趙曉蕾

（中國(guó)人民大學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)院，北京 100022）

鎂是人體內(nèi)含量豐富的元素之一，主要存在于骨骼肌和細(xì)胞內(nèi)，血液中60%的鎂是游離狀態(tài)的，游離狀態(tài)的鎂離子具有生理活性，30%的鎂離子與蛋白質(zhì)結(jié)合，其他剩余10%的鎂離子與磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他物質(zhì)結(jié)合，結(jié)合鎂不能發(fā)揮生理活性。游離狀態(tài)的鎂離子在人體中參與多種多樣的生理代謝過(guò)程，許多疾病可以引起鎂代謝異常。鎂的主要作用為參與多種酶的活性調(diào)節(jié)，影響神經(jīng)沖動(dòng)的傳遞和維持肌肉應(yīng)激性，鎂濃度下降，使神經(jīng)肌肉興奮性升高，鎂濃度過(guò)高可發(fā)生中毒癥狀。鎂測(cè)定就是對(duì)鎂離子的測(cè)定。其中鎂離子又分為血清鎂和尿鎂。

鎂離子在人體內(nèi)參與調(diào)節(jié)血管張力和神經(jīng)肌肉興奮性，調(diào)節(jié)各種離子的通道，是各種離子通道的調(diào)節(jié)劑，鈉、鉀泵和鈣泵的離子轉(zhuǎn)運(yùn)活動(dòng)都會(huì)依賴于鎂離子的參與，鎂和鈣離子之間有互相拮抗的作用。在健康婦女與正常妊娠早、中期相比較，其血漿總鎂、游離鎂濃度接近，差異無(wú)顯著性，但是妊娠晚期的血漿總鎂降低。另外子癇前期治療前血漿總鎂濃度含量及游離鎂濃度含量與晚孕組差異無(wú)顯著性，但在實(shí)施硫酸鎂治療后，濃度水平明顯增高。在子癇期，紅細(xì)胞內(nèi)存在鎂缺乏，鈣離子從血漿到紅細(xì)胞內(nèi)，造成紅細(xì)胞內(nèi)鈣離子堆積，血漿鈣離子下降，從而可使平滑肌反應(yīng)性增強(qiáng)，進(jìn)而激活平滑肌內(nèi)肌凝蛋白和肌纖蛋白，產(chǎn)生收縮反應(yīng)，其嚴(yán)重者可能會(huì)出現(xiàn)抽搐、昏迷和心腎功能衰竭，甚至可能發(fā)生母嬰死亡，而硫酸鎂可緩解高血壓、驚厥等癥狀，在預(yù)防和控制子癇發(fā)作，經(jīng)過(guò)硫酸鎂治療后，血漿總鎂濃度及游離鎂濃度顯著上升，體內(nèi)補(bǔ)充可利用鎂離子，使鎂離子所參與的各項(xiàng)生理代謝恢復(fù)正常，鈣離子在細(xì)胞內(nèi)外的紊亂得以糾正。除此之外，產(chǎn)科其他的疾病，例如先兆流產(chǎn)、妊娠膽汁淤積等，也都會(huì)使用硫酸鎂抑制宮縮、保胎，所以，血漿總鎂及游離鎂的檢測(cè)在產(chǎn)科疾病治療中具重要臨床意義，對(duì)硫酸鎂輸注濃度、輸注速度控制，治療效果觀察都具有監(jiān)測(cè)意義。

鑒于血漿中鎂離子含量檢測(cè)在臨床診斷中的重要意義。體外診斷試劑的領(lǐng)域中，已有多家企業(yè)的產(chǎn)品獲得國(guó)家藥品監(jiān)督管理局上市批件并進(jìn)行銷售。如：鎂檢測(cè)試劑盒（二甲苯胺藍(lán)法）、鎂檢測(cè)試劑盒（比色法）、鎂檢測(cè)試劑（時(shí)間終點(diǎn)法）、鎂檢測(cè)試劑盒（偶氮胂Ⅲ法）、鎂檢測(cè)試劑盒（偶氮胂I 法）等。其中二甲苯胺藍(lán)法的檢測(cè)原理是在堿性溶液中，鎂會(huì)與二甲苯胺藍(lán)形成重氮鹽類的紫色復(fù)合物，鎂離子濃度可由二甲苯胺藍(lán)吸光度的下降，通過(guò)用光度測(cè)定法來(lái)測(cè)定。

