史雪麗，張萬里，毛 俊，顏悅?cè)?/p>

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)是由異常自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的慢性肝實(shí)質(zhì)炎癥性病變性疾病，具有血清轉(zhuǎn)氨酶和免疫球蛋白G升高、肝組織學(xué)炎癥和血循環(huán)有多種自身抗體存在的特點(diǎn)[1]。AIH臨床表現(xiàn)不一，診斷需要排除其他肝臟疾病。對AIH的及時(shí)診斷和治療可防止肝硬化和終末期肝病的發(fā)生[2]。AIH的確切病因尚不清楚，但越來越多的研究證據(jù)表明，在特定的自身免疫生態(tài)系統(tǒng)中，遺傳易感性、血清趨化因子、分子模型學(xué)說和效應(yīng)與調(diào)節(jié)免疫之間的不平衡是AIH發(fā)展的關(guān)鍵性病理學(xué)因素[3]。白介素(interleukin，IL)-1家族成員是固有免疫的重要組成部分，IL-38是IL-1家族成員之一，位于2號染色體q12-14位置，在包括扁桃體、胎盤、心臟和大腦在內(nèi)的多種組織中均有表達(dá)，與自身免疫性疾病等多種疾病密切相關(guān)[4]。研究[5]顯示，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿IL-38水平顯著高于健康人，在活動期患者體內(nèi)水平更高，應(yīng)用IL-38干預(yù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠可明顯下調(diào)炎癥細(xì)胞因子表達(dá)，提示IL-38水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡有關(guān)，并可能通過抑制促炎細(xì)胞因子的生成而調(diào)節(jié)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生。β2糖蛋白I(β2-glycoprotein I，β2GPI)是一個(gè)大小為50 kDa的磷脂結(jié)合蛋白，位于17號染色體q23-24位置，具有兩種不同的構(gòu)象，主要在肝細(xì)胞中合成，血漿β2GPI水平可被檢測[6]。既往研究發(fā)現(xiàn)，β2GPI是自身免疫性疾病抗磷脂抗體綜合征中最重要的自身抗原[7]。此外，在抗磷脂抗體綜合征患者和系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血均可檢測到氧化低密度脂蛋白(oxLDL)-β2GPI復(fù)合體[8]。本研究檢測了AIH大鼠血清IL-38和β2GPI水平，并分析了其與肝組織病變的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動物、試劑與儀器 清潔級、雄性Wistar大鼠40只，12周齡，體質(zhì)量210～250 g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司【許可證號SCXK(京)：2020-0005】。飼養(yǎng)條件：溫度24±2℃，相對濕度50%～60%，12 h光照和12 h暗適應(yīng)處理，適應(yīng)性飼養(yǎng)2 w。弗氏完全佐劑(北京Solarbio科技有限公司)；水合氯醛(天津一方科技有限公司)；檢測血清IL-38的ELISA試劑盒(上海仁捷生物科技有限公司)；檢測血清β2GPI 的ELISA試劑盒(美國Ebioscience公司)；低溫冰箱(青島海爾公司)。

1.2 AIH大鼠模型的建立 將弗氏完全佐劑2 mg與肝細(xì)胞特異性脂蛋白1:1混勻，取0.2 ml腹腔注射，1次/10 d，連續(xù)注射2次；取肝細(xì)胞特異性脂蛋白1 mg腹腔注射，1次/w，注射3次，再改為1次/m，注射3次。于末次注射后的第3 d，取肝細(xì)胞特異性脂蛋白2 mg腹腔注射，加強(qiáng)免疫1次。3 d后，隨機(jī)取3只大鼠處死，行肝組織病理學(xué)檢查，顯示大鼠肝細(xì)胞變性壞死明顯，出現(xiàn)中度碎屑樣壞死和橋接壞死，小葉內(nèi)有纖維間隔形成，表明AIH大鼠模型制作成功。在建模成功后，使用水合氯醛麻醉大鼠，開腹并于腹主動脈取血，立即收集于抗凝管中，靜置，離心，置于-20℃冰箱。同時(shí)，取大鼠肝組織，行病理學(xué)檢查[9]，肝組織表現(xiàn)為肝細(xì)胞變性，匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤、小葉結(jié)構(gòu)完整、伴或者不伴局限性碎屑樣壞死、血管點(diǎn)狀或者灶狀壞死或者出現(xiàn)凋亡小體，為輕度AIH；肝細(xì)胞變性，匯管區(qū)明顯血管壁炎癥細(xì)胞浸潤、小葉炎癥明顯、存在中度碎屑樣壞死、出現(xiàn)融合性壞死或者存在少數(shù)橋接壞死，形成纖維間隔，為中度AIH；匯管區(qū)血管壁彌漫性炎癥細(xì)胞浸潤、小葉結(jié)構(gòu)紊亂、伴隨有嚴(yán)重的碎屑樣壞死、存在多數(shù)的橋接壞死，形成大量的纖維間隔，為重度AIH。

