賈 爍，鄧 潔，陳功文，鄭火青

（浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310058）

2020 年收錄于Web of Science 核心集的論文中，與蜜蜂病毒有關(guān)的研究成果共237 篇。研究論文大部分涉及2 種或更多種病毒，內(nèi)容主要集中在流行病學(xué)和蜜蜂病毒與其他致病因子的協(xié)同作用。研究最多的病毒是殘翅病毒（Deformed wing virus, DWV） 和囊狀幼蟲病毒（Sacbrood virus, SBV），與前2 年的研究熱點(diǎn)一致。

Web of Science 收錄的關(guān)于蜜蜂病毒的237篇論文中，主要作者來(lái)自37 個(gè)國(guó)家和地區(qū)，發(fā)表論文數(shù)量最多的國(guó)家為美國(guó)（59 篇），其次為中國(guó)（40 篇） 和德國(guó)（15 篇）。這些文章來(lái)源于114 種出版物，其中發(fā)表論文數(shù)大于5篇的分別是Viruses（21 篇）、Insects（14 篇）、Journal of Apicultural Research（9 篇）、Journal of Invertebrate Pathology（8 篇）、Scientific reports（8 篇）、PLoS One（7 篇） 和Frontiers in Microbiology（6 篇）。針對(duì)237 篇論文逐一分析排查，其中與蜜蜂病毒密切相關(guān)的研究性論文91 篇，綜述論文4 篇，另有8 項(xiàng)專利申請(qǐng)。

本文結(jié)合研究方向和研究?jī)?nèi)容，有針對(duì)性地選擇Web of Science 和中國(guó)知網(wǎng)中的部分文章進(jìn)行綜述，以期為國(guó)內(nèi)蜜蜂病毒學(xué)研究和蜜蜂病毒病防控提供一定的參考。

1 病毒流行病學(xué)

1.1 流行病學(xué)調(diào)查

流行病學(xué)調(diào)查有利于研究者掌握病毒和其他病原體的流行情況和趨勢(shì)，并及時(shí)采取措施降低病原體對(duì)蜂群的危害。通過(guò)對(duì)常見蜜蜂病原進(jìn)行檢測(cè)，Luis 等人首次報(bào)道了在古巴發(fā)現(xiàn)東方蜜蜂微孢子蟲（Nosema ceranae）、急性蜜蜂麻痹病毒(Acute bee paralysis virus, ABPV)、DWV 和SBV，且發(fā)現(xiàn)這些病原體在古巴已廣泛流行[1]。在土耳其蜜蜂群中，DWV 是最流行的蜜蜂病毒，瓦螨和微孢子蟲也能共同侵染蜂群，但所檢測(cè)的樣本中均未檢測(cè)到克什米爾蜜蜂病毒(Kashmir bee virus, KBV)和小蜂螨，此外，多種病毒共同感染的情況較為普遍[2]。而土耳其東部地區(qū)的26 個(gè)意蜂蜂場(chǎng)中，DWV 和黑蜂王臺(tái)病毒(Black queen cell virus, BQCV)的陽(yáng)性率分別為69.23% （18/26） 和88.46%（23/26），ABPV 和慢性蜜蜂麻痹病毒(Chronic bee paralysis virus, CBPV)均為陰性，狄斯瓦螨（Varroa destructor） 的感染率為89%[3]。

2016 年美國(guó)加利福尼亞州的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，DWV、BQCV、SBV 和西奈湖病毒（Lake Sinai virus, LSV） 是檢出率較高的幾種病毒，此外，蜂群健康與LSV2 豐度呈反比關(guān)系[4]。在斯洛文尼亞，意蜂LSV 的感染率（75.92%） 顯著高于熊蜂的感染率（17.07%），并且鑒定出3 個(gè)不同的LSV 毒株，分別為L(zhǎng)SV1、LSV2、LSV3[5]。

