張愛婷，王春光，要 彤，趙小祺，張文婷

（1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口 075000；2.河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北 張家口 075000）

據(jù)《中國心血管健康與疾病報(bào)告2019》報(bào)道，我國心血管發(fā)病率逐年增長，危險(xiǎn)因素流行趨勢明顯，控制狀況仍不容樂觀，未來10年仍將展現(xiàn)快速增長的態(tài)勢[1]。心血管病負(fù)擔(dān)逐漸加重，已經(jīng)成為當(dāng)今重大的公共衛(wèi)生問題。隨著冠狀動(dòng)脈血運(yùn)重建技術(shù)的發(fā)展，多種治療方法在冠心病的治療中取得顯著的效果。但是缺血心肌恢復(fù)血流灌注可能引發(fā)再灌注損傷，甚至造成可逆的心肌細(xì)胞損傷，降低臨床治療效果，該現(xiàn)象被稱為心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemio-reperfusion injury，MIRI）[2]。MIRI的發(fā)病涉及細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)、氧自由基等多種機(jī)制，均可損害微血管內(nèi)皮功能，加重心肌缺血，最終導(dǎo)致微血管病變[3]。因此，MIRI防治工作的關(guān)鍵在于改善冠狀動(dòng)脈微循環(huán)。丹參是傳統(tǒng)中藥材，在各種心血管病的治療中均有廣泛應(yīng)用。丹酚酸B是丹參主要有效水溶性成分，可抑制血小板聚集，抑制血栓形成[4]，但對MIRI影響的相關(guān)研究并不多見。本研究通過觀察丹酚酸B誘導(dǎo)血管新生對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制及凋亡相關(guān)蛋白質(zhì)組學(xué)的影響，探討其可能的作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物6～8周齡SPF級SD健康雄性大鼠40只，體質(zhì)量（200±20）g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，許可證號：SCXK（京）2018-0011。飼養(yǎng)條件：溫度23～25℃，相對濕度50%～60%，自然光照，自由飲水、飲食。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號：JN.No20191030b0480130，所有操作均嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理相關(guān)規(guī)定。

1.2 藥物與試劑 丹酚酸B（批號：201523，上海一基實(shí)業(yè)有限公司）；培哚普利片（批號：201108，法國Les Laboratoires Servier Industrie公司）；水合氯醛（批號：20151205，美國Sigma-Aldrich公司）；血栓素A2（thromboxane A2，TXA2）ELISA試劑盒（批號：20180519）、前列腺素（prostacyclin，PGI2）ELISA試劑盒（批號：20180735）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）ELISA試劑盒（批號：20190238）（上海聯(lián)碩生物科技有限公司）；B細(xì)胞淋巴瘤/白血病2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）（批號：20191228）、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病2關(guān)聯(lián)（Bax）（批號：20181232）、磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）（批號：20190128）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）（批號：20190517）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）（批號：20190505）（上海酶聯(lián)生物）；TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒（批號：20181010，北京索萊寶科技有限公司）；熒光上樣緩沖液（SDS-PAGE）（批號：201917，美國EZBiolab公司）。

1.3 主要儀器SAR-830-P型小動(dòng)物呼吸機(jī)（美國CWE公司）；WHL-30B型電熱恒溫干燥箱（廣東佛衡儀器有限公司）；ECGenie型動(dòng)物無創(chuàng)心電圖分析系統(tǒng)（美國Mouse Specifics Inc公司）；SW-CJ-2D型超凈工作臺(tái)（北京華威興業(yè)科技有限公司）；DMD108型光學(xué)顯微鏡（德國徠卡公司）；AVANTI J-15R型高速冷凍臺(tái)式離心機(jī)（美國Beckman Coulter公司）；OmegaLum C型化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)（美國Aplegen公司）；DYCZ-24DN型迷你雙垂直電泳儀（槽）（北京六一生物科技有限公司）；NanoDrop型微量分光光度計(jì)（美國Thermo Scientific公司）。

1.4 分組與給藥[5]將40只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、培哚普利組和丹酚酸B組，每組10只。培哚普利組大鼠腹腔注射培哚普利片溶液，0.4 mg/kg；丹酚酸B組大鼠腹腔注射丹酚酸B溶液，50.0 mg/kg[5]；模型組和假手術(shù)組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。造模前3 d開始給藥，1次/d，造模完成后停止給藥。

