成明慧 龍偉 徐文清

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所，天津市放射醫(yī)學(xué)與分子核醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 300192

根據(jù)美國食品和藥品監(jiān)督管理局（food and drug administration，F(xiàn)DA）的定義，生物標(biāo)志物是一種可以被檢測到的生化指標(biāo)，可以反映特定的生理學(xué)、病理學(xué)或治療過程，評估不同類型的生物學(xué)特性或參數(shù)[1]。因此，生物標(biāo)志物對鑒定疾病表型和開發(fā)藥物至關(guān)重要。生物標(biāo)志物主要包括基因序列、微小RNA（microRNAs，miRNAs）、長鏈非編碼RNA（long non-coding RNAs，lncRNAs）、代謝物、微生物群、細(xì)胞因子和趨化因子等。目前，美國FDA 已批準(zhǔn)了約150 種藥物作用于機(jī)體后產(chǎn)生的生物標(biāo)志物[1]，然而都與輻射不相關(guān)。多個(gè)潛在的生物標(biāo)志物正在確認(rèn)中，其中一些具有抗輻射應(yīng)用價(jià)值。

抗輻射藥物研發(fā)已有70 年的歷史，雖然研究者研發(fā)了一些效果較好的藥物，但可以應(yīng)用于臨床、效果好且不良反應(yīng)小的抗輻射藥物很少。例如氨磷汀，由于會(huì)使患者產(chǎn)生惡心和低血壓等不良反應(yīng)，使得臨床應(yīng)用受限。充分研究輻射損傷的作用機(jī)制，對于研發(fā)抗輻射藥物至關(guān)重要，而輻射損傷生物標(biāo)志物的研究是其中重要的一環(huán)。美國FDA明確規(guī)定，如果一種生物標(biāo)志物審查合格，就可以在多個(gè)相關(guān)的藥物中使用，從而加快藥物的研發(fā)進(jìn)程[1-2]。

除了與抗輻射藥物相關(guān)的生物標(biāo)志物之外，用于評估輻射吸收劑量的生物標(biāo)志物也很重要。因?yàn)樵诎l(fā)生大規(guī)模的核事故時(shí)，需要快速評估大量傷員的個(gè)人吸收劑量，并據(jù)此制定輻射救治方案。近年來，有研究者嘗試用血液學(xué)、生化和細(xì)胞遺傳學(xué)參數(shù)來估算輻射吸收劑量，如C 反應(yīng)蛋白、淀粉酶和細(xì)胞因子，然而這些標(biāo)志物個(gè)體間差異大，并且會(huì)隨炎癥和感染等因素波動(dòng)[3]。目前，淋巴細(xì)胞耗竭分析和雙著絲粒染色體分析是用于評估輻射吸收劑量的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是淋巴細(xì)胞耗竭分析耗費(fèi)時(shí)間較長，而雙著絲粒染色體分析技術(shù)含量高，勞動(dòng)強(qiáng)度大，需要專業(yè)人員操作[4]。另外，磷酸化組蛋白H2AX（phosphorylated histone H2AX，γ-H2AX）是檢測DNA 雙鏈斷裂的最佳生物標(biāo)志物，然而最佳檢測時(shí)間是照射后0～2 h，隨后γ-H2AX 表達(dá)水平急劇下降，因此檢測窗口很窄。綜上，新型生物標(biāo)志物應(yīng)該對輻射敏感、穩(wěn)定性好，并且能以非侵入性或微創(chuàng)性的方式進(jìn)行快速和重復(fù)檢測。隨著代謝組學(xué)、免疫組學(xué)和基因組學(xué)應(yīng)用于輻射劑量學(xué)領(lǐng)域，基因轉(zhuǎn)錄標(biāo)志物（miRNAs、lncRNAs 等）、輻射代謝物和新的測量技術(shù)等豐富了輻射生物標(biāo)志物的范圍，我們對近年來輻射相關(guān)新型生物標(biāo)志物的最新研究進(jìn)展予以綜述。

