王文峰，司會強，方妹輝

（珠海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院消化內(nèi)科，珠海 519000）

腸易激綜合征（IBS）是一種反復(fù)發(fā)作的功能性腸病，以腹脹、腹痛、大便習(xí)慣改變?yōu)橹饕Y狀[1]。其中約有3.7%～36%的IBS患者既往有急性感染性胃腸炎病史，這種在腸道感染后形成的IBS即感染后腸易激綜合征（PI-IBS）[2]。目前研究表明，PI-IBS的發(fā)生發(fā)展與腸道免疫功能異常、腸道通透性改變及腸黏膜低度炎癥密切相關(guān)[3]。腸道感染所引起的腸黏膜免疫功能異常在PI-IBS發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，以輔助性T細胞（Th1）型細胞因子占優(yōu)勢的免疫失衡還可引起腸黏膜緊密連接蛋白下調(diào)，導(dǎo)致細胞間通透性增加，加重腸黏膜損傷[4]。PI-IBS可歸屬于中醫(yī)“腹痛”“瀉泄”等范疇，臨床以肝郁脾虛證型最為常見，治療以抑肝扶脾、祛濕止瀉為原則，多用四君子湯合痛瀉要方加減[5]。然而，目前PI-IBS的動物模型多以感染細菌、寄生蟲進行誘導(dǎo)，中醫(yī)病證結(jié)合動物模型尚缺乏統(tǒng)一的建立標準。本實驗在旋毛蟲感染NIH小鼠的基礎(chǔ)上，采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)的復(fù)合方法復(fù)制小鼠PIIBS肝郁脾虛證模型，應(yīng)用四君子湯合痛瀉要方灌胃治療，觀察其在PI-IBS肝郁脾虛證小鼠急性及慢性感染期中的治療作用，并探討其通過調(diào)節(jié)腸道細胞免疫平衡，保護腸黏膜屏障功能而發(fā)揮作用的可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 NIH小鼠50只，雄性，SPF級，體質(zhì)量18～22 g，飼養(yǎng)于清潔級實驗動物房中，室內(nèi)保持12 h光照與黑暗交替。

1.2 實驗藥物及試劑 旋毛蟲活體幼蟲購自蘭州獸醫(yī)研究所；四君子湯合痛瀉要方組成為黨參15 g，茯苓 15 g，白術(shù) 15 g，陳皮 10 g，防風(fēng) 15 g，白芍15 g，枳殼10 g，炙甘草5 g。參照《中藥藥理實驗方法學(xué)》換算小鼠灌胃等效劑量為13 g/kg。臨用前生理鹽水稀釋至終濃度為1.3 g/mL，按0.01 mL/g灌胃給藥。干擾素（IFN-γ）、白介素-10（IL-10）、白介素-17（IL-17）小鼠酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）試劑盒購自北京市福瑞生物工程公司；閉合蛋白（occludin）、緊密粘連蛋白-1（ZO-1）一抗購自Santa Cruz公司；總RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自TaKaRa公司。

1.3 模型建立 參考肝郁證模型的慢性束縛應(yīng)激法和脾虛證模型的過度勞累加饑飽失常法[6-7]，采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)方法建立NIH小鼠肝郁脾虛證模型：實驗前全部小鼠進行預(yù)游泳，剔除游泳時間少于10 min或大于20 min的小鼠，將合格的造模小鼠每日上午8∶00放置于束縛盒中3 h限制活動，每日下午2∶00放置于盛水塑料桶[水溫（22±1）℃]中游泳 10 min。隔日喂食，連續(xù)3周，觀察1周。旋毛蟲感染制備PI-IBS模型：于實驗第5周應(yīng)用旋毛蟲感染小鼠，每只小鼠灌胃含400～500個旋毛蟲幼蟲的0.9%生理鹽水0.2 mL，感染后2周為急性感染期，感染8周后為PI-IBS期，腸道無明顯炎癥，內(nèi)臟敏感性明顯增高為造模成功。

