張言召

鹽城生物工程高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校，江蘇鹽城224000

仔豬腹瀉是日常養(yǎng)殖中發(fā)生率較高的一種疾病，會(huì)降低仔豬的生長(zhǎng)速度，甚至誘發(fā)仔豬死亡，仔豬的成活率大大降低。容易導(dǎo)致仔豬腹瀉的微生物有很多種，而且臨床的癥狀也比較復(fù)雜，其中，豬瘟和豬藍(lán)耳病的混合感染發(fā)生頻率最高。近幾年，豬群中豬的疾病經(jīng)常出現(xiàn)由于2 種或2 種以上微生物致病的情況，容易誘發(fā)更嚴(yán)重的混合型感染，豬疾病的復(fù)雜性為養(yǎng)豬場(chǎng)的疾病診斷和防治帶來(lái)了不小的挑戰(zhàn)。

1 發(fā)病情況

養(yǎng)殖戶自述，自己的養(yǎng)豬場(chǎng)原來(lái)是一處廢棄將近7年的舊豬場(chǎng)，后來(lái)經(jīng)過(guò)翻新修建成新的養(yǎng)豬場(chǎng)。2019年5月，從外地的豬場(chǎng)引進(jìn)1 批23～30日齡的仔豬，這些仔豬剛剛斷奶。5 d 后，有個(gè)別仔豬發(fā)生咳嗽和腹瀉，還有的仔豬伴有神經(jīng)癥狀，豬場(chǎng)的技術(shù)人員診斷是鏈球菌病與腸炎混感，囑咐養(yǎng)殖戶在仔豬的飼料中加入多西環(huán)素以及氟苯尼考，持續(xù)用藥5 d 后仔豬的病情未見(jiàn)好轉(zhuǎn)，病情持續(xù)加重，有仔豬死亡。之后又在飼料中加入硫酸新霉素以及硫酸黏菌素，用藥4 d 后效果仍然不明顯。有更多的仔豬發(fā)病而且死亡率攀升，養(yǎng)殖戶見(jiàn)形勢(shì)不妙，所以請(qǐng)當(dāng)?shù)孬F醫(yī)醫(yī)院的人員檢查，此時(shí)，仔豬已經(jīng)購(gòu)進(jìn)14 d，發(fā)病仔豬的數(shù)量將近1/3，死亡的仔豬有60 多頭。

2 臨床癥狀

患病的仔豬神情呆滯，精神狀況較差，喜歡臥扎成堆，食欲減退，體溫40.8～41.6 ℃，眼瞼部位水腫，結(jié)膜泛紅，氣喘并伴有輕微的咳嗽，糞便大部分比較稀軟，還有的病豬排泄的是干便，但是表面附著黏液。體表能夠發(fā)現(xiàn)點(diǎn)狀出血，有些病豬局部的皮膚為暗紅色，尤其是頸部、后驅(qū)以及耳廓等其他部位。病豬無(wú)法正常站立，行走時(shí)搖搖晃晃，瀕死的病豬肌肉發(fā)生震顫，還有可能出現(xiàn)角弓反張的情況，患病的仔豬會(huì)在短時(shí)間內(nèi)貧血、脫水、身體日漸消瘦，直至死亡。

3 病理剖檢

病死仔豬貧血，身體消瘦，嚴(yán)重脫水，通體淋巴結(jié)腫大；心包中積聚著少許淡黃色的液體；心內(nèi)膜和心外膜全部出血，左心耳的出血較為嚴(yán)重；肝臟略有腫大，伴有淤血和出血；脾臟腫大，邊緣存在出血性的梗死病灶；肺臟出血和淤血；心尖、副葉和膈葉的前下方存在肉樣的實(shí)變；腎臟有略微腫大，存在許多肉眼可見(jiàn)的針尖樣的出血點(diǎn)；可以檢測(cè)出輸尿管擴(kuò)張；胃底黏膜出血泛紅，可以觀察到比較少的潰瘍；小腸壁比健康的豬要薄，里面積聚著黃色的比較稀薄的液體；圓錐腸和結(jié)腸系膜發(fā)生輕度水腫，透過(guò)漿膜能夠觀察到大量的白色壞死病灶，黏膜存在彌漫性出血[1]。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 材 料