1.2 DWV 相關(guān)報(bào)道

DWV 是最常見的蜜蜂病毒，其與狄斯瓦螨的協(xié)同作用會(huì)降低蜂群的健康水平，縮短冬季蜜蜂的壽命[6,7]。之前有研究報(bào)道蜜蜂病毒能夠感染螞蟻，但是這些研究大多數(shù)都局限于一個(gè)本地螞蟻種群。最新的研究使用DWV 和2種廣泛入侵日本的螞蟻（Paratrechina longicornis和Anoplolepis gracilipes） 來(lái)評(píng)估了亞太地區(qū)螞蟻中蜜蜂病毒的流行病學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。在這2 種螞蟻中都檢測(cè)到了DWV，同種螞蟻擁有相似的病毒感染狀況，但不同種螞蟻之間的地理分布模式和來(lái)源水平不同。此外，入侵性螞蟻中檢測(cè)到的DWV 在遺傳學(xué)上與從亞洲的蜜蜂中分離到的DWV 相似，這表明入侵性螞蟻對(duì)本地DWV 的富集可能很普遍，但DWV 對(duì)螞蟻介導(dǎo)的本地節(jié)肢動(dòng)物的傳播效率可能因螞蟻的種類而不同[8]。

De Souza 等（2020） 調(diào)查了南非DWV-A、DWV-B 和DWV-C 3 種基因型病毒的感染率及其病毒載量，并將研究結(jié)果與巴西、英國(guó)和美國(guó)最近的數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)DWV- B是南非最普遍的基因型[9]；同時(shí)，DWV-B 也是比利時(shí)流行率最高的基因型，且瓦螨的寄生率與DWV-B 病毒載量之間存在顯著的相關(guān)性，但大多數(shù)蜂群中DWV-B 僅以低或中等病毒載量存在[10]。而在智利的蜂場(chǎng)中，DWV-A的流行率最高（71%），DWV-B 的流行率很低，且未檢測(cè)到DWV-C 基因型[11]；在阿根廷，DWV-A 的感染率超過(guò)90%，DWV-B 的感染率也達(dá)到了47%，并且在同一樣本中測(cè)到了2 種基因型，但這2 種基因型能否重組以及可能帶來(lái)哪些危害仍需進(jìn)一步研究[12]。

2 病毒傳播

病毒傳播途徑廣泛，研究發(fā)現(xiàn)DWV-A 可以通過(guò)蜂產(chǎn)品進(jìn)行傳播。Schittny 等人針對(duì)該結(jié)論提出，在貿(mào)易條例中應(yīng)考慮引入新病毒或毒株的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，蜂產(chǎn)品的衛(wèi)生證書中也應(yīng)包括對(duì)病毒的分析[13]。

蜂王可以通過(guò)垂直傳播途徑將病毒傳遞給工蜂，所以普遍認(rèn)為蜂王的健康狀況可以代表蜂群中工蜂的患病概況，有研究者調(diào)查了工蜂和蜂王之間DWV 的傳播關(guān)系，確認(rèn)蜂王能將病毒傳染給工蜂，但未發(fā)現(xiàn)從工蜂到蜂王的DWV 傳播證據(jù)[14]。

蜜蜂病毒不僅能在蜜蜂群內(nèi)廣泛傳播，同時(shí)也能侵染其他動(dòng)物和昆蟲。 例如，Gusachenko 等（2020） 證明了DWV 在熊蜂體內(nèi)的復(fù)制，并發(fā)現(xiàn)熊蜂對(duì)DWV 某些侵染途徑具有較強(qiáng)的抵抗力[15]。

Al Naggar 等（2020） 比較了BQCV 的水平傳播方式（飼喂和注射） 對(duì)成年蜜蜂的影響，發(fā)現(xiàn)與喂食蜜蜂BQCV 相比，將BQCV直接注射到血淋巴中會(huì)導(dǎo)致更高的死亡率、更高的病毒滴度和RNAi 途徑關(guān)鍵基因表達(dá)的顯著變化[16]。

