王歡歡，傅春妮，李元輝，趙方紅，劉麗娜，秦順義，馬吉飛

(天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津 西青 300384)

玉米赤霉烯酮(Zearelenone，ZEA)，又稱(chēng) F-2 毒素，由禾谷鐮刀菌屬等真菌所產(chǎn)生，是一種具有雌激素樣活性的植物激素，可抑制動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育，發(fā)揮生殖毒性[1-2]。據(jù)報(bào)道，ZEA對(duì)多種動(dòng)物都具有毒性作用，如豬、鼠和雞等[3-5]。殼聚糖硒是殼聚糖(Chitosan, CTS)和硒(Se)的有機(jī)化合物，可同時(shí)發(fā)揮殼聚糖和硒的雙重作用，具有提高機(jī)體免疫力、調(diào)節(jié)血糖代謝和抗氧化作用[6]。目前研究顯示，殼聚糖硒可拮抗ZEA對(duì)小鼠的毒性作用[7]，可緩解鉛對(duì)小鼠的毒性作用[8]，還可提高肉雞生長(zhǎng)性能和增強(qiáng)免疫力[9]。本試驗(yàn)通過(guò)向斷奶仔豬日糧中添加2.0 mg/(kg·bw)ZEA與0.30 mg/(kg·bw)殼聚糖硒(以Se計(jì))，研究殼聚糖硒拮抗ZEA對(duì)斷奶仔豬肝腎抗氧化功能、血清雌二醇(E2)含量和3β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶(3β-HSD)活性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 殼聚糖硒由天津農(nóng)學(xué)院獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室制備，硒含量為63.7 mg/kg；玉米赤霉烯酮，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，其純度不小于98%；總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量測(cè)定試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物科技有限公司；E2測(cè)定試劑盒，購(gòu)自北京華英生物技術(shù)研究所；肝臟3β-HSD活性測(cè)定試劑盒，購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與處理 28日齡健康的大白和長(zhǎng)白二元雜交斷奶雌性仔豬24頭，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機(jī)均分為4個(gè)組：空白對(duì)照組(C組)飼喂基礎(chǔ)日糧；玉米赤霉烯酮攻毒組(ZEA組)飼喂基礎(chǔ)日糧+2.0 mg/(kg·bw)ZEA；殼聚糖硒解毒組(ZEA-Se組)飼喂基礎(chǔ)日糧+2.0 mg/(kg·bw)ZEA+0.3 mg/(kg·bw)殼聚糖硒(以Se計(jì))；殼聚糖硒組(Se組)飼喂基礎(chǔ)日糧+0.3 mg/(kg·bw)殼聚糖硒(以Se計(jì))，飼養(yǎng)過(guò)程中仔豬自由采食、飲水，常規(guī)免疫和飼養(yǎng)管理，試驗(yàn)期為42 d。

1.3 測(cè)定指標(biāo)

1.3.1 肝腎抗氧化指標(biāo) 快速采集仔豬肝腎組織，并制成勻漿備用。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定肝腎及血清中T-AOC、T-SOD、GSH-Px活性及MDA含量。

1.3.2 血清E2含量 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每頭仔豬進(jìn)行前腔靜脈采血，靜置2 h，3 000 r/min離心10 min，分離血清。取分離血清測(cè)定血清中E2的含量。

1.3.3 肝臟3β-HSD活性 通過(guò)ELISA法測(cè)定仔豬肝臟3β-HSD活性，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 殼聚糖硒拮抗ZEA對(duì)仔豬肝臟抗氧化的影響 ZEA組仔豬肝臟GSH-Px、T-SOD和 T-AOC水平較C組均顯著或極顯著降低(P<0.05或P<0.01)，ZEA+Se組仔豬肝臟GSH-Px和T-SOD水平較ZEA組顯著升高(P<0.05或P<0.01)，ZEA+Se組仔豬肝臟T-AOC水平較ZEA組也有所升高，但差異不顯著(P>0.05)，且ZEA+Se組仔豬肝臟T-AOC水平與C組相比差異也不顯著(P>0.05)。ZEA組仔豬肝臟MDA含量顯著高于C組(P<0.05)，ZEA+Se組仔豬肝臟MDA含量較ZEA組也有所降低，但差異不顯著(P>0.05)，且ZEA+Se組仔豬肝臟MDA含量與C組相比差異也不顯著(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 殼聚糖硒拮抗ZEA對(duì)仔豬肝臟抗氧化的影響

2.2 殼聚糖硒拮抗ZEA對(duì)仔豬腎臟抗氧化的影響 ZEA組仔豬腎臟GSH-Px和 T-AOC水平較C組均顯著降低(P<0.05)，ZEA+Se組仔豬腎臟GSH-Px水平較ZEA組顯著升高(P<0.05)，ZEA+Se組仔豬腎臟T-AOC水平較ZEA組也有所升高，但差異不顯著(P>0.05)，且ZEA+Se組仔豬腎臟T-AOC水平與C組相比差異也不顯著(P>0.05)。ZEA組仔豬腎臟MDA含量顯著高于C組(P<0.05)，ZEA+Se組仔豬腎臟MDA含量較ZEA組也有所降低，但差異不顯著(P>0.05)，且ZEA+Se組仔豬腎臟MDA含量與C組相比差異也不顯著(P>0.05)。Se組仔豬腎臟T-SOD和GSH-Px活性顯著高于C組(P>0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2 殼聚糖硒拮抗ZEA對(duì)仔豬腎臟抗氧化的影響

