謝媛怡， 陳麗娜， 花敏瑞， 江文倩， 杜愛萍， 馬丹煒

（四川師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，四川 成都610101）

蕎麥（Fagopyrum esculentumMoench）屬于蓼科（Polygonaceae）蕎麥屬（Fagopyrum）一年生草本植物，富含氨基酸、蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)，具有極高的營養(yǎng)價(jià)值［1］，是一種耐旱和耐瘠的短季農(nóng)作物，在中國和世界均具有悠久的種植歷史［2］，有廣泛的食用、藥用以及飼用價(jià)值［3］.中國西南地區(qū)是蕎麥起源中心和多樣性中心，分布有豐富的蕎麥野生近緣種［4］.然而，西南地區(qū)的蕎麥種植區(qū)如四川省涼山彝族自治州深受農(nóng)田雜草危害，辣子草（Galinsoga parvifloraCav.）、土荊芥（Chenopodium ambrosioidesL.）、三葉鬼針草（Bidens pilosaL.）等外來入侵植物均嚴(yán)重威脅著蕎麥農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)，導(dǎo)致蕎麥產(chǎn)量降低或不穩(wěn)定［5］.因此，深入探討雜草對蕎麥生長的抑制機(jī)制有助于控制雜草的蔓延.新武器假說認(rèn)為，化感作用是外來植物成功入侵的機(jī)制之一［6］.研究表明，三葉鬼針草根系分泌物對井欄邊草（Pteris multifida）配子體的生長和發(fā)育具有抑制作用，其配子體的細(xì)胞出現(xiàn)死亡和破裂［7］；辣子草水浸提液顯著影響蠶豆幼苗的苗高、生物量和光合速率［8］，并且還會(huì)引起蠶豆氣孔保衛(wèi)細(xì)胞凋亡［9］；土荊芥根系分泌物、腐解物、揮發(fā)油等均具有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生氧化損傷和細(xì)胞損傷［10-11］，干擾光合作用關(guān)鍵基因的表達(dá)［12］，進(jìn)而抑制了受體植物的種子萌發(fā)和幼苗生長.但這3種雜草對蕎麥的化感作用及其差異卻鮮有報(bào)道.本研究采用培養(yǎng)皿濾紙法和盆栽試驗(yàn)，比較研究了3種惡性雜草水浸提液和凋落物對蕎麥種子萌發(fā)和幼苗生長的影響，旨在探討惡性雜草對蕎麥的化感作用，為蕎麥農(nóng)田的雜草控制和管理提供理論依據(jù).

1 材料與方法

1.1 供試材料蕎麥種子購于成都市五塊石種子市場；供體植物辣子草、三葉鬼針草采集于四川師范大學(xué)成龍校區(qū)附近荒地，土荊芥采集于四川省涼山彝族自治州冕寧縣麥地山；供試營養(yǎng)土購于四川省成都市龍泉驛區(qū)三圣鄉(xiāng)花卉產(chǎn)業(yè)園.

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 雜草凋落物的收集和水浸提液的制備 采集土荊芥、辣子草、三葉鬼針草地上部分，在陰涼通風(fēng)處陰干后，剪碎，作為凋落物備用；分別取剪碎的3種雜草置于三角瓶中，按1∶10的比例加入蒸餾水，混勻后置于搖床中，25℃、130 r／min震蕩48 h后，4層紗布過濾2次，得到質(zhì)量濃度為0.1 g／mL水浸提液母液，裝入棕色細(xì)口瓶中密封，4℃保存?zhèn)溆?試驗(yàn)時(shí)將母液的質(zhì)量濃度用蒸餾水稀釋為0.01、0.02、0.03、0.04和0.05 g／mL.

1.2.2 種子預(yù)處理 選取顆粒飽滿、大小均一的蕎麥種子，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的KMnO4浸泡10 min，蒸餾水清洗干凈，置于25℃暗培養(yǎng)箱中浸種24 h.

1.2.3 種子萌發(fā)和根長的測定 采用培養(yǎng)皿濾紙法［13］測定種子萌發(fā)指標(biāo)和根長.