1.4 分組與給藥 將NIH小鼠隨機分為空白組、感染2周組、感染8周組、2周治療組、8周治療組，共5組，每組10只。除空白組外，其余各組小鼠采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)+旋毛蟲感染建立PI-IBS肝郁脾虛證模型，感染2周組、感染8周組除造模外不予其他干預(yù)，以感染后2周、8周為時間點處死小鼠用作實驗；2周治療組于感染2周后給予四君子湯合痛瀉要方灌胃治療6周；8周治療組于感染8周后給予四君子湯合痛瀉要方灌胃治療6周；空白組正常飼養(yǎng)，不做任何處理。

2 觀察指標

2.1 一般狀況及臨床表征觀察 參考肝郁脾虛證實驗動物模型相關(guān)特點[8]觀察并記錄小鼠主要表現(xiàn)：毛發(fā)疏松，毛色枯焦無光，乏力，倦怠，喜扎堆，弓背等一般狀態(tài)改變；伴隨情緒不穩(wěn)，灌胃抵抗，易怒，興奮程度減低，飲食飲水量減少，大便不成形，便質(zhì)稀溏等變化。

2.2 內(nèi)臟敏感性檢測 小鼠實驗前禁食不禁水24h，經(jīng)乙醚麻醉后，將帶氣囊的導(dǎo)管經(jīng)小鼠肛門插入約2 cm，待小鼠適應(yīng)30 min后開始檢測。向氣囊內(nèi)隨機注入空氣，達到目標容量后持續(xù)20 s，觀察腹壁回撤反應(yīng)（AWR）并進行評分，每一容量下重復(fù)3次，取平均值。由0.25 mL開始，隨后每隔5 min分別遞增至0.35、0.5、0.65 mL。AWR評分標準：擴張時無反應(yīng)者記為0分；擴張時出現(xiàn)輕微頭部運動，而身體無反應(yīng)者記為1分；擴張時腹部肌肉收縮而未抬離桌面者記為2分；擴張時腹部肌肉收縮且抬離桌面者記為3分；擴張時身體呈弓形，骨盆抬起者記為4分。

2.3 糞便含水百分數(shù)檢測 連續(xù)收集各組小鼠8 h糞便，稱取每只小鼠每隔2 h的糞便質(zhì)量，隨后將糞便置于65℃烘箱中過夜干燥，再次稱量糞便干質(zhì)量，計算小鼠糞便含水百分數(shù)。

2.4 腸道組織病理學(xué)觀察 各組小鼠摘眼球取血并處死，解剖后取部分末端回腸、近端結(jié)腸組織，生理鹽水沖洗去除腸內(nèi)容物，于4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋，切片機5 μm切片后進行蘇木精-伊紅（HE）染色，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)腸組織病理形態(tài)改變，并對各組小鼠進行組織病理學(xué)評分。評分標準：固有層未見中性粒細胞浸潤，間質(zhì)無明顯水腫為正常，記為0分；固有層僅見少量中性粒細胞浸潤，間質(zhì)輕度水腫為輕度，記為1分；固有層可見中等量的中性粒細胞浸潤，間質(zhì)呈中度水腫為中度，記為2分；固有層及整個黏膜層可見大量中性粒細胞浸潤，間質(zhì)重度水腫或壞死為重度，記為3分。

2.5 血清細胞因子含量檢測 采用ELISA法檢測小鼠血清中IL-10、IFN-γ、IL-17細胞因子水平。各組小鼠眼球取血，3 000 r/min，離心15 min，離心半徑8 cm，分離血清，設(shè)置空白孔、標準孔和樣本孔，標準品孔按標準品不同濃度各加入50 μL；樣品孔加入血清樣品 10 μL，樣品稀釋液 40 μL，空白孔不加；標準孔和樣本孔各加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗體100 μL，空白孔不加，封板膜封住反應(yīng)孔后，置于37℃恒溫箱中孵育1 h；棄去液體，洗板6次，每次 1 min，每孔加入顯色液 A、B 各 50 μL，37℃避光孵育15 min，加入終止液50 μL，于酶標儀450 nm下檢測各反應(yīng)孔OD值，做標準曲線，計算各樣本IL-10、IFN-γ、IL-17 含量。