1 與抗輻射藥物相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物

抗輻射藥物在體內(nèi)作用產(chǎn)生的生物標(biāo)志物與該藥物的藥效相關(guān)，理想的生物標(biāo)志物應(yīng)從以下4 個(gè)方面考察：（1）是否與藥物的作用機(jī)制相關(guān)；（2）是否與存活率相關(guān)；（3）是否可以在多個(gè)物種間觀察到；（4）是否可通過相對微創(chuàng)性技術(shù)獲得，并可進(jìn)行分析量化[1]。

1.1 粒 細(xì) 胞 集 落 刺 激 因 子（granulocyte-colony stimulating factor，G-CSF）和白細(xì)胞介素6（interleukin，IL-6）

CBLB502（Entolimod）是美國FDA 授權(quán)作為治療急性輻射綜合征（acute radiation syndrome，ARS）的指定藥物，并獲得了新藥臨床試驗(yàn)授權(quán)[5]。G-CSF和IL-6 是CBLB502 在體內(nèi)發(fā)揮輻射防護(hù)作用和緩解作用的關(guān)鍵細(xì)胞因子，對受到急性照射的小鼠注射G-CSF 或IL-6 中和抗體可以消除CBLB502的輻射防護(hù)作用[6]，因此G-CSF 和IL-6 可能作為潛在的生物標(biāo)志物，以證明CBLB502 通過刺激機(jī)體產(chǎn)生G-CSF 和IL-6 而發(fā)揮抗輻射作用。另外，該結(jié)果也在小鼠、犬科動(dòng)物和非人類靈長類動(dòng)物（non-human primates，NHPs）模型中得到驗(yàn)證[7]。許多研究結(jié)果表明，給予受到60Co γ 或X 射線照射的小鼠（8～10 周齡的CD2F1 或C57BL/6J 雄鼠）多種抗輻射藥物[5-雄烯二醇（5-AED）、δ-生育三烯酚（GT3）、γ-生育三烯酚（DT3）和琥珀酸生育酚（TS）]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，G-CSF 和IL-6 水平以時(shí)間依賴的方式升高[8-10]。使用G-CSF 或IL-6 抗體同樣可以消除5-雄烯二醇（5-AED）、δ-生育三烯酚（GT3）、γ-生 育 三 烯 酚（DT3）和 琥 珀 酸 生 育 酚（TS）對小鼠的輻射防護(hù)作用。如果美國FDA 批準(zhǔn)將G-CSF和IL-6 作為抗輻射相關(guān)的生物標(biāo)志物，可能會(huì)加快以上多種抗輻射藥物的研究進(jìn)程。G-CSF 已經(jīng)被美國FDA 批準(zhǔn)用于減輕由致死劑量輻射引起的造血系統(tǒng)ARS[11]。期待G-CSF 可以作為與抗輻射藥物相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物，為輻射損傷救治方案的制定提供參考。

1.2 瓜氨酸

瓜氨酸是小腸細(xì)胞谷氨酰胺代謝的終產(chǎn)物，對小腸上皮具有組織特異性，其血漿濃度與腸道組織損傷程度呈負(fù)相關(guān)。迄今為止，只有瓜氨酸被確定為輻射誘導(dǎo)腸道損傷和腸上皮細(xì)胞丟失的循環(huán)生物標(biāo)志物[12]。Jones 等[13]連續(xù)采用IL-11 處理全身受到致死劑量X 射線照射的小鼠（8～10 周齡的C57BL/6J 雄鼠），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其血清瓜氨酸水平回升明顯加快，并且小腸健康狀況恢復(fù)很快，IL-11 處理組的小鼠生存率高于單純照射組，該研究結(jié)果表明瓜氨酸或可作為潛在的生物標(biāo)志物，這說明IL-11 在體內(nèi)通過瓜氨酸發(fā)揮抗輻射作用。此外，經(jīng)IL-11處理的小鼠30 d 存活率和腸隱窩存活率顯著高于單純照射組。腸道損傷水平與瓜氨酸之間的相關(guān)性已在小鼠實(shí)驗(yàn)中得到了充分驗(yàn)證，美國FDA 規(guī)定生物標(biāo)志物應(yīng)廣泛存在于多個(gè)物種中。還有研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NHPs 和哥廷根小型豬（gottingen minipig，GMP）受到致死劑量照射后，出現(xiàn)胃腸道ARS，同時(shí)血清瓜氨酸水平顯著降低[14]。因此，這也間接論證了瓜氨酸的表達(dá)水平可以用來評估抗輻射藥物的效果。

