楊 帆，張怡青，顧 暢，王 蘭

（東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院秦淮醫(yī)療區(qū)檢驗科，南京 210002）

0 引言

乙型肝炎病毒（HBV）感染一直是困擾中國乃至全球的世界公共衛(wèi)生問題，雖然我國人群乙肝表面抗原（HBsAg）陽性率近年來已經(jīng)下降至6%左右，卻仍然是世界上感染HBV人群數(shù)量最多的國家[1-2]。作為傳統(tǒng)的HBV血清學(xué)標(biāo)志物，乙肝兩對半一直是臨床篩查疾病、反映疾病進展及分期的主要指標(biāo)[3]。

作為雅培公司的新一代體外診斷產(chǎn)品，Alinity ci生化、免疫及整合系統(tǒng)于2018年3月開始在中國市場投入使用。目前國內(nèi)尚未有對Alinity i全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（以下簡稱“Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀”）基于傳染病血清標(biāo)志物相關(guān)性能驗證的文獻報道。本文對Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對于乙肝兩對半檢測的2個定量項目HBsAg及乙肝表面抗體（HBsAb）的檢測性能進行評價如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2020年8—9月我院傳染科住院患者及體檢健康者新鮮血清標(biāo)本。其中HBsAg定量結(jié)果在0．05～250 IU/mL 的陽性標(biāo)本 25 例，HBsAg定量結(jié)果在 0～＜0．05 IU/mL 的陰性標(biāo)本 25 例，HBsAb 定量結(jié)果在10～1000 mIU/mL的陽性標(biāo)本25例，HBsAb定量結(jié)果在0～＜10 mIU/mL的陰性標(biāo)本25例，經(jīng)稀釋測定確定的極高濃度HBsAg及HBsAb各1例，體檢健康者血清標(biāo)本20例（男10例、女10例，年齡18～69歲）。所有標(biāo)本在檢測前均于-20℃保存。

1.2 儀器與試劑

美國雅培公司Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（出廠編號：Ai03097）及配套試劑（HBsAg，批號：12009FN01；HBsAb，批號：07494FN01），雅培 Architect i2000全自動化學(xué)發(fā)光分析儀（以下簡稱“Architect i2000 化學(xué)發(fā)光分析儀”）（機身編號：ISR51159）及其配套試劑（HBsAg，批號：08447FN01；HBsAb，批號：08455FN01）；質(zhì)控品由北京康徹思坦生物公司提供，包括 HBsAg低值質(zhì)控品（0．2 IU/mL）（批號：201911007），HBsAg高值質(zhì)控品（2 IU/mL）（批號：201910003），HBsAb低值質(zhì)控品（10 mIU/mL）（批號：202009003），HBsAb高值質(zhì)控品（30 mIU/mL）（批號：201910005）；衛(wèi)生部臨床檢驗中心下發(fā)的2021年度室間質(zhì)評標(biāo)準(zhǔn)品 202111、202112、202113、202114、202115。

1.3 儀器性能驗證

1.3.1 精密度驗證

1.3.1.1 批間精密度

使用高、低2個濃度的質(zhì)控品，每個濃度每天重復(fù)檢測4次，連續(xù)檢測5 d，收集實驗數(shù)據(jù)，計算20次檢測結(jié)果的算術(shù)平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）以及批間變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）。CV計算公式如下：CV=s/×100%。判斷標(biāo)準(zhǔn)：批間 CV＜15%則為驗證通過。

1.3.1.2 批內(nèi)精密度

將高、低2個濃度的質(zhì)控品按常規(guī)方法連續(xù)檢測20次，計算20次檢測結(jié)果的算術(shù)平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）以及批內(nèi) CV。CV 計算公式如下：CV=s/×100%。判斷標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)CV＜10%為驗證通過。

1.3.2 線性范圍驗證

Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀試劑說明書所展示的線性范圍 HBsAg 為 0．05～250 IU/mL，HBsAb 為2．0～1000 mIU/mL。各選擇 1份 HBsAg和HBsAb濃度接近試劑檢測范圍下限的患者低濃度血清標(biāo)本以及試劑檢測范圍上限往下10%的患者高濃度血清標(biāo)本，將患者低濃度血清（L）標(biāo)本與患者高濃度血清（H）標(biāo)本按比例關(guān)系倍比稀釋成下列血清濃度（5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H）。將各濃度血清樣本在Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上進行檢測，每個樣本重復(fù)測定3次，計算平均值。將預(yù)期值與實測值進行分析，采用Excel軟件，以預(yù)期濃度值為橫坐標(biāo)、實際測得的濃度值均值為縱坐標(biāo)做線性回歸圖，計算回歸方程y=ax+b及其相關(guān)系數(shù)r。判斷標(biāo)準(zhǔn)：相關(guān)系數(shù) r2≥0．95，回歸方程斜率 a 在 0．95～1．05 范圍內(nèi)則驗證通過。