2.6 腸道組織中IL-10、IFN-γ、IL-17的mRNA表達檢測 取各組小鼠結(jié)腸組織，采用Trizol法提取組織總RNA，紫外分光光度儀測定總RNA濃度并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再進行PCR擴增，以β-actin為內(nèi)參。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min 1個循環(huán)，95℃變性10 s，退火溫度60℃30 s，擴增40個循環(huán)，最后72 ℃延伸 7 min，56 ℃ 30 s。結(jié)果以 2-ΔΔCt法分析 IL-10、IFN-γ、IL-17的相對 mRNA 表達量。

表1 各基因引物序列Tab.1 Primer sequence of each gene

2.7 腸道組織中occludin、ZO-1的蛋白表達檢測 取各組小鼠結(jié)腸組織，勻漿后加入RIPA裂解液提取總蛋白，BCA法測定蛋白濃度。加入10 μL蛋白樣品，電泳分離，冰上轉(zhuǎn)膜，室溫封閉2 h，occludin、ZO-1一抗4℃孵育過夜，二抗室溫孵育2 h，滴加顯影液，凝膠成像并拍照后用Image J軟件進行定量分析。

2.8 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件進行分析，數(shù)據(jù)以均值±標準差（±s）表示，多組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析比較，組間兩兩比較采用LSD檢測。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 一般狀況及臨床表征變化 空白組小鼠精神狀態(tài)正常，動作靈活，毛色光澤，不喜扎堆，進食及飲水量正常，二便正常，糞便呈球形，干濕適中。感染2周組小鼠出現(xiàn)易怒表現(xiàn)，灌胃時劇烈抵抗，毛發(fā)豎立，少動喜聚集，飲食及飲水量減少，大便稀溏不成形。感染8周后小鼠情緒逐漸轉(zhuǎn)為低落，毛發(fā)枯亂無光，喜聚集，大便質(zhì)地稀溏，較感染2周時稍干。2周治療組、8周治療組小鼠精神狀態(tài)及大便形態(tài)較治療前均有明顯改善，小鼠毛發(fā)整齊，恢復(fù)光澤，時喜扎堆，飲食及飲水量較前增多，大便呈球型。

3.2 各組小鼠AWR評分比較 各組小鼠的AWR評分均隨著氣囊內(nèi)空氣體積的增加而增高。當注入空氣體積為0.35 mL和0.5 mL時，感染后2周及感染后8周組小鼠AWR評分較空白組顯著升高（P＜0.05），2周治療組、8周治療組小鼠評分明顯低于感染后2周及感染后8周組（P＜0.05）。注入空氣體積為0.25 mL和0.65 mL時，各組小鼠AWR評分無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。見表 2。

表2 各組小鼠AWR評分比較（±s）Tab.2 Comparison of AWR scores of mice in each group（±s） 分

表2 各組小鼠AWR評分比較（±s）Tab.2 Comparison of AWR scores of mice in each group（±s） 分

注：與空白組比較，*P＜0.05；與感染 2 周組比較，#P＜0.05；與感染 8 周組比較，△P＜0.05。

組別 動物數(shù) 空氣體積0.25 mL 0.35 mL 0.5 mL 0.65 mL空白組 10 0.36±0.24 1.15±0.39 2.31±0.44 3.74±0.60感染 2周組 10 0.57±0.29 2.63±0.41* 3.87±0.69*3.88±0.54感染 8 周組 10 0.54±0.32 2.40±0.53* 3.65±0.52*3.72±0.49 2 周治療組 10 0.52±0.45 1.78±0.46# 2.78±0.40#3.75±0.62 8 周治療組 10 0.43±0.37 1.52±0.38△ 2.53±0.63△ 3.71±0.35

3.3 各組小鼠糞便含水百分數(shù)比較 與空白組相比，感染2周組及感染8周組小鼠每2 h糞便含水百分數(shù)均顯著增高（P＜0.05），2周治療組小鼠每2 h糞便含水百分數(shù)較感染后2周組明顯降低，8周治療組每2 h糞便含水百分數(shù)較感染后8周組明顯降低（P＜0.05）。見表 3。

表3 各組小鼠糞便含水百分數(shù)比較（±s）Tab.3 Comparison of water content in feces of mice in each group（±s）%

表3 各組小鼠糞便含水百分數(shù)比較（±s）Tab.3 Comparison of water content in feces of mice in each group（±s）%