1.3 其他

除G-CSF、IL-6 和瓜氨酸之外，其他抗輻射藥物的潛在生物標(biāo)志物正在研究中。Basile 等[15]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低劑量的HemaMax（一種重組人IL-12）可通過促進(jìn)造血、免疫和胃腸功能的恢復(fù)，提高受照小鼠（C57BL/6J 雌鼠）和NHPs 的存活率，同時(shí)顯著地提高了血漿中干擾素γ（interferon-γ，IFN-γ）的水平。進(jìn)一步的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IFN-γ可以評估不同物種間等效藥理作用對應(yīng)的劑量，實(shí)現(xiàn)物種間劑量轉(zhuǎn)換，這提示IFN-γ 可作為抗輻射藥物潛在的生物標(biāo)志物[15]。也有研究結(jié)果表明，用(E)-4-羧基苯乙烯基-4-氯苯甲基砜鈉鹽（Ex-RAD）處理受到10 Gy60Co γ 或137Cs 射線照射的細(xì)胞，磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路活化，并且磷酸化的Akt（pAKT）以劑量依賴性方式增加，因此pAKT 可作為抗輻射藥物潛在的生物標(biāo)志物，表明(E)-4-羧基苯乙烯基-4-氯苯甲基砜鈉鹽具有抗輻射作用[16]。

2 用于輻射吸收劑量估算的潛在生物標(biāo)志物

可靠的生物標(biāo)志物對于快速準(zhǔn)確評估輻射吸收劑量和實(shí)施有效的應(yīng)對措施至關(guān)重要。然而目前還沒有最佳的生物標(biāo)志物來評估輻射吸收劑量。我們總結(jié)了多種用于估算輻射吸收劑量的潛在生物標(biāo)志物。

2.1 腸道微生物

人和動(dòng)物身上的微生物絕大多數(shù)寄生在腸道，可以隨糞便排出體外。對GMP、雄性BALB/c 小鼠和NHPs 模型的研究結(jié)果表明，輻射可以引起糞便中特定腸道微生物群的豐度發(fā)生變化，這表明某些微生物對宿主全身照射很敏感，具備作為輻射生物標(biāo)志物的潛力[17-18]。例如在GMP 和中國恒河猴ARS 的模型中，這些動(dòng)物腸道中的微生物呈現(xiàn)出可預(yù)測和劑量依賴性的變化。將二者暴露于5 個(gè)不同的劑量水平下，隨后對其糞便標(biāo)本進(jìn)行高通量測序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，普氏桿菌、乳桿菌、梭狀芽孢桿菌和振蕩桿菌的豐度與輻射劑量呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）。除此之外，普氏桿菌、振蕩桿菌和密螺旋體與GMP 的存活率密切相關(guān)，鏈球菌與中國恒河猴的存活率相關(guān)，該研究結(jié)果表明，腸道微生物中的特定成員是衡量輻射吸收劑量的可靠生物標(biāo)志物[16]。在另一項(xiàng)采用基因芯片分析Wistar 大鼠受X 射線照射后腸道微生物組成的研究中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，類桿菌科、乳桿菌科和鏈球菌科的12 個(gè)菌株在受到輻射后16S rRNA 水平升高，47 個(gè)單獨(dú)的梭菌科菌株的16S rRNA水平下降[19]，這表明腸道微生物可用于評估輻射吸收劑量。以上潛在的生物標(biāo)志物普遍存在于人和動(dòng)物的糞便中，且這種基于分析腸道微生物的技術(shù)是非侵入性的，便于操作?；谝陨蟽?yōu)點(diǎn)，腸道微生物代表了一種新型的生物標(biāo)志物，可以顯著擴(kuò)大輻射吸收劑量評估的范圍和提高準(zhǔn)確性。

