劉依山，呂 蘭，郭藝偉，包永占★，王玉田，潘興亮，鄭瑞峰，田 莉

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 071000；2. 北京市畜牧總站 100107；3. 懷柔區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 101400）

蚯蚓產(chǎn)量大，易獲取，藥理作用多，應(yīng)用前景廣，所含氨基酸有十八種之多，含70%左右，其中谷氨酸的含量最高，可達(dá)10%左右[1]，除蛋白質(zhì)含量高外，蚯蚓含有具有抗病和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)多肽和可溶性的小分子蛋白，多種礦物質(zhì)元素和維生素[2]，現(xiàn)減少或替代豆類等投資高的蛋白飼料的研究越來(lái)越多并取得了不錯(cuò)的效果[3]，乳酸菌發(fā)酵，更可以使飼料色澤、香味得到改善；不易吸收的大分子蛋白可變成小分子多肽和氨基酸，使氨基酸含量升高，粗蛋白和粗脂肪含量升高，短鏈脂肪酸含量升高，提高飼料的利用率[4]。

發(fā)酵飼料產(chǎn)品中的代謝產(chǎn)物等非活菌成分，不易受到抗生素、消毒劑、酸化劑等具有殺菌活性物質(zhì)的影響。蚯蚓中的有效物質(zhì)能增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫功能和抗氧化功能等，乳酸菌能夠有效地分解蚯蚓中大分子物質(zhì)，使抗?fàn)I養(yǎng)因子含量減少，聯(lián)合乳酸菌抗菌性、增強(qiáng)免疫力和提高抗氧化的作用[5]，可以同時(shí)發(fā)揮乳酸菌和蚯蚓的應(yīng)用價(jià)值。本試驗(yàn)探索植物乳桿菌、乳酸片球菌、腸膜明串珠菌3株乳酸菌復(fù)合發(fā)酵蚯蚓物添加到豬基礎(chǔ)飼料中對(duì)豬生長(zhǎng)性能、抗氧化功能的效果影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

日本大平二號(hào)蚯蚓，北京艾克賽德生物工程有限公司；組織勻漿機(jī)，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司；發(fā)酵罐，東莞市臻釀貿(mào)易有限公司；全自動(dòng)血液分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療股份有限公司；無(wú)水葡萄糖，上海麥克林生化科技有限公司；丙二醛 （MDA）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、總抗氧化力（T-AOC）檢測(cè)試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.2 復(fù)合發(fā)酵蚯蚓液制備

將在北京市畜牧總站分離保存在-80℃的植物乳桿菌、乳酸片球菌、腸膜明串珠菌菌種進(jìn)行復(fù)蘇，將植物乳桿菌、乳酸片球菌、腸膜明串珠菌菌液按5%∶3%∶2%比例加入含有3g無(wú)水葡萄糖100mL蒸餾水中，將洗腸后的日本大平二號(hào)蚯蚓肉體勻漿，進(jìn)行60℃10min巴氏消毒，加入5g到發(fā)酵培養(yǎng)基?；靹蛑?，28℃密閉發(fā)酵48h，等比放大加入豬飼料中。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)于2021年8月9日～9月16日期間在北京市延慶區(qū)經(jīng)濟(jì)示范園進(jìn)行，將日齡、體重相近（約為40kg）的 20頭大長(zhǎng)白育肥豬隨機(jī)分成4組，分別進(jìn)行編號(hào)，每組1個(gè)處理，共4個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)5個(gè)重復(fù)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，3個(gè)試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中加入1%、3%、5%的復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓液。試驗(yàn)期內(nèi)每天于 17: 00進(jìn)行飼喂，預(yù)試期7d，正試期32d。

1.4 飼養(yǎng)管理

按組別進(jìn)行分欄，按照豬場(chǎng)正常的飼養(yǎng)程序進(jìn)行飼養(yǎng)。試驗(yàn)前豬舍進(jìn)行全面消毒，試驗(yàn)豬進(jìn)行常規(guī)免疫。根據(jù)日齡逐漸增加，飼料也逐漸增加。試驗(yàn)豬自由飲水，每周清洗欄舍3次，保持欄舍和飼槽清潔，每日觀察記錄試驗(yàn)豬的健康狀況。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 生長(zhǎng)指標(biāo)

