劉 霜，鐘 英，陳光亮，張 皓，鄭海芳，田 翠，羅小嬌，張 強(qiáng)

(四川省瀘州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川 瀘州 646000)

農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留分析檢測是保證農(nóng)產(chǎn)品安全的重要手段，也是分析領(lǐng)域的一個重要研究課題。我國從20世紀(jì)50年代后期開始進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測[1]，從最初的比色法、容量法發(fā)展到現(xiàn)在的色譜分析法和質(zhì)譜分析法[2]，從最初的單一型農(nóng)藥分析方法發(fā)展到多種農(nóng)藥類型分析方法[3]，目前常用農(nóng)藥殘留檢測方法NY/T 761-2008、GB 23200.8-2016、GB/T 20769-2008和GB 23200.113-2018等，都是多種農(nóng)藥類型分析方法。單一型農(nóng)藥分析方法檢出限的確認(rèn)相對簡單，多參數(shù)分析方法檢出限確認(rèn)依舊是難點(diǎn)。

檢出限是一種評估分析方法和分析儀器性能的廣泛使用的參數(shù)。檢出限分為儀器檢出限和方法檢出限兩類。儀器檢出限為儀器檢測樣品中分析物的最低量，一般以3倍信噪比定義。方法檢出限針對特定方法，不僅包含儀器背景噪聲干擾，還考慮基質(zhì)干擾，因此方法檢出限總是比儀器檢出限高。在建立分析方法時，方法檢出限是最重要的參數(shù)[4]。

GB/T 20769-2008是目前各級農(nóng)產(chǎn)品檢測機(jī)構(gòu)常用農(nóng)藥殘留檢測方法之一，因質(zhì)譜儀的廣泛使用，大部分檢測機(jī)構(gòu)對原方法進(jìn)行優(yōu)化，省略凈化、濃縮步驟，直接以提取液上機(jī)，或者以甲醇水稀釋上機(jī)。由于分取倍數(shù)改變，原GB/T 20769-2008方法中給出的檢出限不能直接作為方法檢出限。本文選取萵苣和花椰菜2種蔬菜，梯度添加18種常檢農(nóng)藥(其中12種農(nóng)藥在GB/T 20769-2008方法檢測范圍中)，以2種蔬菜回收率均到達(dá)70%～130%為判斷依據(jù)，確認(rèn)各項(xiàng)參數(shù)檢測檢出限。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

質(zhì)譜儀為安捷倫三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀(6460)；花椰菜和萵苣為市場購買，勻漿后保存于0～4℃，經(jīng)過測定未含添加農(nóng)藥；18種農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)樣品均來源于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所，多菌靈、氯蟲苯甲酰胺濃度為100mg/mL，其余16種農(nóng)藥濃度為1000mg/mL，用甲醇配制成濃度為1mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，儲存于4℃冰箱中；甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水為屈臣氏蒸餾水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)方法：GB/T 20769-2008(原方法檢出限見表1)，前處理過程不凈化。Ⅰ梯度(添加濃度0.001mg/kg)：稱取花椰菜和萵苣20.00g試樣于150mL燒杯中，加入20uL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，渦旋混勻，靜置1h后，加入40.00mL乙腈，15000r/min勻漿1min，加入5g氯化鈉，3800r/min離心5min，取上清液經(jīng)0.2um濾膜過濾后進(jìn)行測定。Ⅱ梯度(添加濃度0.0005mg/kg)：添加混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液10uL，其余前處理同Ⅰ梯度。Ⅲ梯度(添加濃度0.0001mg/kg)：添加混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液2uL，其余前處理同Ⅰ梯度。Ⅳ梯度(添加濃度0.00005mg/kg)：添加混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液1uL，其余前處理同Ⅰ梯度。

表1 GB/T 20769-2008中12種農(nóng)藥參數(shù)方法檢出限

1.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液配制

分別按照添加濃度配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液體，對應(yīng)同一濃度梯度樣品上機(jī)測試，外標(biāo)法定量。

