鐘建輝，紀甜甜，楊文霞，李 瑤

(西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院，陜西 楊凌 712100)

0 引言

產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種重要的病原微生物，主要引起畜禽壞死性腸炎和人的氣性壞疽等病，致病力強，傳播速度快，嚴重危害動物及人類健康[1]。這些疾病的關鍵特征是其大多數(shù)是細胞外的強力蛋白毒素的產(chǎn)生介導的。這些毒素通常與特定的疾病綜合征有關。自1933年Wilsdon根據(jù)梭菌產(chǎn)生毒素的血清中和試驗將產(chǎn)氣莢膜梭菌分為A、B、C、D四型以來，Wilsdon的毒物分型方案已被修改了3次[2]。對涉及食物中毒的產(chǎn)氣莢膜梭菌菌株進行流行病學調查，開發(fā)了血清學分型方法，從而有了廣泛認可的A～E五型分法。但該方法需要超過91種抗血清，并且大多數(shù)菌株無法分型。且根據(jù)毒素基因和遺傳特征分型比血清分型更可取。因此需要更新當前的毒物分型方案以提高其流行病學意義和診斷價值。

1 擴大毒物分型方案的原則

梭菌分型系統(tǒng)的擴展一直是許多研究人員多年來討論的主題。在2017年8月在美國安阿伯舉行的第十屆梭菌的分子生物學和發(fā)病機制國際會議上提出擴展分型系統(tǒng)的共識并得到認可。已經(jīng)達成共識的主要原則是，所需要的是在現(xiàn)有毒素的分型系統(tǒng)的基礎上進行擴展，而不是采用全新的方案，而且擴展的方案將會更容易被診斷和研究重點實驗室接受并得到更廣泛的使用。

主要原則是：①新的毒素類型必須是唯一的。它必須包含一部分不屬于現(xiàn)有毒素分型方案的新型毒素。②毒素基因是在質粒上還是在染色體上均可。③建立的毒素型B至E具有優(yōu)先權。也就是說，屬于新毒素型的菌株不能產(chǎn)生β毒素，ε毒素或α毒素。④新的毒素型必須基于疾病，且必須滿足科赫法則，已被明確證明與人或動物中的特定疾病有關。

2 兩種新的毒素型

Robert Fagan[3]等人根據(jù)上述建立的指南提出了最新的產(chǎn)氣莢膜梭菌分型方案，增加了兩種新的分型，即分別為F型產(chǎn)氣莢膜梭菌和G型產(chǎn)氣莢膜梭菌。

2.1 F型產(chǎn)氣莢膜梭菌

F型產(chǎn)氣莢膜梭菌被定義為攜帶 α 毒素和CPE基因且在產(chǎn)生孢子形成CPE，但不攜帶β 毒素、ε 毒素和 ι 毒素結構基因的分離菌株。這些菌株已有證據(jù)顯示參與人食物中毒和非食源性產(chǎn)氣莢膜梭菌介導的腹瀉，包括一些與抗生素相關性的腹瀉病例。有充分的流行病學證據(jù)證明這些菌株與產(chǎn)氣莢膜梭菌介導的食物中毒和一些非食源性腹瀉相關。此外，CPE分子科赫法則也已被證實。有實驗表明，F(xiàn)型產(chǎn)氣莢膜梭菌的濃縮培養(yǎng)上清液可在兔腸壞死疾病模型中導致積液和黏膜損傷，這與通過等位基因交換分離出的cpe突變體不同。這些菌株原被稱為A型產(chǎn)氣莢膜梭菌的CPE陽性菌株，將它們命名為F型產(chǎn)氣莢膜梭菌將為不同菌株的臨床和流行病學分析提供可靠的基礎。這種命名法變化的結果是A型產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒將重命名為F型產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒。

2.2 G型產(chǎn)氣莢膜梭菌

G型產(chǎn)氣莢膜梭菌是指產(chǎn)α毒素和NetB毒素，但不產(chǎn)β毒素、ε毒素和ι毒素的分離株。已證實G型產(chǎn)氣莢膜梭菌是雞的壞死性腸炎的原因。NetB毒素在這種疾病中起重要作用的遺傳證據(jù)再次明確，并且得到了流行病學證據(jù)的支持。分子科赫法則同樣得到了驗證。產(chǎn)NetB毒素的產(chǎn)氣莢膜梭菌會引起亞臨床性壞死性腸炎病變。針對NetB基因的特異性突變消除了引起這些病變的能力，再通過與NetB基因反式互補的野生型得到恢復。目前，這些菌株被稱為禽壞死性腸炎A型產(chǎn)氣莢膜梭菌株，而將它們命名為G型產(chǎn)氣莢膜梭將為這些分離株的診斷和流行病學分析提供堅實的基礎。

3 結語與展望

產(chǎn)氣莢膜梭菌自發(fā)現(xiàn)與確定命名以來，經(jīng)歷了若干次毒素分型方案的修改。這里對一種更新的毒素分型方案進行介紹，該方案結合了2種新的毒素型，即F型產(chǎn)氣莢膜梭菌和G型產(chǎn)氣莢膜梭菌。當然，將未知的產(chǎn)氣莢膜梭菌分離株命名為A至G的毒素型，應基于對其DNA分析，即應該包括檢測編碼特定類型毒素的結構基因。近些年來，國內基于特定編碼的毒素結構基因檢測定型產(chǎn)氣莢膜梭菌的方法也得到更多的普及和認可[4]。同時，產(chǎn)氣莢膜梭菌會產(chǎn)生至少20種胞外毒素和水解酶，在上述新擴展毒素分型方案中僅提到了其中6種。所以，在將來顯然會有更多的毒素基因會被列入毒素分型方案中，比如近期被研究的NETF和BEC。隨著毒素分型方案的不斷更新，人們對產(chǎn)氣莢膜梭菌的致病機理以及診斷防治的認識也將會不斷地擴充。