分別于試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束日早晨 7: 00 開(kāi)始空腹稱重，逐頭計(jì)算平均日增重，試驗(yàn)期以欄為單位記錄每天的投料量和剩料量，以組為單位統(tǒng)計(jì)飼料消耗量及平均料肉比。

1.5.2 血常規(guī)指標(biāo)

在試驗(yàn)結(jié)束第33d時(shí)對(duì)豬進(jìn)行前腔靜脈采血，利用全自動(dòng)血液分析儀對(duì)豬全血進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)，并記錄數(shù)據(jù)。

1.5.3 抗氧化指標(biāo)

在試驗(yàn)結(jié)束第33d時(shí)進(jìn)行采血，3000 r/min離心10min處理收集血清，按照以下各個(gè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)定血清中丙二醛 （MDA）含量，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和總抗氧化力（T-AOC）。

1.6 統(tǒng)計(jì)

利用SPSS 19.0 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)比顯著性差異（P＜0.05），數(shù)據(jù)表示方式為平均值±平方差（?x±s），通過(guò)GraphPad Prism 5.0軟件對(duì)抗氧化指標(biāo)結(jié)果進(jìn)行制圖。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對(duì)豬日增重料肉比的效果

在試驗(yàn)的32d飼養(yǎng)期里，各組豬均未有發(fā)病記錄，健康情況良好。經(jīng)單因素分析（結(jié)果見(jiàn)表1），添加3%、5%的試驗(yàn)組平均日增重與對(duì)照組比呈極顯著差異 （ P＜0.01），其中添加5%試驗(yàn)組效果最為明顯，對(duì)照組和1%、3%、5%試驗(yàn)組平均日增重呈依次遞增的趨勢(shì)，只有添加5%復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓液的試驗(yàn)組平均料重與對(duì)照組比呈顯著性差異（ P＜0.05），但對(duì)照組與1%、3%、5%試驗(yàn)組的平均料重比依次為遞減趨勢(shì)。

表1 日增重料重比基本情況

2.2 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對(duì)豬血常規(guī)指標(biāo)的效果

結(jié)果見(jiàn)表2，對(duì)于大長(zhǎng)白二元育肥豬血常規(guī)指標(biāo)，隨著飼料中乳酸菌復(fù)合發(fā)酵蚯蚓物水平的增加，中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值呈線性下降（P＜0.05），淋巴細(xì)胞比率呈線性增加（P＜0.01），其他血常規(guī)指標(biāo)對(duì)乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物不同水平無(wú)響應(yīng)。

表2 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對(duì)豬血常規(guī)指標(biāo)的效果

2.3 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對(duì)豬抗氧化能力的效果

結(jié)果見(jiàn)表3，可知在試驗(yàn)第33d時(shí)，添加1%、3%、5%復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物的試驗(yàn)組肉豬血清丙二醛MDA含量較對(duì)照組分別降低0.5 nmol/mL、0.55 nmol/mL和1.06 nmol/mL，均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。試驗(yàn)組豬血清中GSH-Px活力分別較對(duì)照組有明顯的提升趨勢(shì)，其中添加5%的試驗(yàn)組與對(duì)照組比極顯著差異（P＜0.01）；肉豬血清SOD活性較對(duì)照組有略微升高的趨勢(shì)，但無(wú)顯著差異性（P＞0.05）；3個(gè)試驗(yàn)組豬血清T-AOC總抗氧化能力較對(duì)照組均有提高，但添加5%的復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物試驗(yàn)組與對(duì)照組相比有顯著性差異（P＜0.05）。