種子萌發(fā)試驗(yàn)：將種子均勻置于墊有2層濾紙的培養(yǎng)皿（d＝90 mm）上，每皿20粒；分別加入5 mL不同濃度的水浸提液，以蒸餾水為對照，每處理重復(fù)6次；將培養(yǎng)皿置于25℃、80%濕度的培養(yǎng)箱中進(jìn)行暗培養(yǎng).以肉眼看到白色胚根為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)［14］，連續(xù)4 d統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽數(shù).計(jì)算種子發(fā)芽指標(biāo)［15］發(fā)芽率（germination rate，GR）、發(fā)芽勢（germination potential，GP）、發(fā)芽指數(shù)germination index，GI）、發(fā)芽速度指數(shù)（germination speed index，GSI）如下：

以上各式中，n為發(fā)芽數(shù)，（2）式中的n為第3 d的發(fā)芽數(shù)；N為種子總數(shù)；t為發(fā)芽時(shí)間；Gt為時(shí)間t內(nèi)的發(fā)芽數(shù)；X為每隔24 h發(fā)芽數(shù).

根長的測定：按1.2.2的方法浸種催芽，待種子露白后，均勻置于墊有2層濾紙的培養(yǎng)皿中（d＝90 mm），每個(gè)培養(yǎng)皿6粒，分別加入不同濃度的水浸提液5 mL，以蒸餾水為對照，每處理重復(fù)6次，在25℃、80%濕度的培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)3 d，第2 d和第3 d用直尺測定根長.

1.2.4 出苗率、苗高和生物量的測定采用盆栽試驗(yàn)測定出苗率、苗高和生物量.將供試營養(yǎng)土等量分裝在花盆（h＝7.8 cm，d＝10.5 cm）中，將1.2.2預(yù)處理的種子均勻播種在花盆中，每盆16粒；然后，分別將1、2、3、4和5 g凋落物均勻覆蓋在土壤表面，用等量蒸餾水澆透，以不覆蓋凋落物為對照，每處理重復(fù)6次；在25℃、80%濕度、光照時(shí)間12 h／d的條件下培養(yǎng).

出苗率的測定：穿過凋落物層的幼苗即被視為成功出苗［16］，每天記錄出苗數(shù)，直到不再出苗為止（本試驗(yàn)為播種第12 d），計(jì)算出苗率［15］：

有效運(yùn)用智能化技術(shù)，可以使電氣設(shè)備在運(yùn)作的過程當(dāng)中得到更好的監(jiān)管，確保電氣設(shè)備能夠始終保持穩(wěn)定運(yùn)行的狀態(tài)。在使用相應(yīng)的電氣設(shè)備前，工作人員一定要對其進(jìn)行認(rèn)真的調(diào)試，這樣做主要是為了在最大限度上避免電氣設(shè)備在后續(xù)運(yùn)作的過程中出現(xiàn)嚴(yán)重錯(cuò)誤，降低安全事故出現(xiàn)的頻率。通過應(yīng)用智能化技術(shù)，相關(guān)的工作人員就能夠進(jìn)行遠(yuǎn)程的調(diào)試，且調(diào)試的方向也會(huì)更加的明確，以此確保電氣設(shè)備可以一直正常的運(yùn)行。

苗高的測定：播種第14 d后用直尺測量幼苗地上部分高度，每處理隨機(jī)測量10株.

生物量的測定：幼苗生長4周后，收集所有植物材料，稱取鮮質(zhì)量（g）.隨后，置于烘箱中，105℃殺青，65℃烘干至恒重，稱取干質(zhì)量（g）.

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)根據(jù)朱峰等［17］的方法計(jì)算抑制率（inhibitory rate，IR）

參照Williamson等［18］的方法計(jì)算化感效應(yīng)指數(shù)（response index，RI）：

其中，C為對照值，T為處理值.其中，當(dāng)RI＞0時(shí)，表示促進(jìn)作用；當(dāng)RI＜0時(shí)表示抑制作用，RI的絕對值越大，化感效應(yīng)強(qiáng)度就越大；化感作用綜合效應(yīng)（synthesis effects，SE）用上述所有測試項(xiàng)目的RI算術(shù)平均值進(jìn)行評價(jià).

