王宏遠(yuǎn)，劉 丹，王 強，范興君，王晶華，于鳳波,3

(1.牡丹江醫(yī)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011；2.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院，黑龍江 牡丹江 157011；3.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬高州市人民醫(yī)院，廣東 高州 525200)

檸檬[Citrus limon(L.)Burm.f]屬蕓香科柑橘屬常綠小喬木，其果實提取物的藥理作用廣泛，有抗壞血病[1]、抗癌[2]、抗氧化[3]、抗高尿酸血癥[4]、降血脂[5]、殺蟲抑菌[6-7]等多種藥理活性。文獻(xiàn)報道[8-9]，檸檬提取物可以特異性作用于變形鏈球菌，影響變形鏈球菌的基因表達(dá)，同時也可以對其他致齲菌有著抑制作用，從而達(dá)到齲齒前期的防治功能。因此，可以設(shè)想，若將檸檬提取物用于漱口，則會對口腔內(nèi)的致齲菌有明顯的抑制作用，從而有效地防治早期齲齒的發(fā)生[10]?；谝陨舷敕ǎ疚拈_發(fā)了一種檸檬提取物泡騰制劑用于齲齒的防治，通過泡騰制劑的泡騰作用可使檸檬提取物迅速溶解于水中用于漱口，從而達(dá)到抑制細(xì)菌增殖的作用。

1 材料與方法

1.1 材料無水檸檬酸(77-92-9，上海吉至生化科技有限公司)；乳糖(L1517，上海品成醫(yī)藥科技有限公司)；無水碳酸鈉(497-19-8，湖北信康醫(yī)藥化工有限公司)；碳酸氫鈉(144-55-8，豆城化學(xué)產(chǎn)品商貿(mào)(天津)有限公司)；酒石酸(526-83-0，湖北信康醫(yī)藥化工有限公司)；己二酸(124-04-9，佛山信航生物科技有限公司)；聚乙烯吡咯烷酮(9003-39-8，上海厚誠精細(xì)化工有限公司)；甜菊素(2I43L-CP，東京化成工業(yè)株式會社)；聚乙二醇6000(25322-68-3，湖北信康醫(yī)藥化工有限公司)；檸檬提取物(68648-39-5，湖北巨勝科技有限公司)；氯化鈉(7647-14-5，豆城化學(xué)產(chǎn)品商貿(mào)(天津)有限公司)。

片劑硬度儀(YD-20KZ，天大天發(fā)科技有限公司)；片劑脆碎度儀(CS-2，天津市國銘醫(yī)藥設(shè)備有限公司)；紫外可見分光光度計(17-1650-01-0372，北京普析通用儀器有限公司)；精密電子天平(T1000，常熟市雙杰測試儀器廠)；電熱真空干燥箱(ZK-82B，上海實驗儀器廠)；壓片機(GZPL-620，北京國藥龍立有限公司)。

1.2 檸檬提取物分析方法的確立

1.2.1 波長確定 精密稱取1 mg的檸檬提取物置于100 mL的容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容，在波長為200～800 nm之間進行掃描。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取500 mg的檸檬提取物于100 mL的容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容，震蕩靜置后備用。用100 mL容量瓶將檸檬提取物分別稀釋為濃度為1 μg/mL、3 μg/mL、5 μg/mL、7 μg/mL、9 μg/mL、11 μg/mL，分別測量吸光度A值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 回收率測定 取處方量的輔料與80%、100%、120%的主藥混合放入100 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解稀釋定容，稀釋1000倍后測量其紫外吸光度值，計算回收率。

1.2.4 精密度試驗 配制相應(yīng)溶液在1 d內(nèi)和1周內(nèi)分別測定5次，計算日內(nèi)精密度和日間精密度。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗 將藥物溶液保存在密閉的容量瓶中，分別測定24 h與36 h樣品含量。

1.3 處方設(shè)計

1.3.1 單因素篩選 在查閱資料及單因素考察實驗結(jié)果基礎(chǔ)上，確定泡騰片的填充劑使用乳糖在片劑成型與口感等方面最佳。經(jīng)過篩選，初步選擇出輔料種類有酸劑種類：檸檬酸、酒石酸、己二酸；潤濕劑種類：5% PVP水溶液、5% PVP乙醇溶液、80%乙醇，并在如下范圍內(nèi)對酸堿比及泡騰劑含量進行篩選：泡騰劑含量(占片重百分比)：40%、45%、50%；泡騰劑酸堿比例：2∶3、2∶5、7∶10。