表3 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對(duì)豬抗氧化能力的效果

3 討論

生豬的生長(zhǎng)性能反映生豬的生長(zhǎng)速度、飼料利用率等重要指標(biāo)，對(duì)豬場(chǎng)的養(yǎng)殖水平有著評(píng)價(jià)意義，生長(zhǎng)性能的高低更決定著生豬產(chǎn)肉能力，以及養(yǎng)殖場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益[6]。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組比，添加1%、3%、5%復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物的試驗(yàn)組大白豬日增重和料重比均有提升，且添加5%的發(fā)酵液效果差異極顯著（P＜0.01），平均日增重約達(dá)到0.918kg。徐麒麟[7]在飼料中添加蚯蚓提取物可以降低成華豬的料重比，并可以提高抗氧化能力，本試驗(yàn)乳酸菌發(fā)酵蚯蚓產(chǎn)物與蚯蚓提取物相比，降低丙二醛 （MDA）含量幅度較大。李園園[8]等在安義瓦灰雞飼糧中添加蚯蚓發(fā)酵液的試驗(yàn)中，蚯蚓發(fā)酵液可明顯改善雞的生長(zhǎng)性能、肌肉品質(zhì)，以添加量為5μL/g蚯蚓發(fā)酵液的效果最佳。王燕麗[9]在復(fù)合發(fā)酵蚯蚓蛋白飼料對(duì)肉豬生長(zhǎng)性能的效果試驗(yàn)中，表明發(fā)酵蚯蚓蛋白飼料確實(shí)能促進(jìn)肉豬增重，并能降低飼料成本，蚯蚓蛋白替代70%的豆粕效果相對(duì)較好，其應(yīng)用效果與本實(shí)驗(yàn)一致。Rudabeh R[10]在飼糧中添加蚯蚓提取物對(duì)里海羅貝魚種血清免疫參數(shù)和生長(zhǎng)性能的影響試驗(yàn)中，蚯蚓提取物顯著提高了增重和比生長(zhǎng)率、食物適口性指數(shù)和飼料轉(zhuǎn)化率（P＜0.05）。

中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞均是與機(jī)體免疫能力有關(guān)的[11]，根據(jù)添加1%、3%、5%試驗(yàn)組的血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)得出復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物可以改善機(jī)體免疫能力，促進(jìn)生長(zhǎng)的功能。吳貴富[12]在飼料中添加富硒乳酸菌中藥制劑，提高育肥豬生長(zhǎng)性能并改善了血液指標(biāo)，乳酸菌可以促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體生長(zhǎng)性能和抗氧化功能。

正常動(dòng)物體內(nèi)會(huì)含有活性氧，過(guò)量的活性氧能通過(guò)氧化反應(yīng)的形式，會(huì)造成各種功能障礙，嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致癌癥等疾病[13]，對(duì)于育肥豬來(lái)說(shuō)，會(huì)影響其肉品質(zhì)，降低機(jī)體中的氧自由基，利于機(jī)體減少發(fā)生疾病的可能，提高抗氧化能力為之重要。本試驗(yàn)研究表明，添加1%、3%、5%試驗(yàn)組豬血清中的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和總抗氧化能力（T-AOC）呈直線提升，其中5%丙二醛 （MDA）含量呈直線下降。相比試驗(yàn)中對(duì)照組，添加5%試驗(yàn)組豬血清中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）有極顯著性差異（P＜0.01），總抗氧化能力（T-AOC）有顯著性差異（P＜0.05）。周億金[14]等在動(dòng)物試驗(yàn)中，得出結(jié)果是不同濃度的蚯蚓抗氧化提取物對(duì)成年小鼠血液的超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶GSH-Px、過(guò)氧化氫酶CAT活性的升高和丙二醛MDA含量的減少均有不同程度的影響，結(jié)果與本試驗(yàn)一致。徐麒麟[15]等在飼喂蚯蚓提取液原液對(duì)家蠶中腸氧化損傷、總抗氧化能力及抗氧化酶含量影響的試驗(yàn)中，得出結(jié)論蚯蚓提取液可降低家蠶中腸 LDH 含量、提高抗氧化酶基因的表達(dá)水平等抗氧化能力，也表明本試驗(yàn)結(jié)論得出的蚯蚓有提高動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力的作用。蚯蚓的藥用價(jià)值廣泛，是成本較低的蛋白質(zhì)資源，加上乳酸菌抗菌和增強(qiáng)免疫力等功能作用以及示范應(yīng)用普遍，聯(lián)合作用下在未來(lái)還會(huì)有新的發(fā)現(xiàn)，會(huì)為養(yǎng)殖畜牧行業(yè)創(chuàng)造更多的可能性。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)的研究下，飼糧中添加乳酸菌復(fù)合發(fā)酵蚯蚓物能夠促進(jìn)育肥肉豬增重，同時(shí)能降低料重比，改善血液指標(biāo)，提高育肥豬的抗氧化能力，從而增加飼養(yǎng)肉豬過(guò)程中的經(jīng)濟(jì)效益，其添加5%的乳酸菌復(fù)合發(fā)酵蚯蚓對(duì)大長(zhǎng)白育肥豬生長(zhǎng)性能和抗氧化功能效果較好。