高麗娜 李艷 韓現(xiàn)芹 張浩

（天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心 300110）

改革開(kāi)放以來(lái)，人民的物質(zhì)生活水平不斷提升，消費(fèi)者對(duì)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題的重視程度越來(lái)越高，這需要采用更加先進(jìn)、準(zhǔn)確的技術(shù)對(duì)畜產(chǎn)品中的有毒有害物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，從而確保畜產(chǎn)品的安全。ELISA 技術(shù)的特異性和敏感性都比較高，對(duì)可溶性抗原抗體系統(tǒng)的檢測(cè)較為可靠，也不會(huì)產(chǎn)生過(guò)度的污染，對(duì)工作人員、環(huán)境都比較安全，且ELISA 技術(shù)是通過(guò)抗體分子（酶分子）共價(jià)結(jié)合的方式實(shí)現(xiàn)安全檢測(cè)，這種結(jié)合方式對(duì)酶的生物學(xué)活性也不會(huì)受到干擾。相較于其他費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、費(fèi)用昂貴的檢測(cè)方法，ELISA 技術(shù)更具有推廣價(jià)值。

1 ELISA 技術(shù)原理

ELISA 技術(shù)是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合的一種具有高特異性、高敏感度的實(shí)驗(yàn)技術(shù)[1]。具體步驟是將基質(zhì)中抗原、抗體結(jié)合在固相載體的表面，使其保留免疫活性，再加入抗原、抗體與酶結(jié)合形成偶聯(lián)化合物，該偶聯(lián)化合物不僅有酶的活性特異性，也有與載體表面的抗原、抗體特異性結(jié)合的活性，最后加入對(duì)應(yīng)酶的底物，從而出現(xiàn)顏色反應(yīng)，用分光光度計(jì)判定底物的顯色結(jié)果，進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果的判斷。常見(jiàn)的ELISA 類型有7種，分別是雙抗體夾心測(cè)抗原、雙抗原夾心測(cè)抗體、間接法測(cè)抗體、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原、捕獲包被法測(cè)抗體以及親和素-生物素系統(tǒng)-ELISA，其中傳染病的檢測(cè)主要應(yīng)用間接法測(cè)抗體，其優(yōu)點(diǎn)是只需要更換包被抗原就能夠利用同一酶標(biāo)抗體建立檢測(cè)相對(duì)應(yīng)的抗體。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不容易被除去或不容易得到足夠純度的抗原時(shí)，可以使用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體。捕獲包被法測(cè)抗體能夠用于病毒性感染的早期診斷。

2 ELISA 技術(shù)在畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中的應(yīng)用

2.1 畜產(chǎn)品藥物殘留的檢測(cè)

畜產(chǎn)品的安全檢測(cè)中藥物殘留是十分重要的組成部分，在畜禽養(yǎng)殖的過(guò)程中，為了能夠更好的減少畜禽疾病的發(fā)生，通常會(huì)在飼料內(nèi)加入一些藥品，也有部分養(yǎng)殖場(chǎng)在畜禽發(fā)生疾病后不能嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行用藥，這都導(dǎo)致了畜禽體內(nèi)產(chǎn)生積累、代謝不完全的藥物。如果殘留的藥物超過(guò)了安全標(biāo)準(zhǔn)或畜禽在屠宰加工前使用了違禁藥品，畜產(chǎn)品會(huì)對(duì)消費(fèi)者的健康安全帶來(lái)較大的威脅。采用ELISA 技術(shù)能夠全面的進(jìn)行畜產(chǎn)品中的藥物殘留監(jiān)測(cè)，準(zhǔn)確的判定畜禽體內(nèi)的藥物殘留情況，在使用ELISA 技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，能夠做到多個(gè)樣品同時(shí)檢測(cè)，且檢測(cè)過(guò)程中僅使用少量的甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑，而這部分有機(jī)溶劑的使用幾乎對(duì)畜禽無(wú)任何影響，這在保證了檢測(cè)準(zhǔn)確性的同時(shí)提高了安全性[2]。

目前，畜產(chǎn)品的藥物殘留主要包括激素類藥物、抗生素、呋喃類藥物、磺胺類藥物、轉(zhuǎn)基因類藥物、喹諾酮類藥物等，在畜產(chǎn)品抗生素殘留的檢測(cè)中，ELISA 法的樣品前處理最為簡(jiǎn)便，分析時(shí)間短，敏感度高，相較于高效液相色譜、氣相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用等方法來(lái)講更適合做日常大量樣品的篩選工作，例如，ELISA 技術(shù)檢測(cè)豬肉、乳汁中的磺胺類藥品殘留時(shí)，檢出限可達(dá)到2.0μg/kg，檢測(cè)氯霉素的檢出限可達(dá)100ng/kg，檢測(cè)氯丙嗪時(shí)的檢出限為12.07μg/L[3]。激素類藥物如己烯雌酚能夠提高畜禽的平均日增重和飼料報(bào)酬率，對(duì)于人來(lái)講己烯雌酚不僅能夠引起人的癌癥，還會(huì)造成生理功能的紊亂，影響兒童的生長(zhǎng)發(fā)育，故世界衛(wèi)生組織禁止使用己烯雌酚，歐盟對(duì)己烯雌酚的限量值為2μg/kg，ELISA 技術(shù)在檢測(cè)己烯雌酚時(shí)的檢出限為187.5ng/kg，遠(yuǎn)高于限量值。