此外，腸道微生物的代謝物質(zhì)與輻射吸收劑量也有一定的相關(guān)性。C57BL/6J 小鼠受到0～8 Gy X 射線全身照射后，在腸道微生物群的代謝物質(zhì)中，37 種化合物的濃度與輻射劑量相關(guān)，其中嘧啶水平與輻射劑量呈正相關(guān)，色氨酸代謝水平與輻射劑量呈負(fù)相關(guān)[20]，這表明腸道微生物群的代謝物也是潛在的估算輻射吸收劑量的生物標(biāo)志物。

2.2 mRNA

mRNA 是基因表達(dá)的橋梁，mRNA 將DNA 的遺傳信息傳遞給下游的靶標(biāo)和信號(hào)通路，我們據(jù)此推測mRNA 作為生物標(biāo)志物的研究是非常有前景的。人外周血淋巴細(xì)胞的輻射生物標(biāo)志物在紫外線照射后24 h 出現(xiàn)，雖然mRNA 的水平一般隨時(shí)間的推移而降低，但許多生物標(biāo)志物在照射后72 h 仍顯著升高[21]。低劑量（2～50 cGy）輻射可以誘導(dǎo)正常人淋巴細(xì)胞某些特定的mRNA 轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)，其中細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A 基因（CDKN1A）和生長抑制及DNA 損傷誘導(dǎo)基因（GADD45）的mRNA表達(dá)水平在上調(diào)的同時(shí)呈線性劑量效應(yīng)關(guān)系[22]。因此，細(xì)胞基因表達(dá)的相對水平可以用來估算輻射吸收劑量。

2.3 miRNAs

miRNAs 是由18～24 個(gè)核苷酸組成的非編碼RNA。由于其尺寸較小并且受外泌體保護(hù)，因此miRNAs 相對穩(wěn)定。另外在同一物種的個(gè)體中，miRNAs 重現(xiàn)性好?；谝陨? 個(gè)特性，體液中的miRNAs 可以作為很多生理反應(yīng)和病理階段的生物標(biāo)志物[23]。目前對輻射生物劑量敏感的miRNAs 的研究正在進(jìn)行，Dinh 等[24]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠（C57BL/6J 雌鼠）經(jīng)1～8 Gy 單次全身照射后血清中miR-150的水平隨照射劑量的增加呈依賴性降低，在隨后的時(shí)間點(diǎn)（48 h 和72 h）或更高劑量（8～12 Gy）下同步降低。研究者又進(jìn)一步研究了不同組別的小鼠接受單次或分次的相同照射劑量后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清中miR-150 水平的變化趨勢一致，這進(jìn)一步證實(shí)了miR-150 作為潛在生物標(biāo)志物的敏感性和穩(wěn)定性。血清中的miR-23a-3p 對輻射損傷沒有反應(yīng)，而進(jìn)化保守的miR-150-5p 在小鼠和NHPs137Cs（110 cGy/min）全身照射模型中顯示出劑量反應(yīng)性[25]。因此，用miR-23a-3p 標(biāo)準(zhǔn)化miR-150-5p 的水平，可以減少個(gè)體間誤差。例如最新一項(xiàng)基于雙miRNA 法（miR150-5p/miR-23a-3p）估算電離輻射吸收劑量的研究結(jié)果顯示，在照射后數(shù)小時(shí)或1 周內(nèi)，僅用小鼠（6～10 周齡的C57BL/6J 小鼠）的一滴血就可以估算低劑量范圍（0.5～3.5 Gy）的輻射吸收劑量，分辨率較好[26]。綜上所述，基于miRNAs 的敏感性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，其在輻射事故的分診中具有廣闊的前景。