1.3 肝內(nèi)血管病變分級法[10]分為1級、2級和3級，其中1級：血管壁少量炎性細(xì)胞浸潤，僅有血管點(diǎn)狀破壞，纖維化區(qū)血管≤5個(gè)，匯管區(qū)或炎癥區(qū)1～3個(gè)血管被阻塞；2級：血管壁炎性細(xì)胞浸潤介于1～3級，血管點(diǎn)狀破壞介于1～3級，匯管增生介于1～3級，血管阻塞介于1～3級；3級：血管壁彌漫性炎性細(xì)胞浸潤，血管壁大部分被破壞，匯管區(qū)和纖維化區(qū)血管≥20個(gè)，匯管區(qū)或炎癥區(qū)或纖維化區(qū)血管阻塞>5個(gè)。

1.4 大鼠血清IL-38和β2GPI水平檢測 采用ELISA法。

2 結(jié)果

2.1 不同肝組織病變的AIH大鼠血清IL-38和β2GPI水平比較 重度AIH大鼠血清IL-38水平顯著低于(P<0.05)，而血清β2GPI水平顯著高于輕度或中度AIH大鼠(P<0.05)，中度AIH大鼠血清IL-38水平顯著低于(P<0.05)，而血清β2GPI水平顯著高于輕度AIH大鼠(P<0.05，表1)。

表1 不同肝組織病變的AIH大鼠血清IL-38和β2GPI水平比較

2.2 不同肝組織血管病變的AIH大鼠血清IL-38和β2GPI水平比較 隨著肝組織血管病變分級的增加，AIH大鼠血清IL-38水平逐漸降低，而β2GPI水平逐漸升高。3級肝組織血管病變的AIH大鼠血清IL-38水平顯著低于，而血清β2GPI水平顯著高于1級或2級AIH大鼠(P<0.05)，2級肝組織血管病變的AIH大鼠血清IL-38水平顯著低于(P<0.05)，而血清β2GPI水平顯著高于1級AIH大鼠(P<0.05，表2)。

表2 不同肝組織血管病變的AIH大鼠血清IL-38和β2GPI水平比較

3 討論

AIH是一種慢性炎癥性肝病，主要由自身免疫反應(yīng)攻擊所致，具有以淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤為主的炎癥性肝組織學(xué)特征，病情嚴(yán)重可進(jìn)一步導(dǎo)致肝纖維化，乃至肝硬化以及肝細(xì)胞癌，并最終導(dǎo)致肝功能衰竭[11,12]。盡管AIH致癌風(fēng)險(xiǎn)低于病毒性肝炎，但因AIH導(dǎo)致的肝硬化患者肝癌發(fā)生率為3.3%～5.1%，在一定程度上可能與疾病長期進(jìn)展有關(guān)[13]。因此，盡早對AIH進(jìn)行診斷，及時(shí)予以治療，對于促進(jìn)患者預(yù)后的良好轉(zhuǎn)歸至關(guān)重要。AIH的病因尚不明確，但遺傳和免疫調(diào)節(jié)失衡、自身抗體以及一些誘導(dǎo)因子所致的自身免疫反應(yīng)不耐受均可能誘導(dǎo)疾病的發(fā)生。IL-38和β2GPI與系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性炎癥性疾病有關(guān)。因此，本研究通過建立AIH大鼠模型，檢測了AIH大鼠血清IL-38和β2GPI水平，并分析其與肝組織病變的關(guān)系。