2.2 畜產(chǎn)品生物毒素的檢測(cè)

生物毒素主要是在畜禽通過(guò)食物鏈等原因造成的機(jī)體內(nèi)生物活性物質(zhì)的殘留，這部分生物活性物質(zhì)不僅對(duì)畜禽本身有一定的損害，對(duì)人類也有極大的威脅。畜產(chǎn)品內(nèi)常見(jiàn)的生物毒素包括藻類毒素和真菌毒素。藻類毒素主要包括腹瀉性貝毒、麻痹貝毒、神經(jīng)性貝毒、西加魚(yú)毒素以及遺忘癥貝毒等[4]。黃曲霉毒素作為真菌毒素的一種，是生物毒素中危害較為嚴(yán)重、分布較為廣泛的毒素，長(zhǎng)期使用含有黃曲霉毒素的畜產(chǎn)品會(huì)導(dǎo)致人體受到嚴(yán)重的損害，癌癥的發(fā)病率大大增加。ELISA 技術(shù)在檢測(cè)黃曲霉毒素時(shí)的檢出限為0.01μg/kg，檢測(cè)時(shí)間約為2h，檢測(cè)腹瀉性貝毒時(shí)的檢出限為20ng/kg，與其他檢測(cè)方法相比較有更高的敏感度和更短的檢測(cè)時(shí)間。

2.3 畜產(chǎn)品微生物的檢測(cè)

微生物的導(dǎo)致食源性疾病、影響畜產(chǎn)品安全的重要因素，畜產(chǎn)品微生物的檢驗(yàn)主要包括菌落總數(shù)、大腸菌群、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等致病菌，常用的微生物檢測(cè)方法是進(jìn)行微生物分離培養(yǎng)，而后利用生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行診斷，這種方法不僅需要操作人員具備一定的專業(yè)素質(zhì)，檢測(cè)周期也比較長(zhǎng)，多為6～7d，而ELISA 法在檢測(cè)微生物是檢測(cè)時(shí)間通常為2～3d，大大節(jié)約了檢測(cè)的時(shí)間。目前，魚(yú)類養(yǎng)殖過(guò)程中，由于水源、環(huán)境的污染嚴(yán)重，水產(chǎn)品中的沙門氏菌含量較高，因此需要對(duì)水產(chǎn)進(jìn)行微生物的檢測(cè)。此外，還有部分病菌如大腸桿菌在一定條件下會(huì)表現(xiàn)出無(wú)法培養(yǎng)的狀態(tài)，利用傳統(tǒng)的檢測(cè)方法很難檢測(cè)[5]，ELISA 技術(shù)能夠很好的解決這一問(wèn)題。

2.4 畜產(chǎn)品農(nóng)藥和轉(zhuǎn)基因類產(chǎn)品的檢測(cè)

畜禽在養(yǎng)殖過(guò)程中需要飼料來(lái)提供其生長(zhǎng)發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而飼料的原材料多為作物，作物在中指的過(guò)程中需要使用一定的肥料、農(nóng)藥來(lái)保證作物的正常生長(zhǎng)，但當(dāng)肥料和農(nóng)藥過(guò)度使用時(shí)會(huì)導(dǎo)致作物中農(nóng)藥殘留過(guò)高，制成飼料后被畜禽食入，這些物質(zhì)無(wú)法通過(guò)代謝全部排出體外，從而通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，食入含有農(nóng)藥殘留的畜產(chǎn)品后會(huì)出現(xiàn)惡心、發(fā)燒甚至昏迷的癥狀，嚴(yán)重危害人們的身體健康。近幾年，研究人員將性狀良好的外源基因引入植物、動(dòng)物或微生物形成轉(zhuǎn)基因生物，轉(zhuǎn)基因生物的遺傳物質(zhì)已經(jīng)發(fā)生變化，而這種變化目前尚不明確，可能會(huì)給人體帶來(lái)一些不可預(yù)知的傷害，為控制和避免這類傷害，應(yīng)當(dāng)對(duì)畜產(chǎn)品中的農(nóng)藥、轉(zhuǎn)基因類產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)。ELISA 法能夠很好的與高效液相色譜、薄層層析法連用，縮小定位范圍，有效的檢測(cè)出農(nóng)藥、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的殘留類別及含量，為畜產(chǎn)品質(zhì)量安全保駕護(hù)航。

3 小結(jié)

目前，ELISA 技術(shù)憑借其操作簡(jiǎn)單、敏感度高、特異性高、安全性高、成本低廉、設(shè)備簡(jiǎn)單的特點(diǎn)廣泛應(yīng)用于畜產(chǎn)品的獸藥殘留、生物毒素、微生物、農(nóng)藥殘留以及轉(zhuǎn)基因類產(chǎn)品的檢測(cè)中，能夠很好的進(jìn)行大批量樣品的快速分析，降低了檢測(cè)成本，提高了檢測(cè)效率，已經(jīng)稱為了畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中不可或缺的一種方法。下一步應(yīng)當(dāng)繼續(xù)改進(jìn)樣品的純化步驟，提高回收率和敏感度，從而使ELISA 法有更廣闊的應(yīng)用前景。