謝彥峰

(廣東永順生物制藥股份有限公司，廣東 永順 511356)

0 引言

禽流感病毒防治工作中，可以通過滅活疫苗來實現(xiàn)自身免疫系統(tǒng)重塑。在滅活疫苗生產(chǎn)工藝方面，通過對關(guān)鍵問題的探究，可以完成工藝手段的優(yōu)化和改良。在禽類養(yǎng)殖過程中，可積極利用滅活疫苗來降低禽類患病率。

1 重組禽流感病毒以及滅活疫苗概述

禽流感是在禽類中廣泛傳播的一種疾病，禽流感不僅會威脅禽類養(yǎng)殖，同時也給人類健康帶來嚴重隱患。在禽流感病毒研究中發(fā)現(xiàn)，禽流感病毒不僅對禽類生物體會造成病毒浸潤，也會對人體組織造成破壞。在禽流感病毒傳播中，需要基于滅活疫苗來給禽類注入抗體，提高禽類免疫力，避免禽流感病毒大范圍傳播[1]。滅活疫苗是從感染致病病毒的禽類生物體中提取出病毒抗原體，并基于滅活工藝消除病毒株的活性，使病毒株不具備抗原性質(zhì)后再重新注入禽類生物體中。由于滅活疫苗仍然具有病毒特征，該特征會激發(fā)禽類自身抗體出現(xiàn)，從而起到抵抗禽流感病毒的作用。

2 分析重組禽流感病毒滅活疫苗生產(chǎn)關(guān)鍵問題

重組禽流感滅活疫苗生產(chǎn)中，關(guān)鍵環(huán)節(jié)是對病毒株滅活的徹底性。在疫苗生產(chǎn)過程中，主要使用甲醛作為滅活工藝手段。甲醛滅活工藝技術(shù)在現(xiàn)代疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域應(yīng)用較為廣泛，這主要是甲醛試劑容易獲得，成本較低而且滅活徹底性較好，不易出現(xiàn)病毒株存在活性被注入禽類生物體的情況。但是基于甲醛進行疫苗滅活時，其缺陷也較為明顯。甲醛試劑一般以濃度0.2%為最佳，但甲醛滅活試劑與病毒株結(jié)合時，容易造成病毒體中的蛋白質(zhì)凝結(jié)。病毒株蛋白中存在核酸物質(zhì)，該種物質(zhì)對甲醛試劑的反應(yīng)較為靈敏，最終造成很多游離甲醛的存在，由于禽流感病毒具有生物特性，其主要結(jié)構(gòu)物質(zhì)就是蛋白質(zhì)，一旦病毒株蛋白質(zhì)發(fā)生凝結(jié)，疫苗作用將大大降低[1]。病毒株蛋白凝結(jié)后，疫苗抗原特性就會發(fā)生改變，這種疫苗注入禽類生物體后，無法被禽類抗體組織所識別，進而無法產(chǎn)生有效的抗體，禽類也就不能獲得禽流感病毒免疫力。在禽流感疫苗生產(chǎn)中，要從工藝角度入手進行強化和改良，通過更加完善的滅活工藝來提高禽流感疫苗使用的安全性和可靠性。

3 重組禽流感病毒滅活疫苗生產(chǎn)工藝方法

3.1 滅活疫苗生產(chǎn)工藝準(zhǔn)備

禽流感病毒滅活工藝中，需要基于實驗來完成滅活疫苗制備。在實驗準(zhǔn)備中，需要做好禽流感病毒株的選擇，應(yīng)當(dāng)根據(jù)病毒傳播類型來完成實驗。病毒株的寄主應(yīng)當(dāng)是感染了對應(yīng)病毒類型的禽類，并且該禽類并未進行免疫注射。除了病毒株以外，還要準(zhǔn)備實驗器皿和實驗試劑等。為了對比不同滅活工藝的效果，可以按照不同試劑濃度分別準(zhǔn)備病毒培養(yǎng)皿。