針對(duì)目前臨床應(yīng)用的產(chǎn)品在檢驗(yàn)原理和生產(chǎn)廠家等各種方面的選擇越來(lái)越多，現(xiàn)在為了選出更優(yōu)的，更適合臨床應(yīng)用的產(chǎn)品，現(xiàn)對(duì)市面在售的多種產(chǎn)品中隨機(jī)選擇了兩個(gè)產(chǎn)品試劑A 和試劑B 進(jìn)行對(duì)同一樣本的檢測(cè)比對(duì)研究，同時(shí)為了進(jìn)一步驗(yàn)證灰區(qū)樣本的檢測(cè)靈敏度，我們還選擇了一個(gè)應(yīng)用最為廣泛的試劑C 作為第三方試劑，對(duì)檢測(cè)不一致的樣本進(jìn)行復(fù)核，同時(shí)結(jié)合臨床診斷進(jìn)一步判定灰區(qū)樣本的檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)而判斷兩種試劑的檢測(cè)的靈敏度。

在此次比對(duì)研究的實(shí)驗(yàn)中，我們計(jì)劃選取100 例血清樣本，進(jìn)行檢測(cè)并統(tǒng)計(jì)比較，樣本的檢測(cè)結(jié)果需要涵蓋檢測(cè)水平正常樣本及異常樣本，且樣本測(cè)量值需要覆蓋較大的檢測(cè)范圍。

雖然此次的研究?jī)H僅是為了挑選更加合適的臨床檢測(cè)用試劑，但是對(duì)于樣本的使用仍需要符合《赫爾辛基》的倫理原則，任何公開的文件中將不會(huì)透露任何病人的相關(guān)信息，不會(huì)對(duì)病人造成隱私的泄露。因?yàn)榇舜螌?shí)驗(yàn)僅僅是使用臨床常規(guī)檢測(cè)的剩余樣本，所以不會(huì)與人體有直接接觸，預(yù)期不會(huì)產(chǎn)生任何不良事件。同時(shí)會(huì)采取最嚴(yán)格的措施來(lái)保護(hù)樣本信息。而且為了更加客觀底檢測(cè)并評(píng)價(jià)分析檢測(cè)結(jié)果，此次實(shí)驗(yàn)我們將采用盲法，即檢測(cè)人員將無(wú)法得知實(shí)驗(yàn)用樣本的任何信息。樣本收集由人員1 來(lái)完成，樣本收集完成后，由人員1 對(duì)樣本進(jìn)行去標(biāo)識(shí)并重新編號(hào)，編號(hào)順序?yàn)锳001-A100。人員1 將編號(hào)完成的樣本送至人員2 手中，由人員2 完成所有的檢測(cè)工作，并將數(shù)據(jù)完整地反饋給人員1.最終由人員1 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并分析。統(tǒng)計(jì)完成后再由人員1 和人員2 同時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行討論。