除單個(gè)的miRNAs 可以作為潛在生物標(biāo)志物用來評估輻射吸收劑量外，另一項(xiàng)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，特定組成的miRNAs 也具備作為生物標(biāo)志物的潛力，該研究結(jié)果顯示，第1 組5 個(gè)miRNAs（miR-130a-3p、miR-150-5p、miR-142-5p、miR-706 和miR-342-3p）能夠區(qū)分出受到0 Gy 和2 Gy137Cs γ 射線照射（110 cGy/min）的小鼠，并且照射后7 d 仍然可以將其區(qū)分；第2 組3 個(gè)miRNAs（miR-34b-3p、miR-126-3p 和miR-17-3p）同樣能夠在輻射暴露后24 h 和7 d 區(qū)分低亞致死劑量和高亞致死劑量的輻射；第3 組5 個(gè)miRNAs 能夠在24 h內(nèi)區(qū)分6.5 Gy 和8 Gy 的照射（分別為高亞致死劑量和高致死劑量）[25]。值得注意的是，每組中沒有一個(gè)單獨(dú)的miRNAs 能夠區(qū)分0 Gy 與2 Gy、2 Gy與6.5 Gy、6.5 Gy 與8 Gy的輻射劑量。Aryankalayil 等[27]利用小鼠（6～8 周齡的C57BL/6J 雌鼠）模型證明，血漿miRNAs 表達(dá)特征譜可以區(qū)分接受0.5、2、10 Gy X 射線全身照射的小鼠，其準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度都在90%以上。上述研究結(jié)果表明，基于miRNAs 變化的生物標(biāo)志物或可成為有效測定生物劑量的工具。

2.4 lncRNAs

lncRNAs 是一類長度超過200 個(gè)核苷酸的類mRNA 轉(zhuǎn)錄物，存在于約80%的轉(zhuǎn)錄物中[28]。lncRNAs 會(huì)因細(xì)胞類型的不同而特異性表達(dá)，并對各種刺激作出反應(yīng)。Xu 等[29]將體外培養(yǎng)的人支氣管上皮細(xì)胞分別暴露于2、4、8 Gy X 射線中，通過微陣列篩選出115 個(gè)與輻射劑量存在線性關(guān)系的lncRNAs。雖然lncRNAs 不編碼蛋白質(zhì)，但是其可以在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，因此，研究者進(jìn)一步將115 個(gè)lncRNAs 共表達(dá)的mRNAs進(jìn)行功能預(yù)測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這些lncRNAs 會(huì)顯著影響p53 信號(hào)通路。這表明lncRNAs 對于研究輻射損傷作用機(jī)制和推測輻射吸收劑量有一定的指導(dǎo)作用。雖然lncRNAs 保守性較差，仍然有一些lncRNAs 被鑒定為與輻射損傷和癌癥相關(guān)的生物標(biāo)志物[30]。Kabacik 等[31]報(bào)道了取自健康人體的T 淋巴細(xì)胞中的FAS-AS1（antisense RNA 1）lncRNAs 在照射后以劑量依賴的方式上調(diào)了5 倍。目前，由于lncRNAs 保守性差，因此只有一小部分lncRNAs被研究過，未來新技術(shù)的應(yīng)用將有助于人類更深入地了解lncRNAs。

2.5 蛋白質(zhì)

近年來，有研究者利用蛋白質(zhì)組學(xué)和生物信息學(xué)技術(shù)手段，探索輻射作用于機(jī)體或細(xì)胞后蛋白質(zhì)的表達(dá)變化及其與劑量效應(yīng)和時(shí)空變化規(guī)律。在雄性CD2F1 小鼠（12～14 周齡）和GMP 等動(dòng)物模型的研究結(jié)果中，血漿IL-18 和IL-18 結(jié)合蛋白（IL-18BP）的水平在γ 射線照射后第1～13 天顯著增加，并且IL-18BP 水平升高的第二階段與致死輻射劑量密切相關(guān)[32]。Ossetrova 等[33]對受到1～8.5 Gy 中子或60Co γ 射線全身照射的NHPs 的血漿蛋白進(jìn)行分析，根據(jù)C 反應(yīng)蛋白、血清淀粉樣蛋白A（SAA）、IL-6和Flt3 配體（Flt3L）等蛋白質(zhì)的不同組合建立劑量-效應(yīng)校準(zhǔn)曲線，曲線擬合性良好，因此，蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物的組合比任何一個(gè)單獨(dú)的生物標(biāo)志物具有更高的準(zhǔn)確性。為了得到更加貼近人體的數(shù)據(jù)，Lee 等[34]采用受到X 射線照射（88 cGy/min）的人源化小鼠識(shí)別出了46 種輻射響應(yīng)蛋白，并選擇了其中4 種蛋白[鐵氧還蛋白還原酶（FDXR）、B 淋巴細(xì)胞瘤2 基因相關(guān)X 蛋白（BAX）、DNA 損傷特異結(jié)合蛋白2（DDB2）和肌動(dòng)蛋白α1（ACTN1）]作為輻射劑量估算的候選生物標(biāo)志物。然而以上蛋白質(zhì)是否可以作為輻射劑量效應(yīng)的生物標(biāo)志物仍需進(jìn)一步的研究和驗(yàn)證。