1.5 造模方法 假手術(shù)組大鼠僅開胸分離左冠狀動(dòng)脈前降支，不進(jìn)行血流阻斷和再灌注處理；其余大鼠建立MIRI模型，具體操作：10%水合氯醛麻醉，采用多導(dǎo)生理記錄儀進(jìn)行心電圖監(jiān)測，氣管插管連接小動(dòng)物呼吸機(jī)；左側(cè)第三、四肋間切開皮膚，逐層分離后打開胸腔，充分暴露心臟；左心耳根部下方3～4 mm處進(jìn)針，向肺動(dòng)脈圓錐方向出針，將15 mm聚乙烯管置于結(jié)扎結(jié)下，收緊結(jié)扎線阻斷左冠狀動(dòng)脈前降支血流。手術(shù)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，過程中監(jiān)控大鼠心率、呼吸變化。以心電圖顯示ST段抬高或T波高聳為結(jié)扎成功，心肌缺血0.5 h后剪段結(jié)扎線；再灌注2 h后恢復(fù)冠脈血流，抬高的ST段降低1/2以上為MIRI造模成功。

1.6 實(shí)驗(yàn)取材與處理 各組大鼠灌注2 h后即刻經(jīng)大鼠腹主動(dòng)脈取血漿，離心分離后取上清液保存待檢；取血后采用斷頭法處死大鼠，無菌條件下取出心臟，經(jīng)生理鹽水沖洗后重新阻斷左冠狀動(dòng)脈前降支并從頸動(dòng)脈注入1%伊文思藍(lán)2 mL，分離左心室組織，濾紙吸干后-20℃冰箱內(nèi)保存10 min后，取出切成2 mm左右厚度的心肌組織切片；采用甲醛固定，置于液氮中，-20℃凍存。

1.7 觀察指標(biāo)

1.7.1 心肌組織病理學(xué)觀察 取缺血心肌組織，戊二醛固定2 h后采用PBS清洗，石蠟包埋與切片；二甲苯脫蠟，梯度乙醇洗脫，加入蒸餾水后加入蘇木素和伊紅（HE）染色，無水乙醇脫水后使用中性樹膠封固，于光學(xué)顯微鏡下拍照、觀察。

1.7.2 ELISA法檢測大鼠血清中VEGF、TAX2、PGI2水平 酶標(biāo)板上預(yù)設(shè)定6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔和空白孔；經(jīng)加樣、配液、洗滌、顯色、終止、測定等程序，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和450 nm處吸光度計(jì)算回歸曲線，根據(jù)樣品的吸光度得到VEGF、TAX2、PGI2樣品濃度。所有過程均嚴(yán)格按照試劑盒說明書執(zhí)行。

1.7.3 測定心肌梗死面積 將心肌組織置于PBS緩沖液（含1%TTC，pH值為7.4）中37℃水浴15 min，光學(xué)顯微鏡下觀察心肌組織。存活心肌表現(xiàn)為藍(lán)色，缺血心肌表現(xiàn)為紅色，梗死心肌表現(xiàn)為蒼白色。甲醛固定24 h后使用相機(jī)拍照，使用Image圖像分析軟件計(jì)算心肌梗死面積。

1.7.4 TUNEL法測定心肌細(xì)胞凋亡率 將心臟置于PBS溶液中，分離缺血區(qū)心肌，洗凈后采用甲醛固定，24 h后取出。用乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋切片，按TUNEL試劑盒說明書步驟執(zhí)行檢驗(yàn)操作。染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡情況，細(xì)胞核呈棕黃色為凋亡細(xì)胞。計(jì)算每100個(gè)細(xì)胞中凋亡細(xì)胞個(gè)數(shù)，計(jì)算細(xì)胞凋亡率。每個(gè)切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，取平均數(shù)。

1.7.5 Western blotting法測定Caspase-3、PI3K、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá) 取10 mg各組大鼠心肌組織剪碎后加入RIPA裂解液和蛋白抑制劑，0℃水浴勻漿后轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的1.5 mL EP管，充分裂解后，離心、分離棄置上清液；取少量蛋白質(zhì)樣品采用考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白濃度，分光光度計(jì)比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)蛋白曲線，經(jīng)比色后得到蛋白質(zhì)濃度，其余樣品-80℃凍存。采用10%SDS-PAGE凝膠，0.5%瓊脂糖封膠，進(jìn)行垂直電泳槽電泳；PVDF轉(zhuǎn)膜，封閉后加入一抗液（1:1 000），4℃孵育過夜；次日采用PBS清洗3次，加入二抗（1:5 000），封口孵育2 h，PBS洗膜3次；加入到增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑中顯色5 min，曝光后檢測灰度值。以目標(biāo)蛋白與GAPDH灰度值的比值作為Caspase-3、PI3K、Bcl-2、Bax相對表達(dá)水平。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t法檢驗(yàn)。以P〈0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠死亡情況 假手術(shù)組大鼠手術(shù)過程中死亡3只；模型組大鼠造模過程中死亡2只，未達(dá)到MIRI標(biāo)準(zhǔn)2只；培哚普利組大鼠造模過程中死亡3只，未達(dá)到MIRI標(biāo)準(zhǔn)2只；丹酚酸B組大鼠造模過程中死亡1只，未達(dá)到MIRI標(biāo)準(zhǔn)3只。大鼠死亡原因主要是大出血和呼吸停止。

