王文峰,司會強,方妹輝
(珠海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院消化內(nèi)科,珠海 519000)
腸易激綜合征(IBS)是一種反復(fù)發(fā)作的功能性腸病,以腹脹、腹痛、大便習(xí)慣改變?yōu)橹饕Y狀[1]。其中約有3.7%~36%的IBS患者既往有急性感染性胃腸炎病史,這種在腸道感染后形成的IBS即感染后腸易激綜合征(PI-IBS)[2]。目前研究表明,PI-IBS的發(fā)生發(fā)展與腸道免疫功能異常、腸道通透性改變及腸黏膜低度炎癥密切相關(guān)[3]。腸道感染所引起的腸黏膜免疫功能異常在PI-IBS發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用,以輔助性T細胞(Th1)型細胞因子占優(yōu)勢的免疫失衡還可引起腸黏膜緊密連接蛋白下調(diào),導(dǎo)致細胞間通透性增加,加重腸黏膜損傷[4]。PI-IBS可歸屬于中醫(yī)“腹痛”“瀉泄”等范疇,臨床以肝郁脾虛證型最為常見,治療以抑肝扶脾、祛濕止瀉為原則,多用四君子湯合痛瀉要方加減[5]。然而,目前PI-IBS的動物模型多以感染細菌、寄生蟲進行誘導(dǎo),中醫(yī)病證結(jié)合動物模型尚缺乏統(tǒng)一的建立標準。本實驗在旋毛蟲感染NIH小鼠的基礎(chǔ)上,采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)的復(fù)合方法復(fù)制小鼠PIIBS肝郁脾虛證模型,應(yīng)用四君子湯合痛瀉要方灌胃治療,觀察其在PI-IBS肝郁脾虛證小鼠急性及慢性感染期中的治療作用,并探討其通過調(diào)節(jié)腸道細胞免疫平衡,保護腸黏膜屏障功能而發(fā)揮作用的可能機制。
1.1 實驗動物 NIH小鼠50只,雄性,SPF級,體質(zhì)量18~22 g,飼養(yǎng)于清潔級實驗動物房中,室內(nèi)保持12 h光照與黑暗交替。
1.2 實驗藥物及試劑 旋毛蟲活體幼蟲購自蘭州獸醫(yī)研究所;四君子湯合痛瀉要方組成為黨參15 g,茯苓 15 g,白術(shù) 15 g,陳皮 10 g,防風(fēng) 15 g,白芍15 g,枳殼10 g,炙甘草5 g。參照《中藥藥理實驗方法學(xué)》換算小鼠灌胃等效劑量為13 g/kg。臨用前生理鹽水稀釋至終濃度為1.3 g/mL,按0.01 mL/g灌胃給藥。干擾素(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、白介素-17(IL-17)小鼠酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)試劑盒購自北京市福瑞生物工程公司;閉合蛋白(occludin)、緊密粘連蛋白-1(ZO-1)一抗購自Santa Cruz公司;總RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自TaKaRa公司。
1.3 模型建立 參考肝郁證模型的慢性束縛應(yīng)激法和脾虛證模型的過度勞累加饑飽失常法[6-7],采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)方法建立NIH小鼠肝郁脾虛證模型:實驗前全部小鼠進行預(yù)游泳,剔除游泳時間少于10 min或大于20 min的小鼠,將合格的造模小鼠每日上午8∶00放置于束縛盒中3 h限制活動,每日下午2∶00放置于盛水塑料桶[水溫(22±1)℃]中游泳 10 min。隔日喂食,連續(xù)3周,觀察1周。旋毛蟲感染制備PI-IBS模型:于實驗第5周應(yīng)用旋毛蟲感染小鼠,每只小鼠灌胃含400~500個旋毛蟲幼蟲的0.9%生理鹽水0.2 mL,感染后2周為急性感染期,感染8周后為PI-IBS期,腸道無明顯炎癥,內(nèi)臟敏感性明顯增高為造模成功。