送檢的病死仔豬，在剖檢之后采取血液標(biāo)本，同時(shí)常規(guī)取淋巴結(jié)、腎臟、脾臟和肺臟的標(biāo)本，進(jìn)行分類與編號(hào)，保存在-20 ℃的環(huán)境下。

4.2 方 法

抽提RNA，剪取適量保存在無(wú)菌環(huán)境下的脾臟、淋巴結(jié)及肺臟等病料，然后放到容量為2 mL 的EP 管內(nèi)，加入生理鹽水，使用研磨儀將其研磨為懸液，在-20 ℃的環(huán)境下重復(fù)凍融2～3 次，1 200 r/min離心120 s，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作流程展開(kāi)抽提工作。共吸取200 μL 的病料上清液，然后加入裂解液RL 300 μL 以及蛋白酶K 10 μL，震蕩搖勻，將其放置于56 ℃的水浴鍋15 min，之后加入無(wú)水乙醇250 μL，混合勻之后轉(zhuǎn)移到含有CR3 收集管的吸附柱里面，取蛋白液350 μL 加入到吸附柱中，1 200 r/min 離心60 s，將收集管內(nèi)的殘存廢液清理干凈，加入80 μL DNaseI 于吸附柱內(nèi)，靜置15 min后倒入去蛋白液350 μL，1 200 r/min 離心60 s，將廢液去除后倒入漂洗液500 μL，1 200 r/min 離心60 s，將收集管內(nèi)的廢液清理干凈，1 200 r/min 離心120 s。然后把吸附柱取出來(lái)放置到離心管內(nèi)，將蓋子打開(kāi)，把漂洗液曬干，之后取ddH2O 35 μL 滴注到吸附柱里面，靜置2 min，1 200 r/min 離心120 s，離心管里面的液體即是RNA 溶液。最后展開(kāi)病RNA 的RT-PCR 反應(yīng)，反應(yīng)的條件為45 ℃30 min→94 ℃5 min→94 ℃30 s→56 ℃30 s→72 ℃1 min，共重復(fù)35 個(gè)循環(huán)[2]。

通過(guò)分析臨床癥狀、病理變化和實(shí)驗(yàn)室檢查，能夠確定仔豬腹瀉是由豬瘟、豬藍(lán)耳病共同引起。此外，大腸桿菌也有可能導(dǎo)致仔豬腹瀉，由大腸桿菌引發(fā)的腹瀉仔豬會(huì)排泄黃痢或白痢，仔豬黃痢容易引起仔豬排泄黃白色的水樣糞便，體重會(huì)越來(lái)越輕，直至死亡。仔豬白痢排泄的糞便大多呈灰白色，糞便為黏糊樣，伴有腥臭氣味。

5 發(fā)病原因

曹健民等[3]的研究證實(shí)，豬瘟的母源抗體以及母豬的豬瘟抗體水平存在著正相關(guān)關(guān)系，而且流行病學(xué)的調(diào)查結(jié)果也顯示，養(yǎng)豬場(chǎng)的管理混亂、免疫工作的落實(shí)延后都是影響免疫效果的因素，再加上缺少免疫監(jiān)測(cè)，因此母體中的CSF 抗體水平偏低，加之仔豬從母體中獲取的母源抗體的時(shí)間較短，因此，那些斷奶比較早的仔豬更容易發(fā)生混合感染。杜善忠等[4]的研究證實(shí)，豬瘟的母源抗體從28 d 后會(huì)逐漸減小，半衰期將近17 d，豬藍(lán)耳病的母源抗體在21日齡之后大幅度下降，半衰期大概是9 d。

PPRSV 是一種免疫抑制類的疾病，在感染發(fā)生后會(huì)大幅降低機(jī)體的抵抗力和免疫力，導(dǎo)致疫苗免疫的效果不理想，容易引起CSFV 或者是其他病原微生物的感染。受早期斷奶、環(huán)境突變以及運(yùn)輸因素等刺激，致使斷奶的仔豬母源抗體減少，免疫能力下降，容易出現(xiàn)很多種疫病。在豬瘟和豬藍(lán)耳病的混合感染作用下，極易導(dǎo)致斷奶仔豬的死亡，如果耽誤疫情的治療，會(huì)導(dǎo)致疫情大范圍擴(kuò)散，給養(yǎng)豬場(chǎng)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，為此需要進(jìn)一步加強(qiáng)疫病的防治工作。

