， 馬關(guān)鵬， 楊修勤， 等. 芥菜開花抑制因子SVP表達(dá)分析及其與FLC互作的調(diào)節(jié)位點(diǎn)鑒定[J]. 園藝學(xué)報， 2016， 43（8）： 1513-1524.

[22] Seo E， Lee H， Jeon J， et al. Crosstalk between cold response and flowering in Arabidopsis is mediated through the flowering-time gene SOC1 and its upstream negative regulator FLC[J]. Plant Cell， 2009， 21（10）： 3185-3197.

[23] 張治禮， 范鴻雁， 華? 敏， 等. 菠蘿開花誘導(dǎo)及其生理與分子基礎(chǔ)[J]. 熱帶作物學(xué)報， 2012， 33（5）： 950-955.

責(zé)任編輯：黃東杰