1.3.2 正交實驗設(shè)計 在單因素考察基礎(chǔ)上，以酸劑種類、泡騰劑含量、泡騰劑酸堿比與潤濕劑種類為因素，以發(fā)泡量、崩解時限、脆碎度為考察指標(biāo)，設(shè)計L(34)正交實驗表，用于檸檬提取物的處方篩選。

經(jīng)過初步篩選確定泡騰劑輔料如下，確定所用堿劑為碳酸氫鈉：碳酸鈉(9∶1)；填充劑：乳糖；潤滑劑：PEG6000：NaCl(2∶3)，適量的微分硅膠，占處方1%；矯味劑：甜菊糖(6 g)?？偦?00 g壓制成100片，每片的主藥含量0.5 g。并按照如下工藝流程制備泡騰片：(1)配置潤濕劑；(2)按處方稱取原輔料；(3)制粒：檸檬提取物泡騰片的制備采用酸堿分開制粒。取處方量1/2的主藥，處方量酸劑，與處方量1/2的乳糖混合研磨過60目篩，用潤濕劑制軟材。軟材要達(dá)到手握成團捏之即散。軟材過18目篩制粒，再過16目篩去細(xì)粉，放入烘干箱55 ℃烘干30 min左右至完全干燥。取1/2處方量主藥，1/2處方量乳糖，處方量的堿劑重復(fù)酸制粒步驟，得到堿制粒；(4)混總：得到的酸制粒與堿制粒1∶1混合，加入處方量的潤滑劑與處方量的矯味劑混合均勻；(5)壓片：將混總后的制粒放于壓片機壓片，控制片重4 g左右。

表1 因素水平

表2 正交表

1.3.3 處方確定 按照藥典標(biāo)準(zhǔn)[11]對正交實驗設(shè)計的9個處方的泡騰制劑的外觀與澄清度、片重差異、脆碎度、發(fā)泡量、崩解時限等進行檢測，確定最佳處方。

1.4 質(zhì)量檢測按照正交實驗所確定檸檬提取物處方及制備工藝分別制備3批次檸檬提取物泡騰制劑，并對其片劑外觀與溶液澄清度、含量、片重差異、硬度、脆碎度、發(fā)泡量等質(zhì)量進行檢測。

2 結(jié)果

2.1 分析方法的建立結(jié)果顯示，檸檬提取物在295.00 nm處有最大吸收波長。檸檬提取物在1～11 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=0.056C-0.006，r2=0.999。

2.1.1 回收率測定 結(jié)果 結(jié)果顯示，RSD均小于2%，表明該方法準(zhǔn)確性良好,見表3。

表3 回收率測定結(jié)果

2.1.2 精密度測定結(jié)果 結(jié)果顯示，實驗精密度較好，日內(nèi)與日間RSD%均小于2%，見表4。

表4 精密度測定結(jié)果

2.1.3 穩(wěn)定性測定結(jié)果 結(jié)果顯示，36 h內(nèi)室溫放置溶液穩(wěn)定，見表5。

表5 穩(wěn)定性測定結(jié)果

2.2 處方篩選實驗結(jié)果

2.2.1 不同處方外觀與溶液澄清度測定結(jié)果 結(jié)果顯示，各處方片劑外觀完整光澤，色澤均勻，溶液中無明顯渾濁沉淀，見表6。

表6 不同處方外觀與溶液澄清度測定結(jié)果

2.2.2 不同處方片重差異測定結(jié)果 藥典規(guī)定平均片重0.3 g以上的片劑，各片重與平均片重相差不得超過±5%，結(jié)果顯示L4、L5、L6、L7組片重差異有大于5%，不合格，見表7。

表7 不同處方片重差異測定結(jié)果

2.2.3 不同處方脆碎度測定結(jié)果 結(jié)果顯示，各處方脆碎度均小于1%，滿足藥典規(guī)定，見表8。

表8 不同處方脆碎度測定結(jié)果

2.2.4 不同處方發(fā)泡量測定結(jié)果 結(jié)果顯示，除L4、L7外，各處方均有較好發(fā)泡量，見表9。

表9 不同處方發(fā)泡量測定結(jié)果(單位：mL)

表9續(xù)表

2.2.5 不同處方崩解時限測定結(jié)果 結(jié)果顯示，各處方都能在5 min內(nèi)完全崩解，滿足藥典規(guī)定，見表10。

表10 不同處方崩解時限測定結(jié)果(單位：S)

2.2.6 處方及工藝確定 綜合上述質(zhì)量檢測結(jié)果，以發(fā)泡量、崩解時限和脆碎度作為評價指標(biāo)，對正交試驗設(shè)計處方進行評價。