1.4 分組與給藥 將NIH小鼠隨機分為空白組、感染2周組、感染8周組、2周治療組、8周治療組,共5組,每組10只。除空白組外,其余各組小鼠采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)+旋毛蟲感染建立PI-IBS肝郁脾虛證模型,感染2周組、感染8周組除造模外不予其他干預(yù),以感染后2周、8周為時間點處死小鼠用作實驗;2周治療組于感染2周后給予四君子湯合痛瀉要方灌胃治療6周;8周治療組于感染8周后給予四君子湯合痛瀉要方灌胃治療6周;空白組正常飼養(yǎng),不做任何處理。
2.1 一般狀況及臨床表征觀察 參考肝郁脾虛證實驗動物模型相關(guān)特點[8]觀察并記錄小鼠主要表現(xiàn):毛發(fā)疏松,毛色枯焦無光,乏力,倦怠,喜扎堆,弓背等一般狀態(tài)改變;伴隨情緒不穩(wěn),灌胃抵抗,易怒,興奮程度減低,飲食飲水量減少,大便不成形,便質(zhì)稀溏等變化。
2.2 內(nèi)臟敏感性檢測 小鼠實驗前禁食不禁水24h,經(jīng)乙醚麻醉后,將帶氣囊的導(dǎo)管經(jīng)小鼠肛門插入約2 cm,待小鼠適應(yīng)30 min后開始檢測。向氣囊內(nèi)隨機注入空氣,達到目標容量后持續(xù)20 s,觀察腹壁回撤反應(yīng)(AWR)并進行評分,每一容量下重復(fù)3次,取平均值。由0.25 mL開始,隨后每隔5 min分別遞增至0.35、0.5、0.65 mL。AWR評分標準:擴張時無反應(yīng)者記為0分;擴張時出現(xiàn)輕微頭部運動,而身體無反應(yīng)者記為1分;擴張時腹部肌肉收縮而未抬離桌面者記為2分;擴張時腹部肌肉收縮且抬離桌面者記為3分;擴張時身體呈弓形,骨盆抬起者記為4分。
2.3 糞便含水百分數(shù)檢測 連續(xù)收集各組小鼠8 h糞便,稱取每只小鼠每隔2 h的糞便質(zhì)量,隨后將糞便置于65℃烘箱中過夜干燥,再次稱量糞便干質(zhì)量,計算小鼠糞便含水百分數(shù)。
2.4 腸道組織病理學(xué)觀察 各組小鼠摘眼球取血并處死,解剖后取部分末端回腸、近端結(jié)腸組織,生理鹽水沖洗去除腸內(nèi)容物,于4%多聚甲醛中固定,石蠟包埋,切片機5 μm切片后進行蘇木精-伊紅(HE)染色,中性樹膠封片,光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)腸組織病理形態(tài)改變,并對各組小鼠進行組織病理學(xué)評分。評分標準:固有層未見中性粒細胞浸潤,間質(zhì)無明顯水腫為正常,記為0分;固有層僅見少量中性粒細胞浸潤,間質(zhì)輕度水腫為輕度,記為1分;固有層可見中等量的中性粒細胞浸潤,間質(zhì)呈中度水腫為中度,記為2分;固有層及整個黏膜層可見大量中性粒細胞浸潤,間質(zhì)重度水腫或壞死為重度,記為3分。
2.5 血清細胞因子含量檢測 采用ELISA法檢測小鼠血清中IL-10、IFN-γ、IL-17細胞因子水平。各組小鼠眼球取血,3 000 r/min,離心15 min,離心半徑8 cm,分離血清,設(shè)置空白孔、標準孔和樣本孔,標準品孔按標準品不同濃度各加入50 μL;樣品孔加入血清樣品 10 μL,樣品稀釋液 40 μL,空白孔不加;標準孔和樣本孔各加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗體100 μL,空白孔不加,封板膜封住反應(yīng)孔后,置于37℃恒溫箱中孵育1 h;棄去液體,洗板6次,每次 1 min,每孔加入顯色液 A、B 各 50 μL,37℃避光孵育15 min,加入終止液50 μL,于酶標儀450 nm下檢測各反應(yīng)孔OD值,做標準曲線,計算各樣本IL-10、IFN-γ、IL-17 含量。
2.6 腸道組織中IL-10、IFN-γ、IL-17的mRNA表達檢測 取各組小鼠結(jié)腸組織,采用Trizol法提取組織總RNA,紫外分光光度儀測定總RNA濃度并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,再進行PCR擴增,以β-actin為內(nèi)參。反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性5 min 1個循環(huán),95℃變性10 s,退火溫度60℃30 s,擴增40個循環(huán),最后72 ℃延伸 7 min,56 ℃ 30 s。結(jié)果以 2-ΔΔCt法分析 IL-10、IFN-γ、IL-17的相對 mRNA 表達量。