3 小結(jié)與展望

生物標(biāo)志物對于疾病表型鑒定和藥物開發(fā)至關(guān)重要。在放射生物學(xué)領(lǐng)域，不同的生物標(biāo)志物可用于抗輻射藥物的開發(fā)和評估輻射吸收劑量。在發(fā)生突發(fā)性輻射事故時(shí)，這些類型的生物標(biāo)志物的效用和實(shí)施存在差異。盡管一些生物標(biāo)志物已經(jīng)被美國FDA 批準(zhǔn)用于一些適應(yīng)證，但對抗輻射損傷和估算輻射劑量的生物標(biāo)志物的研究尚處于空白階段。造成這種情況的原因有很多：（1）若將人體暴露在輻射下是不符合倫理的，因此我們不可能通過人體研究獲得生物標(biāo)志物；（2）發(fā)生輻射事故時(shí)，醫(yī)療人員將集中精力對受照者進(jìn)行分類與治療，很難及時(shí)從輻射暴露的受照者身上收集樣本，并對這些樣本進(jìn)行生物標(biāo)志物的識(shí)別和驗(yàn)證；（3）用動(dòng)物模型確定生物標(biāo)志物的過程是緩慢的，需要從小型動(dòng)物模型推進(jìn)到大型動(dòng)物模型，再根據(jù)等效性原則推測；（4）大部分的輻射研究集中在全身照射，較少涉及局部照射和復(fù)合損傷（輻射合并燒傷或傷口）。然而實(shí)際情況下，局部身體暴露和復(fù)合損傷比全身均勻輻射暴露的發(fā)生率更高。因此，局部暴露和復(fù)合傷患者的生物標(biāo)志物評價(jià)將是未來的探索方向。

針對以上問題，我們認(rèn)為應(yīng)擴(kuò)大放射生物學(xué)研究的范圍，使其成為對未來研究者更有吸引力的領(lǐng)域，例如引入代謝組學(xué)，可以檢測輻射反應(yīng)以及代謝產(chǎn)物的變化，這是一系列放大蛋白質(zhì)組和轉(zhuǎn)錄組事件的結(jié)果。另外，代謝物鑒定數(shù)據(jù)庫的建立為臨床應(yīng)用及在現(xiàn)實(shí)生活中實(shí)現(xiàn)人群篩查提供可能。近年來，在大鼠和NHPs 模型中，利用代謝組學(xué)分析完成了涉及輻射劑量和時(shí)間依賴性的研究[35]?？紤]到現(xiàn)有的潛在生物標(biāo)志物的不足，識(shí)別更好的輻射生物標(biāo)志物非常重要。隨著該領(lǐng)域合作研究和資金的增加，預(yù)計(jì)未來在關(guān)于估算輻射吸收劑量和評價(jià)抗輻射藥物有效性方面的生物標(biāo)志物的研究將取得快速進(jìn)展。

利益沖突本研究由署名作者按以下貢獻(xiàn)聲明獨(dú)立開展，不涉及任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明成明慧、龍偉負(fù)責(zé)文獻(xiàn)的查閱、綜述的撰寫；徐文清負(fù)責(zé)綜述的指導(dǎo)與審閱。