注：與空白組比較，*P＜0.05；與感染 2 周組比較，#P＜0.05；與感染 8 周組比較，△P＜0.05。

組別 動物數(shù) 2 h 4 h 6 h 8 h空白組 10 30.76±6.71 33.94±8.32 38.16±7.24 40.25±8.04感染 2 周組 10 55.28±5.87* 62.47±6.19* 67.38±9.71* 73.94±8.69*感染 8 周組 10 42.04±7.45* 48.65±6.70* 54.82±7.48* 58.81±7.26*2 周治療組 10 43.74±7.72# 49.60±6.93# 53.17±8.24# 60.58±6.07#8周治療組 10 34.05±5.87△ 37.93±7.41△ 43.42±6.55△ 47.38±8.59△

3.4 各組小鼠腸道組織病理學(xué)變化 見圖1。HE染色結(jié)果可見，空白組小鼠回腸、結(jié)腸黏膜各層結(jié)構(gòu)完整，黏膜下未見炎細胞浸潤。感染2周組小鼠回腸、結(jié)腸組織染色顯示明顯炎癥性改變，可見黏膜結(jié)構(gòu)嚴重受損，黏膜及黏膜下層明顯充血、水腫及炎性細胞浸潤，組織病理學(xué)評分明顯高于空白組（P＜0.05）。而感染8周組小鼠回腸、結(jié)腸組織未見明顯炎性損傷及炎癥細胞浸潤，病理學(xué)評分與空白組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。經(jīng)2周治療組灌胃治療后，小鼠回腸、結(jié)腸組織損傷明顯減輕，黏膜結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)，炎性細胞浸潤較感染2周組顯著減少，病理學(xué)評分明顯低于感染2周組（P＜0.05）。感染8周組小鼠回腸、結(jié)腸組織未見明顯炎性損傷，病理學(xué)評分與空白組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

圖1 各組小鼠腸組織病理改變（HE染色，×200）Fig.1 Pathological changes of intestinal tissue in mice of each group（HE staining，×200）

3.5 各組小鼠血清中IL-10、IFN-γ、IL-17細胞因子含量比較 與空白組比較，感染2周組、感染8周組小鼠血清中IFN-γ及IL-17的含量均顯著升高，IL-10的含量顯著降低（P＜0.05）。2周治療組、8周治療組小鼠血清中IFN-γ、IL-17水平明顯低于感染后 2周及感染后 8周組（P＜0.05），IL-10水平較感染后2周及感染后8周組明顯升高（P＜0.05）。見表4。

表4 各組小鼠血清中IL-10、IFN-γ、IL-17含量比較（±s）Tab.4 Comparison of IL-10，IFN-γ and IL-17 in serum of mice in each group（±s）ng/mL

表4 各組小鼠血清中IL-10、IFN-γ、IL-17含量比較（±s）Tab.4 Comparison of IL-10，IFN-γ and IL-17 in serum of mice in each group（±s）ng/mL

注：與空白組比較，*P＜0.05；與感染 2 周組比較，#P＜0.05；與感染8 周組比較，△P＜0.05。

組別 動物數(shù) IL-10 IFN-γ IL-17空白組 10 25.34±6.07 19.38±4.15 9.58±2.64感染 2 周組 10 11.21±4.92* 45.86±7.46* 24.87±6.90*感染 8 周組 10 15.46±7.94* 38.59±6.05* 18.83±8.47*2 周治療組 10 18.39±7.05# 30.19±8.65# 16.09±5.71#8 周治療組 10 20.75±5.26△ 25.63±6.94△ 12.55±4.86△

3.6 腸道組織中IL-10、IFN-γ、IL-17的mRNA表達 與空白組相比，感染2周組、感染8周組小鼠結(jié)腸組織中IFN-γ及IL-17的mRNA表達顯著增加，IL-10的mRNA表達顯著減少（P＜0.05）。2周治療組、8周治療組IFN-γ及IL-17的mRNA表達較感染后 2周及感染后 8周組明顯減少（P＜0.05），IL-10的 mRNA 表達明顯上調(diào)（P＜0.05）。見表 5。

表5 各組小鼠結(jié)腸組織中IL-10、IFN-γ、IL-17 mRNA比較（±s）Tab.5 Comparison of IL-10，IFN-γ and IL-17 mRNA in colon tissue of mice in each group（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與感染 2 周組比較，#P＜0.05；與感染 8 周組比較，△P＜0.05。