表1 各基因引物序列Tab.1 Primer sequence of each gene
2.7 腸道組織中occludin、ZO-1的蛋白表達檢測 取各組小鼠結(jié)腸組織,勻漿后加入RIPA裂解液提取總蛋白,BCA法測定蛋白濃度。加入10 μL蛋白樣品,電泳分離,冰上轉(zhuǎn)膜,室溫封閉2 h,occludin、ZO-1一抗4℃孵育過夜,二抗室溫孵育2 h,滴加顯影液,凝膠成像并拍照后用Image J軟件進行定量分析。
2.8 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件進行分析,數(shù)據(jù)以均值±標準差(±s)表示,多組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析比較,組間兩兩比較采用LSD檢測。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
3.1 一般狀況及臨床表征變化 空白組小鼠精神狀態(tài)正常,動作靈活,毛色光澤,不喜扎堆,進食及飲水量正常,二便正常,糞便呈球形,干濕適中。感染2周組小鼠出現(xiàn)易怒表現(xiàn),灌胃時劇烈抵抗,毛發(fā)豎立,少動喜聚集,飲食及飲水量減少,大便稀溏不成形。感染8周后小鼠情緒逐漸轉(zhuǎn)為低落,毛發(fā)枯亂無光,喜聚集,大便質(zhì)地稀溏,較感染2周時稍干。2周治療組、8周治療組小鼠精神狀態(tài)及大便形態(tài)較治療前均有明顯改善,小鼠毛發(fā)整齊,恢復(fù)光澤,時喜扎堆,飲食及飲水量較前增多,大便呈球型。
3.2 各組小鼠AWR評分比較 各組小鼠的AWR評分均隨著氣囊內(nèi)空氣體積的增加而增高。當注入空氣體積為0.35 mL和0.5 mL時,感染后2周及感染后8周組小鼠AWR評分較空白組顯著升高(P<0.05),2周治療組、8周治療組小鼠評分明顯低于感染后2周及感染后8周組(P<0.05)。注入空氣體積為0.25 mL和0.65 mL時,各組小鼠AWR評分無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。見表 2。
表2 各組小鼠AWR評分比較(±s)Tab.2 Comparison of AWR scores of mice in each group(±s) 分
表2 各組小鼠AWR評分比較(±s)Tab.2 Comparison of AWR scores of mice in each group(±s) 分
注:與空白組比較,*P<0.05;與感染 2 周組比較,#P<0.05;與感染 8 周組比較,△P<0.05。
組別 動物數(shù) 空氣體積0.25 mL 0.35 mL 0.5 mL 0.65 mL空白組 10 0.36±0.24 1.15±0.39 2.31±0.44 3.74±0.60感染 2周組 10 0.57±0.29 2.63±0.41* 3.87±0.69*3.88±0.54感染 8 周組 10 0.54±0.32 2.40±0.53* 3.65±0.52*3.72±0.49 2 周治療組 10 0.52±0.45 1.78±0.46# 2.78±0.40#3.75±0.62 8 周治療組 10 0.43±0.37 1.52±0.38△ 2.53±0.63△ 3.71±0.35
3.3 各組小鼠糞便含水百分數(shù)比較 與空白組相比,感染2周組及感染8周組小鼠每2 h糞便含水百分數(shù)均顯著增高(P<0.05),2周治療組小鼠每2 h糞便含水百分數(shù)較感染后2周組明顯降低,8周治療組每2 h糞便含水百分數(shù)較感染后8周組明顯降低(P<0.05)。見表 3。