采用SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA）和多重比較分析（LSD），置信水平為95%.

2 結(jié)果與分析

2.1.1 水浸提液對種子萌發(fā)的影響 與對照相比，3種雜草水浸提液對蕎麥種子萌發(fā)都存在著顯著影響（P＜0.05）（表1），且隨著3種雜草水浸提液濃度的升高，蕎麥種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽速度指數(shù)、發(fā)芽指數(shù)均降低，表明3種雜草水浸提液對蕎麥種子萌發(fā)具有抑制作用，但抑制程度具有一定的差異.在0.05 g／mL水浸提液處理下，辣子草、三葉鬼針草、土荊芥水浸提液對發(fā)芽率的抑制率分別為74.23%、80.82%和82.35%；對發(fā)芽勢的抑制率分別為74.61%，81.82%和84.00%；對發(fā)芽速度指數(shù)的抑制率分別為73.25%、74.40%和81.23%；對發(fā)芽指數(shù)的抑制率為73.32%、79.63%和81.33%.不同雜草水浸提液對種子萌發(fā)化感抑制的綜合效應(yīng)表現(xiàn)為三葉鬼針草（0.58）＞土荊芥（0.53）＞辣子草（0.52）.

表1 3種惡性雜草水浸提液對蕎麥種子萌發(fā)的影響Tab.1 Effect of three noxious weed aqueous extracts on the germination of buckwheat seeds

2.1.2 凋落覆蓋物對出苗率的影響 不同惡性雜草凋落物覆蓋對蕎麥出苗率具有不同程度的影響，整體表現(xiàn)為隨著凋落物質(zhì)量增加出苗率逐漸降低的趨勢（表2），且不同處理之間存在顯著差異（P＜0.05）.

表2 3種惡性雜草凋落物覆蓋對蕎麥出苗率的影響Tab.2 Effect of three noxious weed litter cover on the seedling emergence rate of buckwheat

當(dāng)?shù)蚵湮锔采w量最大（5 g）時(shí)，辣子草、三葉鬼針草、土荊芥凋落物對蕎麥出苗率的抑制率分別為88.64%、91.45%和87.58%.由此可見，3種惡性雜草凋落物覆蓋影響了蕎麥種子的萌發(fā)過程，其作用過程與水浸提液的影響有一定的差異，綜合化感效應(yīng)由大到小依次為辣子草（0.74）＞三葉鬼針草（0.61）＞土荊芥（0.38）.

2.2 3種惡性雜草水浸提液對根長的影響3種惡性雜草水浸提液對根系生長影響有一定的差異（圖1），但均與對照差異顯著（P＜0.05）.隨著辣子草和三葉鬼針草水浸提液濃度對蕎麥根長的影響，整體表現(xiàn)為“低濃度促進(jìn)、高濃度抑制”的效應(yīng)，根長分別在0.02 g／mL辣子草水浸提液處理和0.01 g／mL三葉鬼針草水浸提液處理下達(dá)到峰值；而在土荊芥水浸提液作用下，蕎麥根長且呈現(xiàn)濃度依賴性下降，其中在0.05 g／mL土荊芥水浸提液處理下，蕎麥根出現(xiàn)壞死現(xiàn)象，未統(tǒng)計(jì)到根長.根據(jù)化感作用綜合效應(yīng)判斷，3種雜草對蕎麥根長的化感效應(yīng)強(qiáng)度依次是土荊芥（0.71）＞三葉鬼針草（0.41）＞辣子草（0.22）.

圖1 3種惡性雜草水浸提液對蕎麥根長的影響Fig.1 Effect of three noxious weed aqueous extracts on root length of buckwheat

2.3 凋落物覆蓋對苗高和生物量的影響3種惡性雜草凋落物覆蓋對苗高的影響整體表現(xiàn)為抑制效應(yīng)（表3），不同處理均與對照存在顯著性差異（P＜0.05），且具有質(zhì)量依賴性效應(yīng).當(dāng)覆蓋量最大（5 g）時(shí)，辣子草、三葉鬼針草和土荊芥凋落物對蕎麥地上部分生長的抑制率分別達(dá)54.32%、70.90%和25.61%.根據(jù)化感綜合效應(yīng)可知，以三葉鬼針草的化感效應(yīng)最強(qiáng)（0.55），辣子草次之（0.38），土荊芥最?。?.02）.