6 防治方法

1）立刻隔離發(fā)病豬，針對(duì)病情嚴(yán)重的仔豬應(yīng)果斷選擇淘汰，針對(duì)病死豬可以采取深埋或焚燒處理，由于糞便是疾病傳播的主要路徑，所以需要深埋或者發(fā)酵，及時(shí)對(duì)豬舍進(jìn)行消毒殺菌處理，保持豬舍的干燥和通風(fēng)[5]。

2）緊急為豬群注射豬瘟和豬藍(lán)耳病疫苗，以免發(fā)生交叉感染的問(wèn)題，1 頭豬應(yīng)用1 個(gè)針頭。

3）仔豬腹瀉導(dǎo)致的集體缺水和電解質(zhì)流失與酸堿失衡，在對(duì)癥治療期間主要是為患豬補(bǔ)液，具體的方法是讓患豬口服補(bǔ)鹽液，如0.9%的碳酸氫鈉溶液、氯化鉀溶液、氯化鈉溶液或者5%的葡萄糖溶液。對(duì)癥治療可以為患豬提供抗病毒類的藥物，如免疫球蛋白、黃芪多糖、干擾素以及排異肽等。因?yàn)椴∝i抵抗力下降，所以疾病的出現(xiàn)會(huì)與細(xì)菌的激發(fā)感染同時(shí)發(fā)生，因而還應(yīng)科學(xué)地使用抗菌類的藥物，如頭孢氨芐、氨芐青霉素或阿米卡星等，同時(shí)配合吸附劑與收斂劑一同使用，如藥用炭或鞣酸蛋白，前者能夠吸附胃腸道里面的氣體及有害物質(zhì)，后者可以用來(lái)止瀉。針對(duì)腹瀉情況嚴(yán)重的仔豬，可以為其提供神經(jīng)類止瀉藥物，如阿托品[6]。

4）積極地預(yù)防并控制其他類的疫病，如豬氣喘和偽狂犬等疾病，科學(xué)注射疫苗，監(jiān)測(cè)豬瘟和豬藍(lán)耳病的情況。

5）合理應(yīng)用抗菌藥物，避免病情的繼發(fā)感染，可以使用多西環(huán)素，每噸飼料使用150～250 g 多西環(huán)素。還可以使用氟苯尼考，每噸飼料使用60～100 g氟苯尼考。此外，還可以適當(dāng)補(bǔ)充維生素C，每噸飼料使用400～600 g 維生素C，持續(xù)補(bǔ)充4～6 d，達(dá)到增強(qiáng)豬群免疫力的效果。

7 體 會(huì)

1）CFS 的診斷重點(diǎn)。病豬的皮膚觀察到出血點(diǎn)和紫斑，拉干糞或稀便，在干糞的表面附著黏液。淋巴結(jié)出血、腫大，橫斷面存在著大理石樣的花紋，腎臟貧血而且存在針尖狀的出血點(diǎn)，脾臟部位存在出血性梗死灶。慢性和亞急性的CFS 在大腸黏膜和回盲口部位存在扣狀的潰瘍?cè)?。需采取?shí)驗(yàn)室診斷做出進(jìn)一步的確診，如RT-PCR 試驗(yàn)等[7]。

2）PRRS 的診斷要點(diǎn)?；钾i氣喘、咳嗽，排泄稀便，極少數(shù)病豬會(huì)出現(xiàn)嘔吐的情況。耳廓通常會(huì)呈藍(lán)紫色，淋巴結(jié)發(fā)生髓樣的腫大，氣管中可以觀察到泡沫樣的液體，肺臟存在水腫、出血和淤血的現(xiàn)象，需經(jīng)由實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)一步確診。

3）CFS 與PRRS 混合感染的防控標(biāo)準(zhǔn)。加強(qiáng)對(duì)生物安全管理的重視，及時(shí)為豬群注射CFS 疫苗和PRRS 疫苗，并定期監(jiān)測(cè)免疫的效果。落實(shí)好平時(shí)的飼養(yǎng)管理，提高仔豬的抗病能力，確保豬群的健康。如果檢測(cè)出豬群中有異常情況，需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，確診病因，盡最大努力減少養(yǎng)殖損失，第一時(shí)間采取妥善的處理方法[8]。