反向遺傳系統(tǒng)可以用于研究病毒復(fù)制、傳播和定位，也能更好地了解病毒的傳播和致病機(jī)制。Gusachenko 等（2020） 證明了病毒在瓦螨體內(nèi)的復(fù)制，還利用熒光蛋白修飾過(guò)的DWV 基因組直接觀察病毒在注射的蛹或喂養(yǎng)的幼蟲體內(nèi)的分布，這些研究提供了對(duì)病毒復(fù)制動(dòng)力學(xué)、傳播和發(fā)病機(jī)制的了解，并提供了新的工具來(lái)研究DWV 介導(dǎo)的蜂群損失[15]。

3 病毒檢測(cè)方法

蜜蜂病毒隱性感染情況很常見，大多數(shù)情況下僅依靠發(fā)病癥狀不能夠獲得準(zhǔn)確的鑒定，因此基于免疫學(xué)方法以及病毒核酸檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行蜜蜂病毒檢測(cè)方法的開發(fā)始終是蜜蜂病毒學(xué)中的研究?jī)?nèi)容之一。Li 等以其實(shí)驗(yàn)室分離到的中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒（Chinese sacbrood virus，CSBV） CSBV 相關(guān)基因?yàn)榛A(chǔ)，首先分別以Linker 連接的VP1、VP2 基因和連續(xù)編碼VP2、VP4 和VP1 的整段基因?yàn)榘谢蜻M(jìn)行原核表達(dá)，并用純化的表達(dá)蛋白來(lái)免疫小鼠和雞。然后通過(guò)比較這2 個(gè)表達(dá)蛋白的抗原性，篩選出抗原性較好的蛋白代替CSBV 作為免疫原，制備單克隆抗體，并利用制備的單克隆抗體研制出了雙抗體夾心ELISA 檢測(cè)試劑盒。該試劑盒具有較高特異性、敏感性和準(zhǔn)確性，可以用于CSBV 的臨床檢測(cè)，也為CSBV 的快速診斷和早期預(yù)警提供了技術(shù)支撐[17]。

同一內(nèi)參基因在不同實(shí)驗(yàn)條件下的穩(wěn)定性不同，因此選擇最優(yōu)的內(nèi)參基因?qū)γ鄯浠虮磉_(dá)的量化研究至關(guān)重要。Deng 等評(píng)估了11 個(gè)內(nèi)參基因在3 種不同病毒感染和RNAi 條件下的表達(dá)情況。結(jié)果表明，在不同的病毒感染下， 應(yīng)該選擇不同的內(nèi)參基因。 ache2、rps18、β-actin、 tbp 和tif 可用做檢測(cè)蜜蜂感染以色列麻痹病毒（Israeli acute bee paralysis virus，IAPV） 時(shí)基因表達(dá)水平的內(nèi)參基因，而actin 和tif 可用做檢測(cè)蜜蜂感染CBPV 時(shí)基因表達(dá)水平的內(nèi)參基因，rpl14、tif、 rpsa、ubc 和ache2 可用做檢測(cè)中蜂幼蟲感染CSBV時(shí)基因表達(dá)水平的內(nèi)參基因， rpl14、 tif、rps18、ubc 和α-tubulin 可用做檢測(cè)RNAi 處理下意蜂基因表達(dá)水平的內(nèi)參基因[18]。

此外，關(guān)于蜜蜂病毒檢測(cè)方法的研究進(jìn)展還有很多。比如，Jin 等創(chuàng)建了一個(gè)具有感染性的CSBV 克隆，結(jié)合綠色熒光蛋白的表達(dá)，他們直觀地觀察到該克隆病毒可以感染中蜂和意蜂并在中蜂幼蟲體內(nèi)以口服接種的方式傳播[19]。Kim 等介紹了應(yīng)用qPCR 和DNA芯片技術(shù)來(lái)快速檢測(cè)蜜蜂DWV 病毒[20]。Dittes等指出獸醫(yī)診斷方法也可以在蜜蜂健康管理中發(fā)揮重要作用，討論了該方法在成年蜜蜂病害檢查中的應(yīng)用，并重點(diǎn)介紹了ABPV、KBV、IAPV、CBPV 和DWV 以及狄斯瓦螨等混合感染的診斷和鑒別方法[21]。Cagirgan 等建立了一種多重RT-PCR 檢測(cè)方法，能同時(shí)對(duì)7 種蜜蜂病毒（IAPV、SBV、DWV、ABPV、BQCV、KBV、CBPV） 進(jìn)行快速檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果靈敏可靠、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠[22]。