2.2 各組大鼠心肌組織病理學(xué)改變情況 假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞大小、形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)完整，未見梗死區(qū)域；模型組大鼠心肌結(jié)構(gòu)不完整，細(xì)胞界限不清晰，細(xì)胞核脫落，可見炎性浸潤；培哚普利組和丹酚酸B組大鼠心肌組織病理學(xué)改變情況較模型組有明顯改善，結(jié)構(gòu)較完整，大小、形態(tài)相對正常。（見圖1）

圖1 各組大鼠心肌組織病理學(xué)改變比較（HE，×400）

2.3 各組大鼠心肌梗死面積比較 模型組大鼠心肌組織總面積、心肌組織梗死面積、梗死面積比例均高于假手術(shù)組（P〈0.05）；培哚普利組、丹酚酸B組大鼠心肌組織梗死面積、梗死面積比例均低于模型組（P〈0.05）；丹酚酸B組大鼠心肌組織總面積、心肌組織梗死面積、梗死面積比例與培哚普利組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）。（見表1）

表1 各組大鼠心肌梗死面積比較（±s）

表1 各組大鼠心肌梗死面積比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較，aP〈0.05；與模型組比較，bP〈0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）總面積（cm2）梗死面積（cm2）梗死面積比例（%）假手術(shù)組 7 - 4.96±0.22 0 0模型組 6 - 5.45±0.30a 1.25±0.18a 22.94±5.12a培哚普利組5 0.4 5.38±0.27 0.83±0.14b 15.43±4.40b丹酚酸B組 6 50.0 5.35±0.29 0.86±0.15b 16.07±4.15b F 4.433 12.595 4.757 P 0.015 0.000 0.027

2.4 各組大鼠心肌凋亡率比較 假手術(shù)組大鼠未見明顯心肌細(xì)胞凋亡，模型組大鼠心肌細(xì)胞凋亡明顯，培哚普利組和丹酚酸B組大鼠與模型組比較有所改善，但仍見少量凋亡細(xì)胞。（見圖2）模型組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率高于假手術(shù)組（P〈0.05）；培哚普利組、丹酚酸B組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率低于模型組（P〈0.05）；丹酚酸B組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率與培哚普利組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）。（見表2）

圖2 TUNEL法檢測各組心肌細(xì)胞凋亡情況（×100）

表2 各組大鼠心肌凋亡率比較（±s，%）

表2 各組大鼠心肌凋亡率比較（±s，%）

注：與假手術(shù)組比較，aP〈0.05；與模型組比較，bP〈0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg） 細(xì)胞凋亡率假手術(shù)組 7 - 0.31±0.04模型組 6 - 43.65±5.82a培哚普利組 5 0.4 20.18±1.65b丹酚酸B組 6 50.0 21.45±1.82b F 205.761 P 0.000

2.5 各組大鼠血清中VEGF、TAX2、PGI2含量比較 模型組大鼠血清中VEGF、PGI2含量低于假手術(shù)組（P〈0.05），TAX2含量高于假手術(shù)組（P〈0.05）；培哚普利組和丹酚酸B組大鼠血清中VEGF、PGI2含量高于模型組（P〈0.05），TAX2含量低于模型組（P〈0.05）；丹酚酸B組大鼠血清中VEGF含量高于培哚普利組（P〈0.05），TAX2含量低于培哚普利組（P〈0.05）；丹酚酸B組大鼠血清中PGI2含量與培哚普利組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）。（見表3）

表3 各組大鼠血清中VEGF、TAX2、PGI2含量比較（±s，ng/L）

表3 各組大鼠血清中VEGF、TAX2、PGI2含量比較（±s，ng/L）

注：與假手術(shù)組比較，aP〈0.05；與模型組比較，bP〈0.05；與培哚普利組比較，cP〈0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）VEGF TAX2 PGI2假手術(shù)組 7 - 105.68±9.85 30.28±1.51 61.74±5.59模型組 6 - 35.16±5.12a 58.38±1.35a 35.62±5.18a培哚普利組 5 0.4 72.39±6.74b 44.52±1.43b 55.16±5.74b丹酚酸B組 6 50.0 85.96±6.82bc 39.81±0.96bc 50.34±5.37b F 99.534 481.547 25.834 P 0.000 0.000 0.000

