蘇賢德 謝一龍通訊作者 陸建勝 胡偉偉

正大天晴藥業(yè)集團南京順欣制藥有限公司 江蘇南京 210000

如表1所示，A單抗原液工藝驗證第一批樣品檢測時，發(fā)現(xiàn)DF1-Int樣品存放30h（DF0102）、40h（DF0103）后，離子交換色譜法檢測時與0h（DF0101）相比，酸區(qū)含量分別上升4.2%、6.9%，而該批親和層析五個循環(huán)中間產(chǎn)物間（AC0101~AC0105）電荷異質性差異不大，且與下罐質量（US3001）一致，表明在親和層析五個循環(huán)上樣過程中，收獲罐內(nèi)DF1-Int電荷異質性未產(chǎn)生明顯變化[1]。因此，推測DF0102、DF0103樣品電荷異質性檢測結果異常為離線存放或檢測過程中，樣品凍存、樣品與空氣接觸比表面積、光照等其他干擾因素影響導致。

表1 A單抗原液工藝驗證第一批電荷異質性檢測結果

1 試驗方案

1.1 凍存對DF1-Int電荷異質性的影響

A單抗原液工藝驗證第一批DF0102、DF0103樣品為凍存后檢測，為考察樣品凍存對檢測結果的影響，工藝驗證第三批DF0101、DF0102、DF0103樣品取樣后立即檢測[2]。

1.2 樣品與空氣接觸的比表面積對DF1-Int電荷異質性的影響

A單抗原液工藝驗證第一批DF0102、DF0103樣品為在玻璃瓶中存放至規(guī)定時間后檢測。由于取樣量小，與收獲罐中實際樣品相比，玻璃瓶中樣品在存放期間與空氣接觸的比表面積更大，可能導致樣品電荷異質性變化情況遠大于實際樣品。在工藝驗證第四批除檢測DF0101、DF0102、DF0103樣品外，另取60mlDF1-Int至玻璃容器中，玻璃瓶避光存放。在該批親和層析進行至第二、三、四、五循環(huán)上樣結束前，分別從收獲罐和玻璃瓶中取樣、捕獲、檢測電荷異質性。

1.3 光照對DF1-Int電荷異質性的影響

A單抗原液工藝驗證第一批DF0102、DF0103樣品在存放時未避光處理，而商業(yè)化規(guī)模實際生產(chǎn)過程中DF1-Int樣品避光存放，第一批DF-Int存放樣品電荷異質性檢測檢測結果異?？赡苡晒庹諏е?。

在工藝驗證第五批深層過濾結束后，取等量DF1-Int至兩個同樣的玻璃瓶中，分別于避光和光照下存放10h、超過30h、超過40h。到達取樣時間后，兩個試驗組樣品同步取樣、捕獲、檢測，并與0h樣品的電荷異質性進行對比。

2 結果與分析

2.1 凍存對DF1-Int電荷異質性的影響

檢測結果如表2所示。該批DF1-Int在玻璃瓶中存放超30h、40h后，酸區(qū)分別升高4.3%、7.2%，變化趨勢基本與第一批一致。結果表明，樣品凍存后檢測并非導致DF0102、DF0103樣品電荷異質性檢測結果異常的主要原因。

表2 A單抗原液工藝驗證第三批電荷異質性檢測結果

2.2 樣品與空氣接觸的比表面積對DF1-Int電荷異質性的影響

如表3所示，通過對比兩種存放容器樣品電荷異質性可知，在同一取樣時間，玻璃瓶中樣品酸區(qū)較收獲罐中樣品酸區(qū)差值均＜2%，收獲罐與玻璃瓶樣品電荷異質性無明顯差異。

表3 A單抗原液工藝驗證第四批電荷異質性檢測結果

如表4所示，本批DF0101、DF0102、DF0103樣品電荷異質性無明顯差異，DF1-Int在玻璃瓶中存放超30h、40h后，酸區(qū)僅升高1.9%、2.9%，遠低于第一批的4.2%、6.9%。

表4 A單抗原液工藝驗證第四批DF0101~DF0103電荷異質性變化情況

本部分研究結果表明，相同的存放溫度和存放時間下，收獲罐和玻璃瓶中DF1-Int電荷異質性無明顯差異，玻璃瓶中樣品在18～25℃、避光存放時可較好地模擬收獲罐中樣品的電荷異質性變化趨勢。

2.3 光照對DF1-Int電荷異質性的影響

工藝驗證第5批DF-Int電荷異質性檢測結果見表五。

表5 A單抗原液工藝驗證第五批DF-Int存放0~40h電荷異質性變化情況

如圖1所示，DF1-Int在玻璃瓶中18～25℃、避光存放時電荷異質性穩(wěn)定性良好。與DF0101相比，存放40h后主峰僅降低0.9%、酸區(qū)升高0.8%、堿區(qū)升高0.1%。

圖1 A單抗原液工藝驗證第五批DF1-Int（避光存放）電荷異質性穩(wěn)定性結果

如圖2所示，DF1-Int在玻璃瓶中18～25℃、光照下存放時，樣品電荷異質性顯著變化。存放40h后主峰降低11.6%、酸區(qū)升高16.7%、堿區(qū)降低5.1%。

圖2 A單抗原液工藝驗證第五批DF1-Int（不避光存放）電荷異質性穩(wěn)定性結果

由于A單抗工藝驗證第一批存放于玻璃瓶中的DF0102、DF0103樣品在實際存放于層析納濾間緩沖液存儲罐平臺處的周轉框中，樣品光照強度弱于第五批光照處理組，且第二步深層過濾結束后層析納濾間光源關閉，樣品實際光照時間短于試驗組，因此工藝驗證第一批DF1-Int電荷異質性變化趨勢弱于本研究中的光照實驗組[3]。

3 結語

（1）本試驗結果表明，樣品凍存并非導致DF0102、DF0103樣品電荷異質性檢測結果異常的主要原因。A單抗原液DF1-Int樣品在玻璃瓶18～25℃避光存放，基本能夠模擬樣品在收獲罐中產(chǎn)品質量變化情況。

（2）通過本研究，可初步判斷A單抗工藝驗證第一批批次DF0102、DF0103樣品電荷異質性檢測結果異常，主要由樣品離線存放過程中受光照影響導致。

（3）本次試驗結果表明，DF1-Int在光照下存放后，樣品酸區(qū)含量上升，主峰和堿區(qū)下降，建議A單抗原液后續(xù)批次生產(chǎn)過程中，DF1-Int在存放、上樣和檢測過程中盡量避光。