表11 正交實驗結(jié)果

表12 主體間效應(yīng)檢驗表格

根據(jù)正交實驗結(jié)果與主題效應(yīng)檢驗表格進行比對，得到以下結(jié)果：發(fā)泡量的因素影響順序為B>A>D>C。崩解時限的因素影響順序為B>D>A>C。脆碎度的因素影響順序為D>A=B>C。

綜上，最終確定檸檬提取物泡騰制劑的處方及制備工藝為：酸劑：碳酸氫鈉，碳酸鈉(用量為7:10)100 g；堿劑為檸檬酸100 g；潤滑劑為PEG6000：NaCl(2∶3)4 g與適量微粉硅膠(約占1%)；潤濕劑為5% PVP乙醇溶液；填充劑為乳糖140 g；矯味劑為甜菊糖6 g。混總共400 g壓制100片。酸堿分開制粒，混總后直接壓片。

2.3 質(zhì)量檢測結(jié)果

2.3.1 含量檢測結(jié)果 隨機選取三批次中的三個樣本經(jīng)稀釋、定容后測紫外吸收，計算樣品含量，結(jié)果顯示，三批次產(chǎn)品含量均符合標(biāo)準(zhǔn)，見表13。

表13 含量檢測結(jié)果(n=3)

2.3.2 脆碎度 結(jié)果顯示，三批次產(chǎn)品脆碎度均符合標(biāo)準(zhǔn)，見表14。

表14 脆碎度檢測結(jié)果(n=20)

2.3.3 硬度 結(jié)果顯示，樣品的硬度在(55±5)N范圍內(nèi)，見表15。

表15 硬度檢測結(jié)果(單位：N)

2.3.4 發(fā)泡量 結(jié)果顯示，三批次產(chǎn)品發(fā)泡量在(17±1)mL范圍內(nèi)，見表16。

表16 發(fā)泡量檢測結(jié)果(單位：mL)

2.3.5 崩解時限 結(jié)果顯示，三批次產(chǎn)品崩解時限在85 S左右，均低于5 min，符合藥典規(guī)定，見表17。

表17 崩解時限檢測結(jié)果(單位：S)

2.3.6 片重差異 結(jié)果顯示，片重差異均低于5%，符合藥典規(guī)定，見表18。

表18 片重差異檢測結(jié)果(單位：g)

表18續(xù)表

3 討論

本文建立了檸檬提取物的分析方法用于其含量檢測，并最終確定了檸檬提取物泡騰劑處方為：酸劑：碳酸氫鈉，碳酸鈉(用量為7∶10)100 g；堿劑為檸檬酸100 g；潤滑劑為PEG6000：NaCl(2∶3)4 g與適量微粉硅膠(約占1%)；潤濕劑為5%PVP乙醇溶液；填充劑為乳糖140 g；矯味劑為甜菊糖6 g，混總壓制為100片，使檸檬提取物迅速溶解于水中用于漱口，用于齲齒的防治，同時通過泡騰制劑的泡騰作用可從而達(dá)到抑制細(xì)菌增殖的作用，此外，該溶液還可吞服，用于補充維生素。與市售漱口水相比，泡騰制劑具備如下優(yōu)點：(1)固體片劑體型小，運輸成本底，攜帶方便；(2)食用安全，檸檬提取物為天然植物提取物，相對安全性較高；(3)可提高消費者接受程度，通過不同矯味劑的添加，可改善天然提取物味道苦澀的問題；而齲齒高發(fā)人群多為6～15歲的兒童[10]，制成不同口味的制劑，對于兒童有更高的順應(yīng)性；(4)制作工藝簡單，成本低。但泡騰制劑存在著吸潮，粘沖等問題，吸潮問題可以使用內(nèi)加法，用PEG6000在制粒時對酸堿進行包埋，可有效阻止吸潮的發(fā)生。在壓片時要控制溫度與濕度，溫度要控制在25 ℃以下，濕度在35%以下，可以有效地防止壓片粘沖，本次研究制片溫度為20 ℃，符合要求。氯化鈉是比較好的潤滑劑，并具備一定的矯味作用[11]。而選用泡騰劑是為了使藥物在規(guī)定時限內(nèi)完全崩解完成，酸堿泡騰劑的含量一般要占片重的50%左右才能達(dá)到快速崩解，但泡騰劑過多會影響片劑的壓制與劑型外觀、口感，脆碎度低等多種問題，應(yīng)針對具體情況進行篩選。總之本次研究獲得檸檬提取物泡騰劑配方及制備工藝符合藥典規(guī)定和相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，可用于臨床進一步觀察其預(yù)防齲齒的效果。