組別 動物數(shù) IL-10 IFN-γ IL-17空白組 10 1.01±0.01 1.01±0.01 1.01±0.01感染 2 周組 10 0.25±0.13* 3.33±0.51* 3.26±0.47*感染 8 周組 10 0.38±0.42* 2.99±0.36* 2.53±0.30*2 周治療組 10 0.49±0.24# 1.71±0.28# 1.89±0.23#8周治療組 10 0.62±0.17△ 0.31±0.25△ 1.42±0.15△

3.7 各組小鼠腸道組織中occludin、ZO-1的蛋白表達情況比較 感染后2周組小鼠結(jié)腸組織中occludin、ZO-1的蛋白表達較空白組顯著降低（P＜0.05），至感染8周后表達有所增強，但仍顯著低于空白組（P＜0.05）。2 周治療組、8 周治療組 occludin、ZO-1的蛋白表達較感染2周及感染8周組顯著增多（P＜0.05）。見圖 2。

圖2 各組小鼠結(jié)腸組織中occludin、ZO-1的蛋白表達情況Fig.2 Protein expression of occludin and ZO-1 in mouse colon

4 討論

PI-IBS?？梢娔c道免疫功能異常，炎性細胞因子分泌增多，腸黏膜低度炎癥等病理改變。研究表明[9-10]，PI-IBS患者腸黏膜處于免疫激活狀態(tài)，黏膜內(nèi)T淋巴細胞及炎性細胞因子分泌增多，這些炎性因子的過度分泌能夠刺激腸道神經(jīng)系統(tǒng)，引起內(nèi)臟高敏感性，繼而導(dǎo)致腹痛及大便習(xí)慣的改變。促炎和抗炎細胞因子的平衡失調(diào)能夠影響腸道生理和免疫功能，從而導(dǎo)致PI-IBS癥狀出現(xiàn)。如輔助性T細胞亞群Th1釋放IFN-γ等促炎細胞因子以促進炎癥反應(yīng)，IFN-γ的過度升高可破壞腸上皮細胞，使黏膜屏障功能受損，腸道緊密連接通透性增加[11-12]。Th2細胞表達IL-10等抑炎因子以調(diào)節(jié)自身免疫，防止過度炎癥反應(yīng)，IL-10的減少能夠引起促炎和抗炎機制的平衡失調(diào)，導(dǎo)致腸道慢性炎癥[13]。而由Th17細胞所分泌的IL-17能夠誘導(dǎo)自身免疫，IL-17與IFN-γ還能發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，促進腸道黏膜炎癥反應(yīng)[14]。腸上皮間的緊密連接蛋白在保護腸黏膜屏障功能，調(diào)節(jié)腸道通透性中起著關(guān)鍵作用[15]。研究表明[4]，腸道感染所引起的以Th1型細胞占主導(dǎo)的免疫失衡可能引起腸黏膜緊密連接蛋白的表達下調(diào)，導(dǎo)致細胞緊密連接結(jié)構(gòu)受損，細胞間通透性增加，加重腸黏膜損傷。Occludin具有細胞旁屏障功能，能夠封閉細胞間隙，形成細胞間緊密連接的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)。ZO-1被看作緊密連接的橋梁蛋白，有連接跨膜蛋白和細胞骨架蛋白的作用。其表達水平的變化可作為觀察黏膜屏障功能與細胞通透性的指標[16-17]。

PI-IBS可歸屬于中醫(yī)“腹痛”“瀉泄”等范疇，其病位在腸，脾虛濕困為病機關(guān)鍵，同時與肝、腎等臟腑功能失調(diào)密切相關(guān)。肝郁脾虛證為PI-IBS最常見的臨床證型，可占50%以上[5]。多因飲食不節(jié)、七情內(nèi)傷等導(dǎo)致氣機不利，肝郁氣滯，肝氣橫逆侮脾，脾胃受損，升降失職，致小腸清濁不分，水谷相雜并走大腸而成泄瀉。治療以抑肝扶脾、祛濕止瀉為原則，有效方劑多用四君子湯合痛瀉要方加減[18]。方中黨參甘溫入脾，健脾益胃，白術(shù)苦溫，健脾同時亦可燥濕，共為君藥；白芍酸甘而微寒，既可養(yǎng)陰柔肝，合甘草又有緩急止痛之效，為臣藥；茯苓滲濕補脾，促脾之運化，陳皮、枳殼疏肝理氣，使補而不滯，共為佐藥；防風(fēng)有升發(fā)之性，合陳皮能散肝郁而舒脾氣，為佐使藥；使以炙甘草甘溫和中，調(diào)和諸藥。全方合用，共奏瀉肝補脾、祛濕止瀉之效。