1.3.3 檢出限驗證

將HBsAg和HBsAb的定值質(zhì)控品分別稀釋到試劑檢測范圍下限的濃度，HBsAg為0．05 IU/mL，HBsAb為2．0 mIU/mL，在不同批內(nèi)對該濃度樣本進行測定，每天檢測4次，連續(xù)檢測5 d，對得到的20次檢測結(jié)果計算和s以及批內(nèi)CV。判斷標(biāo)準(zhǔn)：CV＜10%為驗證通過。

1.3.4 功能靈敏度驗證

分別用雅培HBsAg和HBsAb的專用稀釋液將 HBsAg的 0．2 IU/mL濃度質(zhì)控品及 HBsAb的10 mIU/mL濃度質(zhì)控品按梯度倍比稀釋成5個濃度，要求最低濃度低于試劑線性范圍的下限值。每個濃度重復(fù)測試20次，計算、s以及CV值，選取CV值最接近20%的稀釋濃度作為功能靈敏度。

1.3.5 攜帶污染率驗證

從患者和體檢健康者血清中挑選HBsAg及HBsAb的極高濃度標(biāo)本（H）和低濃度標(biāo)本（L）各1份，分別將極高濃度及低濃度標(biāo)本混勻分成3份，按照極高濃度樣本H1、極高濃度樣本H2、極高濃度樣本H3、低濃度樣本L1、低濃度樣本L2、低濃度樣本L3的順序連續(xù)測定，收集實驗數(shù)據(jù)。極高濃度樣本由于超過試劑的線性范圍而采用稀釋推算法獲得，稀釋倍數(shù)就是推算換算的比例系數(shù)。最后按照公式攜帶污染率=（L1－L3）/（H3－L3）×100%計算攜帶污染率。判斷標(biāo)準(zhǔn)：攜帶污染率＜1．0%則驗證通過。

1.3.6 正確度驗證

使用Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測2021年度衛(wèi)生部臨床檢驗中心感染性血清學(xué)標(biāo)志物的室間質(zhì)評樣本來判定與其他實驗室檢測結(jié)果的一致性。

1.3.7 儀器比對驗證

分別選取40例新鮮血清標(biāo)本（其中陰性20例、陽性20例），用Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測HBsAg和HBsAb，再用Architect i2000化學(xué)發(fā)光分析儀進行測試，得出2組測定值。使用Excel軟件，以Architect i2000化學(xué)發(fā)光分析儀檢測的結(jié)果為橫坐標(biāo)、Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測的結(jié)果為縱坐標(biāo)做線性回歸圖，計算回歸方程y=ax+b及其相關(guān)系數(shù)r。判斷標(biāo)準(zhǔn)：相關(guān)系數(shù)r2≥0．95，回歸方程斜率a在 0．95～1．05 范圍內(nèi)則驗證驗證通過。

1.3.8 正常參考區(qū)間驗證

收集20份不同年齡段的體檢健康者的血清標(biāo)本，其中男、女各10份，排除HBsAb陽性標(biāo)本，使用Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀同步檢測HBsAg及HBsAb。判斷標(biāo)準(zhǔn)：95%的檢測結(jié)果在參考區(qū)間范圍內(nèi)為驗證通過。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗證結(jié)果

HBsAg低、高濃度的批內(nèi)精密度為3．76%和1．16%，批間精密度為 6．72%和 3．89%；HBsAb 低、高濃度的批內(nèi)精密度為3．81%和3．28%，批間精密度為 6．42%和 3．78%，驗證通過。詳見表1、2。

表2 HBsAb批內(nèi)、批間精密度驗證結(jié)果

2.2 線性范圍驗證結(jié)果

HBsAg 線性回歸方程為 y=0．9881x+3．9337，r2=0．9958；HBsAb 線性回歸方程為 y=1．0244x+11．7530，r2=0．9950，相關(guān)系數(shù)及回歸方程斜率均在驗證范圍內(nèi)（如圖1所示）。

圖1 HBsAg及HBsAb線性范圍回歸曲線

2.3 檢出限驗證結(jié)果

將HBsAg及HBsAb的定值質(zhì)控品稀釋到檢出限濃度后檢測的均值分別為0．0530 IU/mL及2．0755 mIU/mL，CV 分別為 8．87%和 7．89%，驗證通過。詳見表3。

表3 HBsAg及HBsAb的檢出限驗證結(jié)果

2.4 功能靈敏度驗證結(jié)果

根據(jù)檢測結(jié)果得出HBsAg為0．025 IU/mL以及HBsAb為0．625 mIU/mL時，該濃度的CV值是最接近20%的，即為功能靈敏度，且都低于試劑線性范圍的下限。詳見表4。

表4 HBsAg及HBsAb的功能靈敏度驗證結(jié)果

2.5 攜帶污染率驗證結(jié)果

通過公式計算，HBsAg及HBsAb的攜帶污染率皆為0，符合驗證要求。詳見表5。

表5 HBsAg及HBsAb的攜帶污染率驗證結(jié)果

2.6 正確度驗證結(jié)果

將2021年度衛(wèi)生部臨床檢驗中心感染性血清學(xué)標(biāo)志物室間質(zhì)評樣本用Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測，與室間質(zhì)評回報結(jié)果一致。詳見表6。

