郭振剛, 吳 瑛, 吳 萍, 彭 華,周大榮, 吳蕊汝, 宋德榮

(畢節(jié)市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，貴州 畢節(jié) 551700)

0 引言

【研究意義】羊的MOET(Multiple Ovulationand Embyo Transfer)技術(shù)即超數(shù)排卵和胚胎移植技術(shù)，是將超數(shù)排卵與胚胎移植相結(jié)合而發(fā)展起來的一項快繁技術(shù)，能顯著提高羊的繁殖效率，在國內(nèi)外羊的育種中得到廣泛應(yīng)用[1]。貴州半細(xì)毛羊是以歷代羊為母本，羅姆尼羊和美利奴羊等為父本，經(jīng)過 36年培育而成的肉毛兼用型綿羊新品種，該品種的培育為豐富貴州地區(qū)綿羊品種資源以及增加牧民的養(yǎng)殖收益、助力脫貧攻堅作出了積極貢獻[2]。但貴州半細(xì)毛羊繁殖率低，僅為117.58%，屬于秋季短日照發(fā)情綿羊品種，其生產(chǎn)節(jié)律為秋季配種，春季產(chǎn)羔，每年的2-7月為乏情期，空懷間隔時間長，嚴(yán)重影響和制約貴州半細(xì)毛羊的產(chǎn)業(yè)發(fā)展[3]。因此，引進繁殖率高的湖羊品種與貴州半細(xì)毛羊開展雜交，利用胚胎移植技術(shù)加快貴州半細(xì)毛羊多胎新品種培育具有積極意義。【前人研究進展】胚胎移植技術(shù)作為一項新的高效繁殖技術(shù)，為家畜迅速良種化提供了新的途徑，已廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)并發(fā)揮了巨大的商業(yè)價值[4-6]。目前，有關(guān)肉羊胚胎移植的季節(jié)因素、供受體選擇、同期發(fā)情處理方法和高繁品種利用等方面已有一定的研究報道。宮旭胤等[7]研究表明，供體羊和受體羊冬季的發(fā)情率均顯著高于春季，供體羊可利用卵子個數(shù)冬季高于春季，受體羊的受胎率冬季和春季差異不顯著，冬季受體羊的繁殖率顯著高于春季。何立雄等[8]采用PG+FSH方法對20只薩?？搜蜻M行超數(shù)排卵處理,超排有效率為100%；采用2次PG注射法對100只哈薩克綿羊進行同期發(fā)情處理,24 h發(fā)情率為95%;胚胎移植后妊娠率為76.47%。陶薩茹拉等[9]采用遞減法注射FSH進行超排處理，經(jīng)同期發(fā)情、超數(shù)排卵及人工授精等過程后,胚胎合格率達89.28%，受體羊發(fā)情率達95%，受胎率為67.03%,繁殖率為71.06%。魏立明等[10]以國外優(yōu)良肉羊品種杜泊和薩?？搜驗楣w、甘肅高山細(xì)毛羊為受體進行肉羊胚胎移植的妊娠率、產(chǎn)羔率、繁殖率和繁殖成活率分別為57.29%、99.52%、52.51%和52.26%，胚胎移植肉羊生長發(fā)育良好。【研究切入點】關(guān)于貴州半細(xì)毛羊的胚胎移植效果與研究目前未見報道，因此，研究其胚胎移植效果可為貴州半細(xì)毛羊的同期發(fā)情、胚胎移植等技術(shù)提供應(yīng)用參考?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以貴州半細(xì)毛羊作為試驗供體和受體，采用埋置孕酮栓結(jié)合注射PMSG、FSH的方法，對供體和受體羊分別進行同期發(fā)情處理，研究發(fā)情配種后貴州半細(xì)毛關(guān)的胚胎移植效果，以期為加快其多胎新品種培育進程及胚胎移植技術(shù)的推廣應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物 供試母羊為貴州半細(xì)毛羊，配種公羊為湖羊，均由貴州新烏蒙公司提供。 供體羊10只，遺傳能力穩(wěn)定，無遺傳疾病和傳染病，體質(zhì)健壯，發(fā)情周期正常，發(fā)情癥狀明顯，年齡2～4周歲；受體羊20只，體型較大，哺乳力強，母性好，健康無疾病，年齡2～4周歲。

1.1.2 試驗藥品和器械 試驗藥品包括孕馬血清促性腺激素(PMSG)、促卵泡素(FSH)、海綿陰道栓、PBS緩沖液、Holding液、生理鹽水、酒精、碘酒、青霉素及新吉爾滅等，器械設(shè)備包括顯微鏡、恒溫水浴鍋、恒溫箱、高壓滅菌鍋、手術(shù)創(chuàng)布、手術(shù)刀、手術(shù)剪、止血鉗、三棱針、持針鉗、手術(shù)架及鑷子等。

1.2 方法

1.2.1 羊只同期發(fā)情與超數(shù)排卵處理

1) 供體：2020年10月13日下午埋置陰道栓，放栓當(dāng)天記為0 d，第10天開始注射FSH，2次/d，間隔12 h注射1次,連續(xù)注射3 d。FSH注射總量為270 U/只，按劑量遞減方式，第1天60 U，第2天45 U，第3天30 U。在第5次注射FSH的同時注射PMSG 330 U，注射后撤除陰道栓。撤栓后12 h試情，羊發(fā)情后配種，做好記錄。配種后6.5 d手術(shù)采胚。