IL-38是一種新發(fā)現(xiàn)的IL-1家族細(xì)胞因子，可在多種組織中表達(dá)，并由外周血單個(gè)核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞、B細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和各種免疫細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌[14]。報(bào)道[15]稱，IL-38通過與多種受體，如IL-36受體(IL-36 receptor，IL-36R)、IL-1受體輔助性蛋白1(IL-1 receptor accessory protein-like 1，IL-1RAPL 1)和IL-1受體1(IL-1 receptor 1，IL-1R1)結(jié)合而發(fā)揮抗炎作用，從而阻斷與其他促炎細(xì)胞因子的結(jié)合，并抑制下游信號通路，從而調(diào)節(jié)T細(xì)胞、外周血單個(gè)核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的活化和功能發(fā)揮，最終抑制輔助性T細(xì)胞(T helper cells，Th)17的成熟，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Treg)的增殖。最近的研究[16]表明，IL-38在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、原發(fā)性干燥綜合征、炎癥性腸病、化膿性汗腺炎、強(qiáng)直性脊柱炎、青光眼等炎癥性自身免疫性疾病患者異常表達(dá)，提示IL-38可能是預(yù)測炎癥性自身免疫性疾病發(fā)展和炎癥性自身免疫性疾病治療轉(zhuǎn)歸的潛在的生物標(biāo)志物。β2GPI為主要在肝組織合成的磷脂結(jié)合蛋白，在體內(nèi)可與磷脂結(jié)合，進(jìn)而參與凝血功能發(fā)揮和凋亡機(jī)制的進(jìn)行[17]。研究[18]發(fā)現(xiàn)，β2GPI與膜Toll樣受體直接發(fā)生相互作用，β2GPI及其抗體復(fù)合物通過Toll樣受體誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞的活化和促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。β2GPI是抗磷脂抗體綜合征患者體內(nèi)最重要的自身抗原[19]。另外，β2GPI還可能與乙型肝炎病毒感染、肝硬化和肝細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān)[20,21]。

本研究結(jié)果顯示，不同嚴(yán)重程度的肝組織病變AIH大鼠血清IL-38和β2GPI水平存在顯著性差異。重度AIH大鼠血清IL-38水平顯著低于輕度或中度AIH大鼠，而血清β2GPI水平顯著高于輕度或中度AIH大鼠，且中度AIH大鼠血清IL-38水平顯著低于輕度AIH大鼠，血清β2GPI水平顯著高于輕度AIH大鼠，表明AIH大鼠肝組織病變嚴(yán)重程度與其血清IL-38和β2GPI水平有關(guān)。肝組織病變越嚴(yán)重，血清IL-38水平越低，而β2GPI水平越高。此外，本研究結(jié)果還顯示，嚴(yán)重血管病變的AIH大鼠血清IL-38水平顯著低于輕度AIH大鼠，而血清β2GPI水平顯著高于輕度血管病變的AIH大鼠；肝組織血管病變3級的AIH大鼠血清IL-38水平顯著低于1級或2級AIH大鼠，而血清β2GPI水平顯著高于1級或2級AIH大鼠，肝組織血管病變2級AIH大鼠血清IL-38水平顯著低于1級AIH大鼠，而β2GPI水平也顯著高于1級AIH大鼠，表明AIH大鼠血清IL-38水平隨著肝組織炎癥分級和血管病變分級的加重而降低，而血清β2GPI水平隨著肝組織炎癥分級和血管病變分級的加重而升高。故我們認(rèn)為，AIH大鼠血清IL-38和β2GPI水平升高與其肝組織病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)，血清IL-38和β2GPI水平可能是反映AIH肝損傷的良好指標(biāo)。盡管我們還沒有證實(shí)血清IL-38和β2GPI水平變化是否為AIH肝損傷的誘因，但兩者水平的變化能夠在一定程度上預(yù)示肝組織病變的進(jìn)展。

綜上所述，隨著肝組織病變的加重，AIH大鼠血清IL-38水平隨之降低，而血清β2GPI水平隨之升高，為進(jìn)一步揭示AIH的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制奠定了理論基礎(chǔ)。監(jiān)測血清IL-38和β2GPI水平可能有助于對AIH病情進(jìn)行評估，進(jìn)而為及時(shí)采取干預(yù)方案提供科學(xué)的指導(dǎo)。本研究未檢測AIH動物肝組織兩種細(xì)胞因子表達(dá)及其基因水平變化情況，后續(xù)研究需對這些問題予以闡明，將為AIH發(fā)病機(jī)制研究提供更多的視角，從而為制定干預(yù)措施提供方向性的指導(dǎo)。