4 病毒與蜜蜂的互作機(jī)制

蜜蜂細(xì)胞系可以為研究蜜蜂病毒與其宿主之間相互作用的分子機(jī)制、抗病毒藥物的開發(fā)等提供有利工具。為此，Guo 等系統(tǒng)綜述了膜翅目昆蟲細(xì)胞系的原代培養(yǎng)、建立連續(xù)細(xì)胞系以及建立無(wú)病毒細(xì)胞系的方法，并指出蜜蜂細(xì)胞系在昆蟲病毒學(xué)中的潛在應(yīng)用[23]。在缺乏可用的蜜蜂細(xì)胞系的情況下，探索蜜蜂病毒在其它物種細(xì)胞系中復(fù)制的能力，可以為在細(xì)胞水平上研究和了解病毒感染以及抗病毒藥物的篩選等相關(guān)研究提供新的方法。為此，Erez 和Chejanovsky （2020） 使用鱗翅目血細(xì)胞細(xì)胞系(P1) 進(jìn) 行DWV 的 感 染 研 究[24]。 結(jié) 果 表 明，DWV 在細(xì)胞體內(nèi)復(fù)制，且基因組拷貝數(shù)在感染后增加。盡管從感染細(xì)胞中獲得的病毒產(chǎn)量很低，但該研究首次證明DWV 可以在異種細(xì)胞系中復(fù)制。

盡管缺乏合適蜜蜂細(xì)胞系，對(duì)蜜蜂病毒致病機(jī)理的研究仍取得了頗多進(jìn)展。Huang 等人通過(guò)酵母雙雜交和免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)DWV 的結(jié)構(gòu)蛋白VP2 與宿主的熱休克蛋白10 （Hsp10）存在互作關(guān)系，且當(dāng)過(guò)表達(dá)DWV 的VP2 蛋白時(shí)，Hsp10 的表達(dá)量降低[25]。而McMenamin 等人的研究也發(fā)現(xiàn)與在恒溫條件下的蜜蜂相比，熱應(yīng)激蜜蜂（即在42℃下生存4 h） 體內(nèi)的模型病毒（Sindbis-GFP） 水平降低，且病毒感染和/ 或熱休克導(dǎo)致了6 個(gè)熱休克蛋白編碼基因和3 個(gè)免疫基因發(fā)生差異表達(dá)[26]。上述結(jié)果表明包括熱休克反應(yīng)在內(nèi)的應(yīng)激反應(yīng)途徑可能在蜜蜂免疫和抗病毒作用中起著重要作用。

Deng 等采用mRNA 和SRNA 高通量測(cè)序方法，研究了中蜂幼蟲在自然條件下感染CSBV 后的microRNAs 和siRNAs 的表達(dá)變化。他們發(fā)現(xiàn)，參與免疫反應(yīng)的絲氨酸蛋白酶表達(dá)下調(diào)，而針對(duì)絲氨酸蛋白酶的siRNAs 表達(dá)上調(diào)。此外，CSBV 感染還影響了中蜂幼蟲角質(zhì)層蛋白A1A 和A3A 的表達(dá)，從而增加了中蜂幼蟲對(duì)CSBV 感染的易感性。這項(xiàng)研究結(jié)果表明sRNA 可能參與調(diào)節(jié)蜜蜂的免疫反應(yīng)[27]。

Li-Byarlay 等研究了在感染IAPV 后5 h、20 h 和48 h 時(shí)白眼蛹基因表達(dá)和DNA 甲基化的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明，白眼蛹在感染IAPV 后20 h 和48 h 時(shí)比在5 h 時(shí)有更多的差異表達(dá)基因，但在感染IAPV 后5 h 時(shí)比20 h和48 h 時(shí)DNA 甲基化區(qū)域變化更顯著[28]。