表3 各組小鼠糞便含水百分數(shù)比較(±s)Tab.3 Comparison of water content in feces of mice in each group(±s)%
表3 各組小鼠糞便含水百分數(shù)比較(±s)Tab.3 Comparison of water content in feces of mice in each group(±s)%
注:與空白組比較,*P<0.05;與感染 2 周組比較,#P<0.05;與感染 8 周組比較,△P<0.05。
組別 動物數(shù) 2 h 4 h 6 h 8 h空白組 10 30.76±6.71 33.94±8.32 38.16±7.24 40.25±8.04感染 2 周組 10 55.28±5.87* 62.47±6.19* 67.38±9.71* 73.94±8.69*感染 8 周組 10 42.04±7.45* 48.65±6.70* 54.82±7.48* 58.81±7.26*2 周治療組 10 43.74±7.72# 49.60±6.93# 53.17±8.24# 60.58±6.07#8周治療組 10 34.05±5.87△ 37.93±7.41△ 43.42±6.55△ 47.38±8.59△
3.4 各組小鼠腸道組織病理學(xué)變化 見圖1。HE染色結(jié)果可見,空白組小鼠回腸、結(jié)腸黏膜各層結(jié)構(gòu)完整,黏膜下未見炎細胞浸潤。感染2周組小鼠回腸、結(jié)腸組織染色顯示明顯炎癥性改變,可見黏膜結(jié)構(gòu)嚴重受損,黏膜及黏膜下層明顯充血、水腫及炎性細胞浸潤,組織病理學(xué)評分明顯高于空白組(P<0.05)。而感染8周組小鼠回腸、結(jié)腸組織未見明顯炎性損傷及炎癥細胞浸潤,病理學(xué)評分與空白組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。經(jīng)2周治療組灌胃治療后,小鼠回腸、結(jié)腸組織損傷明顯減輕,黏膜結(jié)構(gòu)基本恢復(fù),炎性細胞浸潤較感染2周組顯著減少,病理學(xué)評分明顯低于感染2周組(P<0.05)。感染8周組小鼠回腸、結(jié)腸組織未見明顯炎性損傷,病理學(xué)評分與空白組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
圖1 各組小鼠腸組織病理改變(HE染色,×200)Fig.1 Pathological changes of intestinal tissue in mice of each group(HE staining,×200)
3.5 各組小鼠血清中IL-10、IFN-γ、IL-17細胞因子含量比較 與空白組比較,感染2周組、感染8周組小鼠血清中IFN-γ及IL-17的含量均顯著升高,IL-10的含量顯著降低(P<0.05)。2周治療組、8周治療組小鼠血清中IFN-γ、IL-17水平明顯低于感染后 2周及感染后 8周組(P<0.05),IL-10水平較感染后2周及感染后8周組明顯升高(P<0.05)。見表4。
表4 各組小鼠血清中IL-10、IFN-γ、IL-17含量比較(±s)Tab.4 Comparison of IL-10,IFN-γ and IL-17 in serum of mice in each group(±s)ng/mL
表4 各組小鼠血清中IL-10、IFN-γ、IL-17含量比較(±s)Tab.4 Comparison of IL-10,IFN-γ and IL-17 in serum of mice in each group(±s)ng/mL
注:與空白組比較,*P<0.05;與感染 2 周組比較,#P<0.05;與感染8 周組比較,△P<0.05。
組別 動物數(shù) IL-10 IFN-γ IL-17空白組 10 25.34±6.07 19.38±4.15 9.58±2.64感染 2 周組 10 11.21±4.92* 45.86±7.46* 24.87±6.90*感染 8 周組 10 15.46±7.94* 38.59±6.05* 18.83±8.47*2 周治療組 10 18.39±7.05# 30.19±8.65# 16.09±5.71#8 周治療組 10 20.75±5.26△ 25.63±6.94△ 12.55±4.86△