2.6 各組大鼠心肌組織中Caspase-3、PI3K、Bcl-2、Bax蛋白相對表達(dá)量比較 模型組大鼠心肌組織中Caspase-3、PI3K、Bcl-2、Bax蛋白相對表達(dá)量高于假手術(shù)組（P〈0.05）；培哚普利組和丹酚酸B組大鼠心肌組織中Bcl-2蛋白相對表達(dá)量高于模型組（P〈0.05），Caspase-3、PI3K、Bax蛋白相對表達(dá)量低于模型組（P〈0.05）；丹酚酸B組大鼠心肌組織中Caspase-3、PI3K、Bcl-2、Bax蛋白相對表達(dá)量與培哚普利組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）。（見表4、圖3）

圖3 各組大鼠心肌組織中Caspase-3、PI3K、Bcl-2、Bax蛋白電泳圖

表4 各組大鼠心肌組織中Caspase-3、PI3K、Bcl-2、Bax蛋白相對表達(dá)量比較（±s）

表4 各組大鼠心肌組織中Caspase-3、PI3K、Bcl-2、Bax蛋白相對表達(dá)量比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較，aP〈0.05；與模型組比較，bP〈0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量(mg/kg)Caspase-3 PI3K Bcl-2 Bax假手術(shù)組 7 - 0.21±0.03 0.15±0.01 0.51±0.03 0.18±0.02模型組 6 - 0.68±0.10a 0.64±0.05a 0.70±0.05a 0.75±0.11a培哚普利組 5 0.4 0.35±0.04b 0.28±0.03b 0.83±0.10b 0.32±0.06b丹酚酸B組 6 50.0 0.38±0.05b 0.30±0.02b 0.85±0.09b 0.35±0.05b F 66.217 292.369 31.855 83.146 P 0.000 0.000 0.000 0.000

3 討 論

冠狀動(dòng)脈介入、冠狀動(dòng)脈搭橋、溶栓等是臨床上治療急性心血管病的常用治療手段，可有效恢復(fù)心肌缺血細(xì)胞的血供，但MIRI的發(fā)生使其未達(dá)到預(yù)期療效。MIRI是心肌血供中斷一定時(shí)間后恢復(fù)血供造成的嚴(yán)重的損傷，會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)心功能不全、血壓驟降、心律失常等癥狀，導(dǎo)致病情惡化，甚至可能導(dǎo)致患者猝死。缺血預(yù)處理是通過短暫阻斷冠狀動(dòng)脈血流對隨后較長時(shí)間的心肌缺血再灌注損傷產(chǎn)生保護(hù)作用，但目前的缺血預(yù)處理具有創(chuàng)傷性，會(huì)提高治療風(fēng)險(xiǎn)，很難在臨床中應(yīng)用。因此，藥物性預(yù)處理的延遲性保護(hù)作用近年來逐漸成為研究的熱點(diǎn)。

中醫(yī)對于心血管疾病，尤其是缺血性心臟病以活血、化瘀、止痛為基本治療原則。丹參是我國傳統(tǒng)中藥材，具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛的功效[6]；丹酚酸B是丹參主要成分，可通過多種途徑發(fā)揮抗心肌缺血的作用[7]。本研究顯示，經(jīng)丹酚酸B處理后的大鼠心肌組織梗死面積、梗死面積比例均降低（P〈0.05），且與培哚普利組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05），證實(shí)丹酚酸B能夠降低MIRI大鼠模型心肌損傷，對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用，與楊華等[8]研究結(jié)果具有一致性。盡管多種研究證實(shí)，丹酚酸B對機(jī)體損傷部位具有保護(hù)作用，但其具體機(jī)制尚未完全清楚。