5 病毒與其他因子的協(xié)同作用

同時(shí)暴露于多種壓力因素被認(rèn)為是導(dǎo)致蜜蜂群體數(shù)量下降的主要原因，因此針對(duì)病毒與其他不利因素的協(xié)同作用對(duì)蜂群影響的研究一直是蜜蜂病毒學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。

5.1 蜜蜂病毒與蜂螨的協(xié)同作用

在巴布亞新幾內(nèi)亞（Papua New Guinea,PNG），雅氏瓦螨（Varroa jacobsoni） 已經(jīng)通過(guò)宿主轉(zhuǎn)移實(shí)現(xiàn)了在當(dāng)?shù)氐囊夥渲蟹敝?。在最初的蜂群損失后，養(yǎng)蜂人在沒(méi)有使用殺螨藥的情況下維持蜂群超過(guò)10 年，這表明這些蜜蜂種群有一種未知的螨蟲耐受機(jī)制。研究人員利用高通量測(cè)序等方法，發(fā)現(xiàn)這些地區(qū)的意蜂、東方蜜蜂以及蜂螨中都未發(fā)現(xiàn)DWV 的感染，因此推測(cè)在無(wú)DWV 感染的情況下，意蜂對(duì)雅氏瓦螨可能具有較強(qiáng)的耐受性[11]。相對(duì)于雅氏瓦螨，狄斯瓦螨因其與DWV 的協(xié)同作用對(duì)蜂群造成的毀滅性危害而受到了更多關(guān)注。在實(shí)驗(yàn)室條件下，Gisder 等利用熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization） 等方法在狄斯瓦螨細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了DWV 的信號(hào)，并且找到了DWV-B 感染腸上皮細(xì)胞和唾液腺的直接證據(jù)，但他們并未發(fā)現(xiàn)DWV-A 的感染[29]。而de Guzman 等對(duì)菲律賓巴拉望島上的意蜂蜂蛹及其寄生蟲小蜂螨（Tropilaelaps） 和狄斯瓦螨的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果也表明DWV-B 比DWV-A更流行，此外，無(wú)論是感染了哪種螨蟲的蜂蛹，它們的DWV 的感染率都比未被螨蟲感染的高[30]。這些結(jié)果表明了狄斯瓦螨不僅能夠促進(jìn)DWV 的傳播，還會(huì)對(duì)DWV 的不同毒株產(chǎn)生相應(yīng)的影響，從而可能導(dǎo)致致病性強(qiáng)的DWV-B 的流行。

狄斯瓦螨的廣泛分布及其在蜂群中對(duì)病毒傳播的促進(jìn)作用也引發(fā)了學(xué)者們對(duì)由蜂螨帶來(lái)的蜜蜂病毒流行對(duì)其他重要昆蟲造成危害的擔(dān)憂。由此，Brettell 等人通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序探究了在有瓦螨和無(wú)瓦螨存在時(shí)，意蜂、胡蜂、蒼蠅和螞蟻等的病毒譜的差異[31]。結(jié)果顯示，雖然瓦螨與蜜蜂中DWV 的豐度顯著增加有關(guān)，但在其他類群中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這種變化。這表明在蜂群中由瓦螨流行而導(dǎo)致的病毒載量的增加可能并不會(huì)導(dǎo)致同域分布的其他昆蟲體內(nèi)病毒載量的上升。