2) 受體：2020年10月13日下午埋置陰道栓，放栓當(dāng)天記為0 d。第12天上午撤栓，同時注射PMSG 330 U，12 h后試情，做好記錄。

1.2.2 供體羊發(fā)情配種與受體羊試情 配種采取人工輔助自然交配方式進行。首先采用試情法鑒定母羊發(fā)情，將腹部捆好布兜的試情公羊與試驗?zāi)秆虬凑?∶30的比例混群，觀察母羊的發(fā)情表現(xiàn)，如母羊接受試情公羊爬跨，即被認(rèn)為發(fā)情。試情時間每天早上8:00和晚上18:00各 30 min。然后對發(fā)情母羊用精神旺盛、體質(zhì)健壯、外生殖器官健康的湖羊公羊采取人工輔助自然交配方式配種，同時記錄羊只耳號及發(fā)情時間。受體羊試情鑒定方法同上，但不配種。

1.2.3 胚胎采集 供體羊在配種后6.5 d手術(shù)沖胚。方法：將供體母羊固定在手術(shù)架上，術(shù)部剃毛、消毒，打開術(shù)口，檢查黃體，沖胚(子宮角法)，術(shù)口縫合、消毒，下手術(shù)臺。術(shù)后觀察創(chuàng)口恢復(fù)情況，肌肉注青霉素1～3 d。

1.2.4 胚胎鑒定 把盛有沖胚回收液的表面皿放在立體顯微鏡下仔細(xì)觀察，收集胚胎轉(zhuǎn)移至裝有Holding液的培養(yǎng)皿中暫時保存，并對胚胎進行鑒定、劃分等級。

1.2.5 胚胎移植 采用手術(shù)法對受體羊進行胚胎移植。移植部位與供體母羊沖胚部位一致。觀察受體黃體發(fā)育情況，淘汰無黃體的受體羊。抽好胚胎以后，將受體羊黃體發(fā)育良好一側(cè)的子宮角取出將胚胎移植進去，移植好后將子宮輕輕塞進腹腔，將創(chuàng)口縫合、消毒。

2 結(jié)果與分析

2.1 供體羊超數(shù)排卵效果

由表1可見，10只供體羊全部發(fā)情配種，共收集胚胎106枚，平均沖胚10.60枚/只，可用胚胎73枚，平均可用胚胎7.3枚/只，胚胎合格率為68.87%。

表 1 貴州半細(xì)毛羊供體羊的胚胎采集數(shù)及合格率

2.2 供體和受體羊同期發(fā)情情況

同期發(fā)情共處理供體和受體羊30只，其中采用公羊試情法鑒定發(fā)情29只，同期發(fā)情率達96.67%。

2.3 胚胎移植效果

由表2可見，在可用胚胎中挑選36枚優(yōu)質(zhì)胚胎移植到19只受體羊，術(shù)后3個情期內(nèi)共計觀察到有8只受體羊返情，返情率為42.11%，以不返情為標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)為妊娠，妊娠率為57.89%，其中雙胚胎妊娠率為52.38%。

表 2 貴州半細(xì)毛羊胚胎移植數(shù)及妊娠率

3 討論

試驗采用的同期發(fā)情處理方案，是在貴州半細(xì)毛羊上2次優(yōu)化而成。研究結(jié)果表明，貴州半細(xì)毛羊同期發(fā)情率達96.67%，高于茹婷等[11]在巴美肉羊上采取相同方法獲得的94%，也高于方案優(yōu)化前郭振剛等[12]在秋季貴州半細(xì)毛羊上采用相同方法獲得的95%。10只貴州半細(xì)毛羊供體共計獲得胚胎106枚，平均沖胚10.60枚/只，平均可利用胚胎7.3枚/只，高于閆振富等[13]超排的可用胚胎6枚/只、陶薩茹拉等[9]超排的可用胚胎6.36枚/只和奧旭東等[14]超排的可用胚胎4.45枚/只，達國內(nèi)平均水平?？赡苁琴F州半細(xì)毛羊的發(fā)情期集中在10月和處理方案較優(yōu)所致。

試驗中，挑選優(yōu)質(zhì)胚胎36枚移植到19只受體羊，在術(shù)后3個情期內(nèi)共計觀察到有8只受體羊返情，返情率為42.11%，以不返情為標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)為妊娠，則妊娠率為57.89%，且雙胚胎妊娠率高達52.38%。該試驗結(jié)果低于陶薩茹拉等[15]研究的妊娠率61.83%；高于奧旭東等[14]研究的妊娠率53.67%，但是雙胚胎妊娠率低于其65.02%的結(jié)果。國內(nèi)綿羊鮮胚移植妊娠率在54.4%～60.0%，此次研究的妊娠率為57.89%，試驗結(jié)果高于國內(nèi)平均水平，超排效果明顯。

4 結(jié)論

采取埋置孕酮栓+PMSG法進行同期發(fā)情和遞減法注射FSH進行超數(shù)排卵、自然交配等處理后，同期發(fā)情率達96.67%，平均沖胚10.60枚/只，平均可用胚胎7.3枚/只，胚胎合格率為68.87%，在可用胚胎中挑選36枚優(yōu)質(zhì)胚胎移植到19只受體羊，術(shù)后3個情期內(nèi)返情率為42.11%，妊娠率為57.89%，雙胚胎妊娠率為52.38%。試驗對貴州半細(xì)毛羊開展胚胎移植技術(shù)推廣提供了參考依據(jù)。