表3 3種惡性雜草凋落覆蓋物對蕎麥幼苗生長的影響Tab.3 Effects of three noxious weed litter cover on the growth of buckwheat seedlings

不同惡性雜草的凋落物覆蓋對幼苗生物量積累的影響不同（表3），但不同處理均與對照之間存在著顯著性差異（P＜0.05）.與對照相比，隨著辣子草和三葉鬼針草凋落物覆蓋量的增加，蕎麥的干質(zhì)量和鮮質(zhì)量呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢；而在土荊芥凋落物影響下，蕎麥生物量整體表現(xiàn)為下降的趨勢.當(dāng)?shù)蚵湮锔采w量最大（5 g）時(shí)，辣子草、三葉鬼針草和土荊芥凋落物覆蓋對蕎麥干質(zhì)量的抑制率分別為47.83%、39.13%和26.09%，對鮮質(zhì)量的抑制率分別為27.91%、39.53%和25.71%.根據(jù)化感綜合效應(yīng)來看，三種雜草凋落物覆蓋對蕎麥生物量積累以土荊芥為最大（0.24），辣子草次之（0.12），三葉鬼針草最小（0.08）.

2.4 3種雜草化感效應(yīng)的比較化感作用綜合效應(yīng)分析表明，3種雜草對蕎麥的化感效應(yīng)具有一定的差異，整體表現(xiàn)為三葉鬼針草＞辣子草＞土荊芥.蕎麥生長的不同階段和不同生長部位對雜草化感作用的敏感性不同，其中以種子萌發(fā)過程受影響最大，導(dǎo)致出苗率較低；在幼苗生長階段，雜草化感作用對根系生長大于地上部分生長，而生物量積累受到的影響比其他指標(biāo)小.

3 討論

3.1 3種惡性雜草對蕎麥的化感效應(yīng)植物釋放的化感物質(zhì)通過多種途徑從植物表面轉(zhuǎn)移到土壤中，當(dāng)積累到一定濃度后就會(huì)對周圍植物產(chǎn)生化感作用［19］.種子萌發(fā)是植物完成生活史或種群繁衍的先決條件，除了受種子活力、壽命、激素水平等內(nèi)在因素影響以外，種子萌發(fā)還受多種環(huán)境因素影響［20］.本研究結(jié)果顯示，3種惡性雜草釋放到環(huán)境中的化感物質(zhì)，作為環(huán)境因素之一強(qiáng)烈抑制了蕎麥的種子萌發(fā)過程，導(dǎo)致出苗率降低.發(fā)芽速度降低會(huì)降低植物在群落中的豐富度，發(fā)芽勢降低導(dǎo)致出苗延后，將嚴(yán)重影響植物對地上和地下資源的競爭能力［21］.陳峰等［22］等研究表明，化感物質(zhì)可通過抑制胚生長、影響細(xì)胞結(jié)構(gòu)、干擾種子中活性氧的產(chǎn)生與積累、打破種子內(nèi)源激素平衡等方式調(diào)控種子萌發(fā)；根是植物吸收水分和營養(yǎng)物質(zhì)的重要器官，其生理狀態(tài)直接反應(yīng)周圍環(huán)境狀況［23］.植物釋放的化感物質(zhì)以某些有毒害物質(zhì)的前體存在，在一定條件下轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)，對周圍植物產(chǎn)生抑制作用［24］.本研究結(jié)果表明，3種惡性雜草的水浸提液對蕎麥根的生長具有顯著的抑制作用.且出現(xiàn)明顯的受害癥狀，如根加粗、呈黃褐色甚至壞死，這一癥狀隨著處理時(shí)間和濃度的增加而加劇，這與杜鳳移等［25］研究結(jié)果相似.許多化感物質(zhì)都具有細(xì)胞毒性，化感物質(zhì)對紡錘絲的形成［26］和細(xì)胞壁成分如纖維素的合成［27］均具有抑制效應(yīng)，從而抑制了根尖細(xì)胞的分裂和伸長，導(dǎo)致根變短變粗.