2.3 殼聚糖硒拮抗ZEA對(duì)仔豬血清E2含量的影響 ZEA組仔豬血清雌二醇含量較C組和Se組均極顯著降低(P<0.01)，ZEA+Se組仔豬血清E2含量較ZEA組也有所升高，但差異不顯著(P>0.05)，且ZEA+Se組仔豬血清E2含量與C組相比差異也不顯著(P>0.05)。見(jiàn)圖3。

圖3 殼聚糖硒拮抗ZEA對(duì)仔豬血清E2含量的影響

2.4 殼聚糖硒拮抗ZEA對(duì)仔豬肝臟3β-HSD活性的影響 ZEA組仔豬肝臟3β-HSD活性較C組顯著升高(P<0.05)，ZEA+Se組仔豬肝臟3β-HSD活性較ZEA組均極顯著降低(P<0.01)，且與C組和Se組均無(wú)顯著差異(P>0.05)。見(jiàn)圖4。

圖4 殼聚糖硒拮抗ZEA對(duì)仔豬肝臟3β-HSD活性的影響

3 討論

肝臟是動(dòng)物機(jī)體中新陳代謝的主要器官，具有解毒、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)和造血等功能[10]。腎臟則是機(jī)體用以清除代謝產(chǎn)物并重吸收水分及其他有用物質(zhì)的器官，確保機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[10]。ZEA進(jìn)入機(jī)體經(jīng)胃腸道吸收后，肝臟和腎臟均可代謝 ZEA，并可通過(guò)肝腸循環(huán)和膽汁排泄等途徑將ZEA經(jīng)尿液排出[11]。氧化損傷是ZEA發(fā)揮毒性作用的主要途徑之一。ZEA可造成多種動(dòng)物的氧化損傷，包括肉雞[5]、小鼠[10,12]和斷奶小母豬[3]等。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，ZEA能顯著降低肝腎的T-AOC、T-SOD和GSH-Px，顯著升高M(jìn)DA含量，表明ZEA造成了斷奶仔豬肝腎的氧化應(yīng)激，與上述研究結(jié)果一致；添加殼聚糖硒后可升高GSH-Px、T-SOD和T-AOC，降低MDA含量，并與對(duì)照組無(wú)顯著差異，表明殼聚糖硒拮抗ZEA發(fā)揮了抗氧化作用。本試驗(yàn)Se組的肝腎活性顯著或極顯著高于C組，可能是由于硒作為GSH-Px的活性中心，增強(qiáng)了GSH-Px活性，發(fā)揮了抗氧化作用。

ZEA與內(nèi)源雌激素17β-雌二醇(E2)結(jié)構(gòu)相似，可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合雌激素受體(ERs)，產(chǎn)生類(lèi)雌激素作用[13]。ZEA在不同動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物不一致，在豬體內(nèi)以α-ZOL為主，而在小鼠體內(nèi)以β-ZOL 為主，且α-ZOL雌激素活性最大，ZEA次之，β-ZOL雌激素活性最小，因此豬對(duì)ZEA極其敏感[13]。據(jù)報(bào)道，9.4 μmol/L ZEA可增加豬卵巢顆粒細(xì)胞分泌孕酮，但不影響E2的含量[14]；董雙等研究結(jié)果表明，25、50 mg/(kg·bw)和75 mg/(kg·bw)ZEA均可降低雄性小鼠血清睪酮和E2含量，表明ZEA可能通過(guò)干擾生殖激素間的相互調(diào)節(jié)或轉(zhuǎn)化，或通過(guò)其他途徑對(duì)雄性生殖功能造成損害[15]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，添加ZEA可降低血清E2含量，表明ZEA可引起仔豬內(nèi)分泌紊亂，與上述研究結(jié)果不一致，可能是與動(dòng)物種類(lèi)、飼養(yǎng)環(huán)境以及性別不同有關(guān)。添加殼聚糖硒后，仔豬血清E2含量有所上升，與對(duì)照組無(wú)顯著差異，表明殼聚糖硒緩解了ZEA引起的內(nèi)分泌紊亂。

羥基類(lèi)固醇脫氫酶(HSD)是催化ZEA還原形成α-ZOL和β-ZOL的限制性酶[13]，在ZEA的代謝過(guò)程中起重要作用。王定發(fā)等研究結(jié)果表明，添加0.5 mg/(kg·bw)和2 mg/(kg·bw)ZEA可使母豬肝臟組織中的3β-HSDmRNA表達(dá)增加[16]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，添加ZEA可顯著增加仔豬肝臟組織中的3β-HSD 活性，與王定發(fā)等研究結(jié)果一致，添加殼聚糖硒后3β-HSD 活性明顯降低，表明殼聚糖硒可拮抗ZEA的毒性作用。

4 結(jié)論

殼聚糖硒可拮抗ZEA引起的肝腎氧化損傷，發(fā)揮抗氧化作用；殼聚糖硒可拮抗ZEA增加血清E2含量并降低仔豬肝臟3β-HSD活性，緩解ZEA對(duì)仔豬的毒性作用。