目前PI-IBS的動物模型多以感染細菌、寄生蟲進行誘導(dǎo)，而中醫(yī)病證結(jié)合動物模型尚缺乏統(tǒng)一的建立標準。本實驗在旋毛蟲感染NIH小鼠的基礎(chǔ)上，借鑒肝郁證[6]及脾虛證[7]實驗動物模型的制備方法，采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)的復(fù)合方法復(fù)制小鼠PI-IBS肝郁脾虛證模型，應(yīng)用四君子湯合痛瀉要方灌胃治療，觀察其在PI-IBS肝郁脾虛證小鼠急性及慢性感染期中的作用。實驗結(jié)果顯示，感染2周組小鼠出現(xiàn)易怒表現(xiàn)，排便次數(shù)增加、大便稀溏不成形，至感染8周后，小鼠情緒逐漸轉(zhuǎn)為低落，大便質(zhì)地較感染2周時稍干。形態(tài)學(xué)結(jié)果可見，感染后2周小鼠腸道處于急性炎癥期，回腸、結(jié)腸組織均可見明顯炎性損傷；至感染后8周，小鼠腸黏膜炎癥消退，組織形態(tài)未見明顯異常，提示此時旋毛蟲一過性感染導(dǎo)致的腸道感染在病理學(xué)上己基本恢復(fù)，和人類PI-IBS病變類似。而感染8周組小鼠AWR評分及糞便含水百分數(shù)較空白組仍顯著增高，提示小鼠內(nèi)臟高敏感性和腸動力功能異常仍然存在，說明實驗造模成功。四君子湯合痛瀉要方給藥治療后，感染2周組小鼠結(jié)腸、回腸組織病理損傷明顯減輕，感染后2周、8周組小鼠AWR評分及糞便含水百分數(shù)顯著改善，提示四君子湯合痛瀉要方在旋毛蟲感染所致PI-IBS急性及慢性感染期中均具有明顯的治療作用。ELISA及RT-PCR結(jié)果均顯示，感染后2周、8周組小鼠血清及結(jié)腸組織中IFN-γ和IL-17的表達明顯升高，IL-10的表達降低。IFN-γ和IL-17水平的升高能夠抑制IL-10的表達水平，導(dǎo)致腸道免疫系統(tǒng)持續(xù)活化，可能是造成PI-IBS小鼠癥狀持續(xù)存在的原因之一[19]。四君子湯合痛瀉要方干預(yù)后，小鼠血清及結(jié)腸組織中IFN-γ、IL-17的表達均明顯降低，同時上調(diào)了IL-10的表達，說明四君子湯合痛瀉要方能夠調(diào)節(jié)旋毛蟲感染所引起的免疫失衡，從而改善PI-IBS小鼠癥狀。感染后2周組小鼠結(jié)腸組織中occludin和ZO-1的蛋白表達顯著降低，至感染后8周組表達有所增強，但仍顯著低于空白組，提示在旋毛蟲感染建立的PI-lBS模型中存在腸黏膜緊密連接蛋白的異常變化。經(jīng)四君子湯合痛瀉要方干預(yù)后，occludin、ZO-1的表達較治療前明顯增高，提示四君子湯合痛瀉要方治療能夠上調(diào)腸黏膜緊密連接蛋白的表達，保護腸黏膜屏障功能。

綜上所述，本研究表明四君子湯合痛瀉要方對PI-IBS肝郁脾虛證小鼠急性及慢性感染期均具有明顯的治療作用，其機制可能是通過調(diào)節(jié)腸道細胞因子免疫失衡，從而恢復(fù)腸黏膜緊密連接蛋白的表達水平，保護腸黏膜屏障功能，降低腸黏膜通透性，改善PI-IBS小鼠癥狀。