1.4 儀器條件

色譜測定條件：色譜柱：C18 50×2.1nm；流動相：A:0.1%甲酸水溶液,B:0.1%甲酸甲醇溶液(梯度淋洗見下表)；柱溫：35℃；流速：0.2mL/min；進(jìn)樣量：2uL。質(zhì)譜測定條件：離子源(AJS ESI)；正離子掃描；選擇反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)；霧化器器壓力45psi;干燥器溫度250℃；毛細(xì)管電壓4000V。相關(guān)質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 梯度淋洗條件

表3 18種農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 Ⅰ梯度添加條件下檢出限確認(rèn)情況

由表4可知，Ⅰ梯度添加條件下，18種農(nóng)藥添加回收率均能達(dá)到70%～130%。通過對比表1可知，原方法檢出限高于0.001mg/kg的參數(shù)有氧樂果、涕滅威砜、滅多威、噻蟲嗪、吡蟲啉、克百威、甲萘威7種農(nóng)藥，這表明優(yōu)化后的方法能達(dá)到原方法檢出限。因此，該7種農(nóng)藥檢出限可直接以原方法檢出限表示。多菌靈、啶蟲脒、咪鮮胺、烯酰嗎啉和甲維酸鹽原方法檢出限低于本次添加量，需進(jìn)一步降低添加水平進(jìn)行驗(yàn)證。

表4 Ⅰ梯度條件下農(nóng)藥回收率情況(%)

涕滅威亞砜、3-羥基克百威、涕滅威、氯蟲苯甲酰胺、嘧菌酯和苯醚甲環(huán)唑未在原GB/T 20769-2008方法檢測范圍中，但通過表4可知，此6項(xiàng)參數(shù)在Ⅰ梯度條件下，2種蔬菜回收率均能達(dá)到70%～130%，表明此方法能夠準(zhǔn)確檢測出此6項(xiàng)參數(shù)，但因其未在原方法檢測范圍中，無原方法檢出限作指導(dǎo)，若要確定其檢出限，需進(jìn)一步降低添加濃度直到其回收率不能達(dá)到70%～130%為止。

2.2 Ⅱ梯度添加條件下檢出限確認(rèn)情況

表5可知，Ⅱ梯度條件下，咪鮮胺回收率能達(dá)到70%～130%范圍內(nèi)，其原方法檢出限為0.00052mg/kg，高于本次添加濃度，因此，咪鮮胺實(shí)際檢出限以原方法檢出限0.00052mg/kg表示；本梯度條件下，啶蟲脒、多菌靈、烯酰嗎啉和甲維鹽回收率符合要求，但其原方法檢出限均小于添加濃度0.0005mg/kg，故仍需降低添加濃度驗(yàn)證其檢出限。

表5 Ⅱ梯度條件下農(nóng)藥回收率情況(%)

本梯度條件下，3-羥基克百威在萵苣基質(zhì)和花椰菜基質(zhì)中回收率過高，不符合要求，而其在Ⅰ梯度條件下回收率符合要求。因此3-羥基克百威檢出限為0.001mg/kg；本梯度條件下，涕滅威亞砜、涕滅威、氯蟲苯甲酰胺、嘧菌酯和苯醚甲環(huán)唑在2種基質(zhì)中，回收率均達(dá)到70%～130%，仍需進(jìn)一步降低添加濃度以確認(rèn)其檢出限。

2.3 Ⅲ梯度添加條件下檢出限確認(rèn)情況

由表6可知，Ⅲ梯度條件下，多菌靈、啶蟲脒回收率符合要求，本梯度添加濃度低于原方法檢出限，因此，多菌靈、啶蟲脒實(shí)際檢出限以原方法檢出限表示；本梯度烯酰嗎啉回收率亦符合要求，但其原方法檢出限小于添加濃度，仍需降低濃度以確認(rèn)實(shí)際檢出限；甲維鹽原方法檢出限為0.00008mg/kg，但是本梯度條件下萵苣回收率偏高，已不符合要求，不能繼續(xù)降低濃度，結(jié)合Ⅱ梯度回收率結(jié)果，確定甲維鹽檢出限為0.0005mg/kg。