完整的血管內(nèi)皮細(xì)胞層在調(diào)控血管滲透性、血小板黏附等方面具有重要作用[9]。任何因素引起的內(nèi)皮細(xì)胞受損都可能引起內(nèi)皮功能障礙，而內(nèi)皮功能障礙是心血管病疾病發(fā)生的關(guān)鍵因素[10]。MIRI發(fā)生后血管內(nèi)皮功能損傷，導(dǎo)致心肌細(xì)胞能量代謝障礙，產(chǎn)生大量氧自由基。VEGF是一類同源二聚體糖蛋白，對促進(jìn)微血管新生和成熟具有重要作用。VEGF及其受體可有效提高血管通透性，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，促進(jìn)心血管的形成，并且廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、抗炎、抗凋亡和促血管新生等過程[11]。TAX2和PGI2是前列腺素類重要因子，由花生四烯酸經(jīng)環(huán)氧化酶催化形成，是調(diào)節(jié)血管壁緊張性的主要活性物質(zhì)。TAX2常被用作血管收縮劑，可促進(jìn)血小板聚集和血管收縮[12]。PGI2是血管保護(hù)因子，具有抑制血小板聚集、舒張血管、對抗TAX2的作用[13]。正常情況下，二者處于動(dòng)態(tài)平衡，共同維護(hù)血管的穩(wěn)定。一旦發(fā)生缺血缺氧致內(nèi)皮細(xì)胞受損，就會(huì)導(dǎo)致TAX2釋放增多，PGI2生成減少，引起血管收縮，誘發(fā)冠狀動(dòng)脈痙攣，同時(shí)提高血管通透性。本研究顯示，經(jīng)丹酚酸B處理后的大鼠VEGF、PGI2含量升高（P〈0.05），TAX2含量降低（P〈0.05），證實(shí)丹酚酸B可促進(jìn)微循環(huán)血管生成，改善內(nèi)皮功能和冠狀動(dòng)脈微循環(huán)障礙，對抗凝血和血栓的形成。

細(xì)胞凋亡是基因控制的細(xì)胞主動(dòng)死亡過程，是機(jī)體發(fā)生的細(xì)胞生理性死亡現(xiàn)象，對生長、發(fā)育和維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要作用。同時(shí)細(xì)胞凋亡也是導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙的重要原因，30%～50%的內(nèi)皮細(xì)胞死亡源于細(xì)胞凋亡。當(dāng)機(jī)體遭受應(yīng)激傷害時(shí)會(huì)啟動(dòng)一系列的防御機(jī)制而產(chǎn)生保護(hù)作用。MIRI引起的乳酸、一氧化氮堆積等均會(huì)加速正常細(xì)胞的凋亡[14]。本研究中，經(jīng)丹酚酸B處理后的大鼠心肌細(xì)胞凋亡率明顯降低（P〈0.05），證實(shí)丹酚酸B可有效抑制細(xì)胞凋亡。細(xì)胞凋亡過程由多種基因蛋白表達(dá)調(diào)控。細(xì)胞凋亡分為內(nèi)源性凋亡和外源性凋亡兩種途徑。Bcl-2家族是細(xì)胞凋亡內(nèi)源性線粒體通路的重要調(diào)節(jié)因子。Bcl-2和Bax是Bcl-2家族主要成員，是早期被發(fā)現(xiàn)的參與細(xì)胞凋亡的蛋白，是反映心肌生存能力的重要指標(biāo)[15]。Bcl-2是抑制凋亡蛋白，主要存在于細(xì)胞線粒體膜、核膜等，通過維持Ca2+的動(dòng)態(tài)平衡抗拮促凋亡蛋白的表達(dá)；Bax是促凋亡蛋白，也是Bcl-2同源基因蛋白，通過抑制Bcl-2損傷線粒體，抑制線粒體信號通路啟動(dòng)，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。MIRI會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，阻斷啟動(dòng)抗凋亡的信號通路。PI3K/Akt信號通路廣泛存在于真核細(xì)胞中，參與細(xì)胞激活，調(diào)控蛋白質(zhì)代謝，可作用于Bcl凋亡家族。Caspase-3被稱為細(xì)胞凋亡的執(zhí)行者，正常情況下，Caspase-3以酶原的形式在細(xì)胞質(zhì)中存在，并不具備活性，在凋亡發(fā)生的早期階段被激活，裂解胞質(zhì)、胞核底物，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡[16]。本研究顯示，模型組大鼠心肌組織中Caspase-3、PI3K、Bcl-2、Bax蛋白相對表達(dá)量高于假手術(shù)組（P〈0.05），證實(shí)上述凋亡蛋白在MIRI中均異常表達(dá)。經(jīng)丹酚酸B處理后，心肌組織中Bcl-2蛋白相對表達(dá)量升高（P〈0.05），Caspase-3、PI3K、Bax蛋白相對表達(dá)量降低（P〈0.05），提示丹酚酸B可能通過抑制Caspase-3、PI3K、Bax蛋白，上調(diào)Bcl-2蛋白抑制細(xì)胞凋亡。綜上所述，丹酚酸B對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用可能通過誘導(dǎo)血管新生、抗凋亡實(shí)現(xiàn)。