此次實(shí)驗(yàn)樣本入選的標(biāo)準(zhǔn)為臨床剩余樣本；樣本的采集和處理符合標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室操作以及產(chǎn)品說(shuō)明書的要求；樣本的相關(guān)信息完整，包括年齡，性別，唯一且可追溯的編號(hào)，臨床診斷等。排除標(biāo)準(zhǔn)為嚴(yán)重溶血、混濁的樣本；不符合樣本采集和處理要求的樣本；樣本收集時(shí)間或病例信息不明確。剔除標(biāo)準(zhǔn)為儀器或人為因素（包括樣本處理、檢測(cè)操作可能出現(xiàn)的干擾或錯(cuò)誤）導(dǎo)致無(wú)法確認(rèn)待評(píng)價(jià)試劑與對(duì)比試劑結(jié)果差異的樣本；測(cè)定結(jié)果缺失待試劑A（或試劑B）的檢測(cè)數(shù)據(jù)的樣本；檢測(cè)結(jié)果超出試劑線性范圍的樣本。在測(cè)定過(guò)程中，對(duì)樣本分別用試劑A 和試劑B 進(jìn)行測(cè)定，分別記錄測(cè)量值，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行如下分析。定量分析：根據(jù)試劑A的測(cè)定結(jié)果與試劑B的測(cè)定結(jié)果，求出線性回歸方程，計(jì)算樣本濃度范圍、相關(guān)系數(shù)（r）及常數(shù)的95%置信區(qū)間。定性分析：根據(jù)試劑A 及試劑B 說(shuō)明書的各自規(guī)定，檢測(cè)結(jié)果在各自參考值范圍內(nèi)的，判斷為陰性；檢測(cè)結(jié)果在各自參考值范圍外的，判斷為陽(yáng)性。如試劑A 和試劑B的定性分析不符，則用試劑C 作為第三方檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)并判定。以試劑A 檢出結(jié)果作為參照，計(jì)算試劑B的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率和研究試劑和對(duì)比試劑的一致性kappa 值。陽(yáng)性符合率：受試試劑陽(yáng)性樣本占對(duì)比試劑陽(yáng)性樣本的比例。陰性符合率：受試試劑陰性樣本占對(duì)比試劑陰性樣本的比例。總體符合率：檢出結(jié)果一致的樣本占總樣本的比例。kappa 值：受試試劑和對(duì)比試劑的一致性。重點(diǎn)關(guān)注灰區(qū)樣本的檢測(cè)與判讀。

本次入組的樣本臨床診斷多為腎病綜合征；低鉀血癥、慢性腎功能不全、高鈣血癥、甲狀腺功能減退；低鎂血癥、慢性腎功能衰竭等。根據(jù)此次試劑A 和試劑B 對(duì)入組的100 例樣本的檢測(cè)，其中A071 號(hào)樣本對(duì)試劑A 和試劑B 均超出檢測(cè)下限，所以在最終統(tǒng)計(jì)中需剔除此樣本的檢測(cè)結(jié)果。因此最終對(duì)99 例樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定量及定性的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下。

定量統(tǒng)計(jì)：樣本數(shù)量99 例，Y 截距－0.071，相關(guān)系數(shù)0.9856，斜率1.0187，樣本濃度范圍0.85mg/dL-4.11mg/dL。設(shè)試劑B 測(cè)定結(jié)果為X，試劑A 測(cè)定結(jié)果為Y，經(jīng)計(jì)算，N=99 次，r=0.9856，P=0.000（P<0.001），根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理，兩組數(shù)據(jù)高度相關(guān)。一元線性回歸方程為：y=1.0187x -0.0710，F(xiàn) 值為3304.6961，系數(shù)95%至今區(qū)間為0.9835～1.0539，截距95%置信區(qū)間為－0.1501～0.0081，p<0.05，線性回歸方程具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明試劑A 和試劑B 對(duì)同一樣本的檢測(cè)結(jié)果具有很好的相關(guān)性。

定性結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析：根據(jù)試劑A 及試劑B 說(shuō)明書的各自規(guī)定，試劑A 檢測(cè)結(jié)果1.6mg/dL-2.6mg/dL 為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。試劑B 檢測(cè)結(jié)果1.6mg/dL-2.4mg/dL的為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。試劑C 檢測(cè)結(jié)果1.6mg/dL-2.4mg/dL 為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。本次試驗(yàn)共檢測(cè)100 例樣本，對(duì)這100 例有效樣本進(jìn)行定性分析（其中在定量分析時(shí)，剔除的A071 號(hào)樣本（原因：試劑A 和試劑B 檢測(cè)結(jié)果均超出線性下限），有定性意義，故在本次定性分析時(shí)無(wú)需剔除）結(jié)果如下。以試劑A 檢出結(jié)果作為參照，計(jì)算試劑B的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率和試劑A 和試劑B的一致性kappa 值。陽(yáng)性符合率：92.59%（95%可置信區(qū)間：81.11%～97.95%），陰性符合率：95.56%（95%可置信區(qū)間：84.85%～99.46%），總符合率：93.94%（95%可置信區(qū)間：87.27%～97.94%），Kappa值＝0.8782（95%可置信區(qū)間：0.7839～0.9726）。