辣子草、三葉鬼針草和土荊芥為一年生或多年生草本植物，每年均會(huì)產(chǎn)生大量的凋落物.凋落物分解過程中，既能產(chǎn)生植物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，也能產(chǎn)生有害的中間代謝產(chǎn)物［28］.此外，分解過程中釋放出來的化感物質(zhì)通過改變受體的水分吸收、激素代謝、呼吸作用、光合作用、酶功能、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及基因表達(dá)等多種生理過程，從而抑制植物生長［29］，如入侵植物假臭草（Praxelix clematidea）［30］和紫莖澤蘭（Eupatorium adenophorum）［31］的凋落物

能對周圍植物的生長產(chǎn)生抑制效應(yīng).本研究中，3種雜草的凋落物覆蓋明顯抑制了蕎麥的出苗、苗高、干質(zhì)量和鮮質(zhì)量，且表現(xiàn)為質(zhì)量依賴效應(yīng)，表明3種惡性雜草凋落覆蓋物可能影響了土壤中蕎麥種子萌發(fā)出苗過程中關(guān)鍵酶的合成或能量的產(chǎn)生［32］，從而抑制出苗，影響蕎麥幼苗的物質(zhì)積累.蕎麥生長的不同階段對雜草化感作用的敏感性不同，本研究結(jié)果表明，種子萌發(fā)受影響最大，根系生長次之，幼苗地上部分的生長相對較弱.因此，在蕎麥播種之前，應(yīng)充分清除雜草及其殘株，以免雨水淋溶或殘株腐解釋放的化感物質(zhì)抑制種子萌發(fā)、導(dǎo)致出苗困難.

3.2 3種惡性雜草對蕎麥化感效應(yīng)的差異由于不同植物種類所產(chǎn)生的次生代謝物質(zhì)具有較大的差異，因此，生長在同一個(gè)生態(tài)系統(tǒng)的不同植物，對同一種受體產(chǎn)生的化感效應(yīng)具有較大的差異.尾葉桉（Eualyptus urophyllaS.T.Blakely）水浸提液濃度與走馬胎（Ardisia gigantifoliaStapf）的株高、根長、生物量呈負(fù)相關(guān)，而與濕地松（Pinus elliottiiEngelm.）、杉 木［Cunninghamia lanceolate（Lamb.）Hook.］呈“低促高抑”關(guān)系［33］；在藥煙輪間作農(nóng)田中，玄參（Scrophularia ningpoensis）、川明參（Chuanminsnshen violaceum）的水浸提液對煙草（Nicotiana tabacum）幼苗生長的影響具有明顯差異，前者具有“低濃度促進(jìn)、高濃度抑制”效應(yīng)，后者則為促進(jìn)效應(yīng)［34］.同時(shí)，植物的化感效應(yīng)也會(huì)隨化感物質(zhì)釋放的途徑而變化，如麻風(fēng)樹（Jatropha curcas）的葉水溶性化感物質(zhì)、葉腐解液和葉揮發(fā)性物質(zhì)對紫莖澤蘭化感作用依次減弱［35］.本研究結(jié)果表明，3種惡性雜草的水浸提液對蕎麥種子萌發(fā)和根長的化感抑制效應(yīng)表現(xiàn)為三葉鬼針草＞辣子草＞土荊芥；不同雜草的凋落物覆蓋對蕎麥生長的影響與水浸提液的影響具有一定的差異，表現(xiàn)為化感效應(yīng)表現(xiàn)為辣子草＞三葉鬼針草＞土荊芥.推測其原因一是本研究中水浸提液作用部位主要是地下部分，而凋落物處理測定的指標(biāo)偏重于地上部分，蕎麥不同部位對雜草化感作用的敏感性不同，二是3種惡性雜草凋落物在分解過程中，所釋放的化感物質(zhì)進(jìn)入土壤并參與復(fù)雜的土壤生態(tài)循環(huán)過程后，其存在形態(tài)、活性乃至生物學(xué)效應(yīng)均發(fā)生了變化［31］，但是變化規(guī)律尚待后續(xù)研究進(jìn)一步確認(rèn).