3.6 腸道組織中IL-10、IFN-γ、IL-17的mRNA表達 與空白組相比,感染2周組、感染8周組小鼠結(jié)腸組織中IFN-γ及IL-17的mRNA表達顯著增加,IL-10的mRNA表達顯著減少(P<0.05)。2周治療組、8周治療組IFN-γ及IL-17的mRNA表達較感染后 2周及感染后 8周組明顯減少(P<0.05),IL-10的 mRNA 表達明顯上調(diào)(P<0.05)。見表 5。
表5 各組小鼠結(jié)腸組織中IL-10、IFN-γ、IL-17 mRNA比較(±s)Tab.5 Comparison of IL-10,IFN-γ and IL-17 mRNA in colon tissue of mice in each group(±s)
注:與空白組比較,*P<0.05;與感染 2 周組比較,#P<0.05;與感染 8 周組比較,△P<0.05。
組別 動物數(shù) IL-10 IFN-γ IL-17空白組 10 1.01±0.01 1.01±0.01 1.01±0.01感染 2 周組 10 0.25±0.13* 3.33±0.51* 3.26±0.47*感染 8 周組 10 0.38±0.42* 2.99±0.36* 2.53±0.30*2 周治療組 10 0.49±0.24# 1.71±0.28# 1.89±0.23#8周治療組 10 0.62±0.17△ 0.31±0.25△ 1.42±0.15△
3.7 各組小鼠腸道組織中occludin、ZO-1的蛋白表達情況比較 感染后2周組小鼠結(jié)腸組織中occludin、ZO-1的蛋白表達較空白組顯著降低(P<0.05),至感染8周后表達有所增強,但仍顯著低于空白組(P<0.05)。2 周治療組、8 周治療組 occludin、ZO-1的蛋白表達較感染2周及感染8周組顯著增多(P<0.05)。見圖 2。
圖2 各組小鼠結(jié)腸組織中occludin、ZO-1的蛋白表達情況Fig.2 Protein expression of occludin and ZO-1 in mouse colon
PI-IBS??梢娔c道免疫功能異常,炎性細胞因子分泌增多,腸黏膜低度炎癥等病理改變。研究表明[9-10],PI-IBS患者腸黏膜處于免疫激活狀態(tài),黏膜內(nèi)T淋巴細胞及炎性細胞因子分泌增多,這些炎性因子的過度分泌能夠刺激腸道神經(jīng)系統(tǒng),引起內(nèi)臟高敏感性,繼而導(dǎo)致腹痛及大便習(xí)慣的改變。促炎和抗炎細胞因子的平衡失調(diào)能夠影響腸道生理和免疫功能,從而導(dǎo)致PI-IBS癥狀出現(xiàn)。如輔助性T細胞亞群Th1釋放IFN-γ等促炎細胞因子以促進炎癥反應(yīng),IFN-γ的過度升高可破壞腸上皮細胞,使黏膜屏障功能受損,腸道緊密連接通透性增加[11-12]。Th2細胞表達IL-10等抑炎因子以調(diào)節(jié)自身免疫,防止過度炎癥反應(yīng),IL-10的減少能夠引起促炎和抗炎機制的平衡失調(diào),導(dǎo)致腸道慢性炎癥[13]。而由Th17細胞所分泌的IL-17能夠誘導(dǎo)自身免疫,IL-17與IFN-γ還能發(fā)揮協(xié)同效應(yīng),促進腸道黏膜炎癥反應(yīng)[14]。腸上皮間的緊密連接蛋白在保護腸黏膜屏障功能,調(diào)節(jié)腸道通透性中起著關(guān)鍵作用[15]。研究表明[4],腸道感染所引起的以Th1型細胞占主導(dǎo)的免疫失衡可能引起腸黏膜緊密連接蛋白的表達下調(diào),導(dǎo)致細胞緊密連接結(jié)構(gòu)受損,細胞間通透性增加,加重腸黏膜損傷。Occludin具有細胞旁屏障功能,能夠封閉細胞間隙,形成細胞間緊密連接的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)。ZO-1被看作緊密連接的橋梁蛋白,有連接跨膜蛋白和細胞骨架蛋白的作用。其表達水平的變化可作為觀察黏膜屏障功能與細胞通透性的指標[16-17]。