3.2 滅活疫苗生產(chǎn)工藝過程

3.2.1 重組病毒抗原制備

在滅活工藝中需要做好抗原制備，也就是要從重組禽流感病毒株中分離能夠產(chǎn)生抗原的物質(zhì)。滅活疫苗抗原原液是在禽類胚胎中完成的，在健康禽類胚胎中將重組病毒株注入其中，然后進行冷卻。冷卻可以保持禽類胚胎不發(fā)生性質(zhì)變化，然后將帶有病毒株的胚胎液通過工藝手段提取出來，就形成了滅活疫苗生產(chǎn)原液。

3.2.2 重組病毒抗原滅活

在準(zhǔn)備好的重組禽流感病毒原液中，滴入甲醛試劑進行滅活。甲醛試劑濃度控制在0.2%，并完成對病毒抗原的滅活處理，基于病毒原液來保證病毒株類型與滅活疫苗制備要求相符合。

3.2.3 重組病毒工藝優(yōu)化

在使用傳統(tǒng)的甲醛試劑完成病毒原液處理后，病毒株已經(jīng)具備了滅活性。在滅活疫苗工藝優(yōu)化中，要解決甲醛對病毒株蛋白質(zhì)的破壞，可以增加離心工藝處理環(huán)節(jié)。離心工藝主要是通過離心儀器設(shè)備，將滅菌罐中的原液作為處理對象，對已經(jīng)完成基本滅活的禽流感病毒抗原原液進行離心，離心可以多次進行，但至少應(yīng)當(dāng)保證對同一原液離心2次，避免離心處理不徹底[3]。在離心操作后再實施過濾，可以消除原液中的其他物。過濾過程采用生物膜技術(shù)，生物膜具有非常微小的過濾性，能夠完成對微小顆粒的過濾。在禽流感病毒液提純完成后，可以再次使用甲醛試劑來進行二次滅活。二次滅活甲醛試劑的濃度要控制在0.2%保證滅活效果。

3.2.4 重組病毒疫苗檢測

禽流感病毒疫苗滅活工藝中，需要重視對疫苗進行檢測。疫苗檢測通過疫苗采樣方式取得檢測樣品，對于檢測樣品可以加入檢測試劑進行搖晃，使疫苗與檢測試劑充分混合。疫苗必須能夠均勻溶解于試劑，這樣可以確保在疫苗注射時，疫苗試劑能夠充分進入到禽類體液和組織中形成免疫保護[4]。疫苗檢測時主要對于吸收情況進行觀察和計算，滅活疫苗檢測試劑為乳酸、乙醇并配合一定比例的水，通過使用專業(yè)的檢測儀器來實時獲取檢測數(shù)據(jù)，檢測數(shù)據(jù)中包括了時間點以及對應(yīng)的疫苗吸收量等，可以基于計算公式來獲得最終的結(jié)果，從而可以判斷滅活疫苗質(zhì)量情況。

3.2.5 重組病毒疫苗實驗

禽流感病毒滅活疫苗需要進行活體實驗，活體實驗中選擇健康的禽類生物體，然后定期為其注射滅活疫苗，全面認真記錄禽類注射后的反應(yīng)。滅活疫苗一般需要注射2次以上才能夠更好地產(chǎn)生抗體。滅活疫苗實驗過程中，也要關(guān)注疫苗的穩(wěn)定性。滅活疫苗一般在12～18個月可以保持穩(wěn)定，因此需要在疫苗生產(chǎn)完成后的指定期限內(nèi)使用[5]?；铙w實驗對象數(shù)量可以選擇10只或以上禽類，這樣可以保證實驗樣本具有較好代表性。在滅活疫苗實驗時，可以將實驗對象分為實驗組和對比組，然后將兩組實驗禽類放入存在禽流感病毒的環(huán)境中進行觀察。最終已經(jīng)注射滅活疫苗的組都保持健康狀態(tài)，同時實驗發(fā)現(xiàn)該組的禽類身體中已經(jīng)產(chǎn)生禽流感抗體。

4 結(jié)語

重組禽流感病毒滅活疫苗生產(chǎn)，對于農(nóng)牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。在工藝的優(yōu)化方面，需要對傳統(tǒng)工藝進行全面準(zhǔn)確分析，總結(jié)出傳統(tǒng)工藝的不足和缺陷，針對滅活疫苗工藝加以改進，保證滅活疫苗具有最佳的免疫效果。