陰陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本信息如下：樣本1：性別男，年齡32 歲，慢性腎功能不全；高血壓；腎性骨病；冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟??；反流性食管炎；急性膽囊炎，試劑A檢測(cè)結(jié)果2.76mg/dL，試劑B檢測(cè)結(jié)果2.60mg/dL，試劑C 檢測(cè)結(jié)果2.61 mg/dL；樣本2：性別女，年齡30 歲，臨床診斷為宮內(nèi)晚孕；慢性高血壓合并子癇前期；剖宮產(chǎn)史；多次人流史；中期引產(chǎn)史；急性左心衰，試劑A 檢測(cè)結(jié)果2.72mg/dL，試劑B 檢測(cè)結(jié)果2.60mg/dL，試劑C 檢測(cè)結(jié)果2.59 mg/dL；樣本3：性別女，年齡25 歲，臨床診斷為慢性腎功能衰竭，試劑A 檢測(cè)結(jié)果2.67mg/dL，試劑B 檢測(cè)結(jié)果2.46mg/dL，試劑C 檢測(cè)結(jié)果2.51 mg/dL；樣本4：性別男，年齡33 歲，臨床診斷特發(fā)性甲狀旁腺機(jī)能減退，試劑A 檢測(cè)結(jié)果1.70mg/dL，試劑B 檢測(cè)結(jié)果1.56mg/dL，試劑C 檢測(cè)結(jié)果1.52 mg/dL；樣本5：性別女，年齡33 歲，臨床診斷為甲狀腺功能亢進(jìn)；粒細(xì)胞減少，試劑A 檢測(cè)結(jié)果1.64mg/dL，試劑B 檢測(cè)結(jié)果1.53mg/dL，試劑C 檢測(cè)結(jié)果1.52 mg/dL；樣本6：性別男，年齡46 歲，臨床診斷為手術(shù)后甲狀腺機(jī)能減退；繼發(fā)性甲狀旁腺機(jī)能減退，試劑A 檢測(cè)結(jié)果1.64mg/dL，試劑B 檢測(cè)結(jié)果1.55mg/dL，試劑C 檢測(cè)結(jié)果1.54mg/dL。其中樣本1、2、4、5、6的檢測(cè)結(jié)果雖然陰陽(yáng)性判定不一致，但是接測(cè)結(jié)果基本都在參考值附近的灰區(qū)樣本，結(jié)合試劑C的檢測(cè)結(jié)果和臨床診斷，可推斷，檢測(cè)結(jié)果陰陽(yáng)行不符的原因很可能是樣本以及檢測(cè)系統(tǒng)本身的誤差所導(dǎo)致，不影響試劑在臨床中的應(yīng)用。但是樣本3的試劑A和試劑B的檢測(cè)結(jié)果相差很大，但是結(jié)合試劑C的檢測(cè)結(jié)果，可推斷，試劑B 檢測(cè)過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此數(shù)據(jù)在此次分析中屬于離群值，在進(jìn)行最終結(jié)果判斷時(shí)建議剔除。

針對(duì)此次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析可發(fā)此次所選的任意三種已上市的試劑，三種試劑對(duì)于同一樣本的測(cè)值有可能會(huì)存在一定差異，但是這種差異對(duì)于臨床診斷的判別影響不大，因?yàn)榕R床醫(yī)生不會(huì)僅僅根據(jù)臨床的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行病人診斷，病人診斷的確定是根據(jù)病人針對(duì)性的檢查與臨床觀察和病人描述等多種因素綜合診斷得出。因此此次實(shí)驗(yàn)無(wú)法判定試劑A 和試劑B的優(yōu)劣性。任意一種試劑均可作為臨床診斷的輔助試劑。