5.2 蜜蜂病毒與農(nóng)藥的協(xié)同作用

新煙堿類殺蟲劑是全球使用最廣泛的殺蟲劑，這些農(nóng)藥是通過(guò)影響昆蟲中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的煙酰胺乙酰膽堿受體發(fā)揮作用的一種神經(jīng)毒素。這類殺蟲劑在農(nóng)業(yè)上的廣泛使用，被認(rèn)為是造成授粉類昆蟲尤其是蜜蜂數(shù)量下降的一個(gè)關(guān)鍵因素。常見的新煙堿類殺蟲劑包括吡蟲啉、啶蟲脒、噻蟲嗪、噻蟲胺等，但這些殺蟲劑與蜜蜂病毒的協(xié)同作用對(duì)蜂群的可能影響仍未得到充分的闡述。2020 年發(fā)表的有關(guān)病毒與農(nóng)藥的協(xié)同作用的文章有4 篇，其中3 篇的研究對(duì)象為新煙堿類殺蟲劑（噻蟲嗪、噻蟲胺） 與DWV 等病毒的協(xié)同作用，剩余1 篇?jiǎng)t關(guān)注了2 種新型新煙堿類殺蟲劑氟吡呋喃酮(flupyradifurone, FPF) 和氟啶蟲胺腈(sulfoxaflor,SULF) 與DWV 的協(xié)同危害。上述研究表明噻蟲嗪雖然不能引起成年蜜蜂體內(nèi)DWV 載量的上升，但其與DWV 可能產(chǎn)生協(xié)同作用而誘導(dǎo)成年工蜂的早熟覓食，并且增加了工蜂第一次飛行后不返回蜂群的風(fēng)險(xiǎn)；噻蟲胺對(duì)意蜂幼蟲體內(nèi)DWV 的復(fù)制不會(huì)產(chǎn)生顯著的影響，但會(huì)促進(jìn)成年意蜂工蜂體內(nèi)DWV 滴度的上升。有關(guān)FPF 和SULF 的研究則發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)室條件下它們對(duì)蜜蜂體內(nèi)DWV 的復(fù)制不產(chǎn)生明顯的影響，這表明接觸這類新型殺蟲劑并不會(huì)顯著加劇病毒對(duì)宿主生存的影響[32-35]。

5.3 蜜蜂病毒與腸道菌群的相互作用

腸道菌群參與調(diào)控宿主的免疫反應(yīng)、維生素的合成和食物的消化等。蜜蜂腸道菌群的穩(wěn)態(tài)與其宿主的健康息息相關(guān)。Yongsawa 等給6日齡的中蜂幼蟲和意蜂幼蟲飼喂含有SBV 的蜂王漿24 h，檢測(cè)了SBV 對(duì)中蜂幼蟲和意蜂幼蟲腸道菌群的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中蜂幼蟲感染SBV 后，其腸道菌群的破壞程度比意蜂幼蟲更嚴(yán)重。 意蜂幼蟲的核心菌種Gilliamella、 Snodgrassella 和Fructobacillus 的相對(duì)豐度都沒(méi)有發(fā)生顯著變化，而中蜂幼蟲的核心菌種Gilliamella 的相對(duì)豐度從35.5%下降至2.96%，Snodgrassella 和Fructobacillus 反而顯著增多。這表明感染SBV 病毒可以擾亂蜜蜂腸道菌群，改變腸道菌群的多樣性，并進(jìn)而通過(guò)腸道菌群紊亂影響健康[36]。

6 抗病毒方法的開發(fā)

植物化學(xué)物質(zhì)是蜜蜂經(jīng)常接觸的一類物質(zhì)，其中許多已被證明可以改善蜜蜂的健康。Edward 等人測(cè)試了香芹酚、百里香酚、對(duì)香豆酸、槲皮素和咖啡因?qū)θ斯そ臃N了IAPV 的蜜蜂的影響，發(fā)現(xiàn)咖啡因是唯一能夠顯著提高蜜蜂存活率的物質(zhì)[37]。同時(shí)，另一團(tuán)隊(duì)的研究也表明咖啡因能促進(jìn)免疫相關(guān)基因的表達(dá)，降低蜜蜂體內(nèi)DWV 病毒拷貝數(shù)[38]。這些結(jié)果表明咖啡因有可能幫助蜜蜂對(duì)抗病毒感染。而關(guān)于另一種自然界中常見的化學(xué)物質(zhì)——苦杏仁苷的研究則表明飼喂該物質(zhì)能使蜂群水平上的BQCV、CBPV 和DWV 滴度下降，但會(huì)導(dǎo)致SBV 滴度上升[39]。除了一些常見的植物化學(xué)物質(zhì)，在蜜蜂飼料中添加某些能增強(qiáng)蜜蜂免疫力的膳食補(bǔ)充劑也可能是一個(gè)預(yù)防和治療蜜蜂病毒病的有效途徑。Antonio 等發(fā)現(xiàn)，1,3-1,6β-葡聚糖的攝入不僅能夠提高蜜蜂的存活率，還能降低蜜蜂體內(nèi)DWV 的滴度[40]。