表6 HBsAg及HBsAb的正確度驗證結(jié)果

2.7 儀器比對驗證結(jié)果

Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀與Architect i2000化學(xué)發(fā)光分析儀檢測HBsAg結(jié)果的相關(guān)線性方程為 y=0．9568x-0．3306，r2=0．9982；HBsAb 線性方程為 y=1．0355x+0．1148，r2=0．9939。均驗證通過（如圖2所示）。

圖2 HBsAg及HBsAb儀器比對線性相關(guān)曲線

2.8 參考區(qū)間驗證結(jié)果

檢測的20例體檢健康者HBsAg均小于0．05 IU/mL，HBsAb 均小于 10 mIU/mL，皆在參考區(qū)間范圍之內(nèi)，驗證通過。

3 討論

隨著高新檢測技術(shù)、互聯(lián)網(wǎng)信息技術(shù)的快速發(fā)展，醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)獲得了巨大的發(fā)展機遇，而在現(xiàn)代“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)”的大背景下，傳染性疾病的精確診斷技術(shù)也在不斷增強[4]。雅培Architect i2000化學(xué)發(fā)光分析儀是臨床檢驗實驗室常用的檢測平臺，由于性能穩(wěn)定且測定準(zhǔn)確通常被用作其他品牌儀器的方法學(xué)比對儀器[5-6]。雅培Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀作為新一代的化學(xué)發(fā)光免疫分析儀延續(xù)了雅培Architect i2000化學(xué)發(fā)光分析儀高靈敏性和高特異性的微粒子化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)[5-7]，在檢測HBsAg時對于多基因型以及突變體的檢測能力具有明顯優(yōu)勢，能夠有效降低漏檢率[8]，因此雅培化學(xué)發(fā)光免疫分析儀一直是歐洲肝病學(xué)會（European Association for the Study of the Liver，EASL）、美國肝病學(xué)會（American Association for the Study of Liver Diseases，AASLD）以及亞太肝病學(xué)會（Asian Pacific Association for the Study of the Liver，APASL）指南明確提出并認(rèn)可的檢測儀器[9-11]。相比臨床檢驗實驗室常用的雅培Architect i2000化學(xué)發(fā)光分析儀，Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀整體占用空間更小，能夠在更小單位面積內(nèi)實現(xiàn)更多的測試量。該儀器可以最多4臺聯(lián)機集成，擴展性更強；具備多種流水線軌道選項，靈活性更高，更加適合實驗室的長期規(guī)劃；可加載試劑盤容量變大，試劑耗材能夠隨時加載并不間斷進行測試，更具高效性；試劑耗材能明顯通過顏色區(qū)分，一鍵急診功能則明顯縮短了急診樣本的周轉(zhuǎn)時間，更加方便了檢驗人員的日常操作；通過互聯(lián)網(wǎng)可將報警等信息直接發(fā)送到雅培診斷遠程中心，維修工程師可在線了解儀器情況，及時對儀器的狀態(tài)問題采取措施，更具人性化。

本研究主要對雅培Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀關(guān)于乙肝血清學(xué)指標(biāo)HBsAg及HBsAb的檢測性能進行驗證分析。結(jié)果顯示HBsAg及HBsAb高、低濃度的批間及批內(nèi)精密度均小于10%。在HBsAg及HBsAb線性回歸方程中，相關(guān)系數(shù)r2分別為0．9958和 0．9950，均大于 0．95，回歸方程斜率 a分別為 0．9881及 1．0244，在 0．95～1．05 的要求范圍內(nèi)。HBsAg 及HBsAb的定值質(zhì)控品稀釋到檢出限濃度后檢測的均值分別為 0．0530 IU/mL 及 2．0755 mIU/mL，CV 分別為 8．87%和 7．89%，均小于 10%，而 HBsAg及 HBsAb的功能靈敏度驗證濃度分別為0．025 IU/mL以及0．625 mIU/mL，均低于試劑線性范圍的下限，HBsAg與HBsAb的攜帶污染率均為0，驗證通過。將本年度衛(wèi)生部室間質(zhì)評的樣本用Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測驗證，檢測結(jié)果與質(zhì)評預(yù)期結(jié)果一致，而通過Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀與Architect i2000化學(xué)發(fā)光分析儀比對檢測的HBsAg及HBsAb的線性回歸方程可以得出相關(guān)系數(shù)r2分別為0．9982及0．9939，回歸方程斜率 a 分別為 0．9568 及 1．0355，均符合驗證要求。在健康人群參考區(qū)間的驗證中，HBsAg及HBsAb的結(jié)果100%落在正常參考范圍內(nèi)。因此，Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀能夠完全滿足臨床對乙肝血清標(biāo)志物HBsAg和HBsAb的檢測需求。

綜上所述，雅培Alinity i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀定量檢測HBsAg及HBsAb的穩(wěn)定性、重復(fù)性和精確性是完全符合臨床應(yīng)用要求的，同時相對于Architect i2000化學(xué)發(fā)光分析儀更具擴展性、靈活性及高效性，可以顯著提高實驗室的工作效率。