PI-IBS可歸屬于中醫(yī)“腹痛”“瀉泄”等范疇,其病位在腸,脾虛濕困為病機關(guān)鍵,同時與肝、腎等臟腑功能失調(diào)密切相關(guān)。肝郁脾虛證為PI-IBS最常見的臨床證型,可占50%以上[5]。多因飲食不節(jié)、七情內(nèi)傷等導(dǎo)致氣機不利,肝郁氣滯,肝氣橫逆侮脾,脾胃受損,升降失職,致小腸清濁不分,水谷相雜并走大腸而成泄瀉。治療以抑肝扶脾、祛濕止瀉為原則,有效方劑多用四君子湯合痛瀉要方加減[18]。方中黨參甘溫入脾,健脾益胃,白術(shù)苦溫,健脾同時亦可燥濕,共為君藥;白芍酸甘而微寒,既可養(yǎng)陰柔肝,合甘草又有緩急止痛之效,為臣藥;茯苓滲濕補脾,促脾之運化,陳皮、枳殼疏肝理氣,使補而不滯,共為佐藥;防風(fēng)有升發(fā)之性,合陳皮能散肝郁而舒脾氣,為佐使藥;使以炙甘草甘溫和中,調(diào)和諸藥。全方合用,共奏瀉肝補脾、祛濕止瀉之效。
目前PI-IBS的動物模型多以感染細菌、寄生蟲進行誘導(dǎo),而中醫(yī)病證結(jié)合動物模型尚缺乏統(tǒng)一的建立標準。本實驗在旋毛蟲感染NIH小鼠的基礎(chǔ)上,借鑒肝郁證[6]及脾虛證[7]實驗動物模型的制備方法,采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)的復(fù)合方法復(fù)制小鼠PI-IBS肝郁脾虛證模型,應(yīng)用四君子湯合痛瀉要方灌胃治療,觀察其在PI-IBS肝郁脾虛證小鼠急性及慢性感染期中的作用。實驗結(jié)果顯示,感染2周組小鼠出現(xiàn)易怒表現(xiàn),排便次數(shù)增加、大便稀溏不成形,至感染8周后,小鼠情緒逐漸轉(zhuǎn)為低落,大便質(zhì)地較感染2周時稍干。形態(tài)學(xué)結(jié)果可見,感染后2周小鼠腸道處于急性炎癥期,回腸、結(jié)腸組織均可見明顯炎性損傷;至感染后8周,小鼠腸黏膜炎癥消退,組織形態(tài)未見明顯異常,提示此時旋毛蟲一過性感染導(dǎo)致的腸道感染在病理學(xué)上己基本恢復(fù),和人類PI-IBS病變類似。而感染8周組小鼠AWR評分及糞便含水百分數(shù)較空白組仍顯著增高,提示小鼠內(nèi)臟高敏感性和腸動力功能異常仍然存在,說明實驗造模成功。四君子湯合痛瀉要方給藥治療后,感染2周組小鼠結(jié)腸、回腸組織病理損傷明顯減輕,感染后2周、8周組小鼠AWR評分及糞便含水百分數(shù)顯著改善,提示四君子湯合痛瀉要方在旋毛蟲感染所致PI-IBS急性及慢性感染期中均具有明顯的治療作用。ELISA及RT-PCR結(jié)果均顯示,感染后2周、8周組小鼠血清及結(jié)腸組織中IFN-γ和IL-17的表達明顯升高,IL-10的表達降低。IFN-γ和IL-17水平的升高能夠抑制IL-10的表達水平,導(dǎo)致腸道免疫系統(tǒng)持續(xù)活化,可能是造成PI-IBS小鼠癥狀持續(xù)存在的原因之一[19]。四君子湯合痛瀉要方干預(yù)后,小鼠血清及結(jié)腸組織中IFN-γ、IL-17的表達均明顯降低,同時上調(diào)了IL-10的表達,說明四君子湯合痛瀉要方能夠調(diào)節(jié)旋毛蟲感染所引起的免疫失衡,從而改善PI-IBS小鼠癥狀。感染后2周組小鼠結(jié)腸組織中occludin和ZO-1的蛋白表達顯著降低,至感染后8周組表達有所增強,但仍顯著低于空白組,提示在旋毛蟲感染建立的PI-lBS模型中存在腸黏膜緊密連接蛋白的異常變化。經(jīng)四君子湯合痛瀉要方干預(yù)后,occludin、ZO-1的表達較治療前明顯增高,提示四君子湯合痛瀉要方治療能夠上調(diào)腸黏膜緊密連接蛋白的表達,保護腸黏膜屏障功能。
綜上所述,本研究表明四君子湯合痛瀉要方對PI-IBS肝郁脾虛證小鼠急性及慢性感染期均具有明顯的治療作用,其機制可能是通過調(diào)節(jié)腸道細胞因子免疫失衡,從而恢復(fù)腸黏膜緊密連接蛋白的表達水平,保護腸黏膜屏障功能,降低腸黏膜通透性,改善PI-IBS小鼠癥狀。