Fei 等發(fā)現(xiàn)DWV 的表面衣殼蛋白可作為開發(fā)針對(duì)該病毒的治療性抗體。他們對(duì)DWV表面衣殼蛋白基因的VP1、VP2 和VP3 密碼子進(jìn)行了優(yōu)化，并將優(yōu)化后的基因在大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)和純化。然后，將免疫小鼠的抗roVP- 抗血清分別與DWV 共同孵育，并注射到健康白眼蛹內(nèi)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，接種96 h 后，與單純病毒組相比，重組蛋白（roVP1、roVP2和roVP3） 的特異性抗體可以顯著性降低白眼蛹中的DWV 病毒滴度[41]。

腸道菌群與其宿主的健康和免疫有著密切的聯(lián)系，是宿主正常發(fā)育和健康生活不可或缺的參與者。Leonard 等發(fā)現(xiàn)將含有目的基因的質(zhì)粒導(dǎo)入蜜蜂腸道內(nèi)β- 變形綱的一種核心菌種Snodgrassella alvi 內(nèi)，這種經(jīng)過(guò)基因編輯后的細(xì)菌重新定殖回蜜蜂腸道后能夠連續(xù)生產(chǎn)dsRNA 來(lái)誘導(dǎo)蜜蜂的RNAi 反應(yīng)，抑制蜜蜂體內(nèi)DWV 的復(fù)制。同時(shí)，當(dāng)?shù)宜雇唑纳鄯鋾r(shí)，它們以蜜蜂脂肪體為食，并攝取存在于該組織中的dsRNA，從而觸發(fā)自身的RNAi 反應(yīng)，進(jìn)而保護(hù)蜜蜂免受蜂螨的侵襲，減少蜜蜂體內(nèi)DWV 的復(fù)制，提高蜜蜂的存活率。該研究創(chuàng)新性地提出通過(guò)經(jīng)基因編輯后的蜜蜂腸道細(xì)菌可以抑制蜜蜂體內(nèi)DWV 復(fù)制和殺蜂螨，提供了一種高效的抵抗病毒和蜂螨的方法，也為后續(xù)有關(guān)腸道菌群與病毒感染相關(guān)的研究提供了一種新思路[42]。

7 蜜蜂病毒相關(guān)的專利

與蜜蜂病毒相關(guān)的專利共有8 項(xiàng)，其中針對(duì)CSBV 的專利有4 項(xiàng)， IAPV 的有2 項(xiàng)，BPV 的有1 項(xiàng)，另外1 項(xiàng)專利與蜜蜂多種病毒相關(guān)。侯春生等提出丹桂、八月桂和人參花的提取物可以有效預(yù)防蜜蜂感染蜜蜂麻痹病毒。孫麗萍等提出香豆素、腺苷、脯氨酸和含有板藍(lán)根、黃樟葉、蜂膠的中藥組合物可用于制備防治CSBV 感染的藥物或飼料，能夠顯著提高感染CSBV 的中蜂幼蟲的存活率，降低病毒的拷貝數(shù)，同時(shí)還能夠誘導(dǎo)內(nèi)源性抗菌肽的表達(dá)，提高蜜蜂的免疫力。張?bào)w銀等發(fā)明了一種蜜蜂IAPV 實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 檢測(cè)試劑盒及其使用方法。