表6 Ⅲ梯度條件下農(nóng)藥回收率情況(%)

本梯度條件下，涕滅威亞砜回收率未達(dá)到要求，結(jié)合Ⅱ梯度回收率結(jié)果，確認(rèn)檢出限為0.0005mg/kg。涕滅威、氯蟲苯甲酰胺、嘧菌酯和苯醚甲環(huán)唑在兩種基質(zhì)中回收率均達(dá)到70%～130%，可進(jìn)一步降低添加濃度以確認(rèn)檢出限。

2.4 Ⅳ梯度添加條件下檢出限確認(rèn)情況

由表7可知，Ⅳ梯度條件下，烯酰嗎啉、氯蟲苯甲酰胺回收率超出70%～130%范圍，其中烯酰嗎啉原方法檢出限為0.00009mg/kg，但是用本方法，Ⅳ梯度條件下，回收率不能達(dá)到要求，結(jié)合Ⅲ梯度結(jié)果，確認(rèn)烯酰嗎啉、氯蟲苯甲酰胺檢出限為0.0001mg/kg。本梯度下涕滅威、嘧菌酯和苯醚甲環(huán)唑回收率均符合要求，表明此3項(xiàng)參數(shù)雖未在GB/T20769-2008檢測范圍中，但用此方法不僅能準(zhǔn)確檢測此3項(xiàng)農(nóng)藥殘留含量，且檢出限較低，最終確定檢出限為0.00005mg/kg。

表7 Ⅳ梯度條件下農(nóng)藥回收率情況(%)

3 討論

本文通過蘿卜和花椰菜農(nóng)藥殘留添加回收試驗(yàn)，以2種蔬菜的回收率均達(dá)到70%～130%為依據(jù)，確認(rèn)了18種參數(shù)的實(shí)際檢出限。其中，GB/T 20769-2008檢測范圍內(nèi)的12種農(nóng)藥參數(shù)，氧樂果、涕滅威砜、多菌靈、滅多威、噻蟲嗪、吡蟲啉、啶蟲脒、克百威、甲萘威和咪鮮胺方法檢出限可以作為實(shí)際檢出限，烯酰嗎啉和甲維鹽實(shí)際檢出限低于原方法檢出限，這是由于GB/T 20769-2008方法中，前處理在凈化后進(jìn)行了濃縮，本文所采用的方法省略凈化和濃縮步驟，致使檢出限升高。涕滅威亞砜、3-羥基克百威、涕滅威、氯蟲苯甲酰胺、嘧菌酯、苯醚甲環(huán)唑6種參數(shù)不在GB/T 20769-2008方法檢測范圍中，但日常檢測中可檢測此6種參數(shù)，本文用梯度添加的方法確定此6種農(nóng)藥檢出限，檢測出的數(shù)據(jù)僅作參考，若檢測出此6種參數(shù)殘留量超標(biāo)，仍需用國標(biāo)方法進(jìn)行復(fù)檢。

4 展望

本文僅采用蘿卜和花椰菜進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，具有一定局限性，可以拓寬蔬菜的品種范圍，也可用食用菌或者水果進(jìn)行添加實(shí)驗(yàn)。本文添加梯度按GB/T 20769-2008方法檢出限確定，僅添加了4種梯度，如果可以增加添加梯度，則檢出限的確認(rèn)更為準(zhǔn)確。目前檢測方法中逐漸以定量限替代檢出限，本文以原方法檢出限為參考，僅做檢測限的確認(rèn)，可以再進(jìn)一步研究定量限的確認(rèn)。