周 芬，吳義景，計 徐，吳 東

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所//畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230031)

抗菌肽是一類廣泛分布于自然界動植物和微生物當(dāng)中的小分子多肽[1]，具有廣譜的抗菌活性，有天然抗生素之稱[2]，是天然免疫系統(tǒng)的一個重要組成部分，被稱為“第二防御體系”[3]。本試驗研究不同水平抗菌肽對育雛、育成期蛋雞生長性能、血清免疫生化指標(biāo)以及腸道菌群的影響，為其作為飼料中抗生素替代物提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

15%金霉素預(yù)混劑由安徽某飼料有限公司提供；抗菌肽由河南某有限公司提供。

1.2 試驗動物與分組

試驗選用0日齡蛋雛雞360只，公母各半，隨機分為3組：抗生素對照組、抗菌肽低劑量組、抗菌肽高劑量組；每個組120只，設(shè)3個重復(fù)(圈)，每個重復(fù)40只(公母各半)；試驗期110 d。試驗分3個階段：蛋雞育雛期(0～42 d)、蛋雞育成前期(43～70 d)和蛋雞育成后期(71～110 d)。試驗材料具體添加量見表1。

表1 試驗分組情況

1.3 試驗日糧及飼養(yǎng)管理

試驗基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。試驗每個重復(fù)單圈飼養(yǎng)，按常規(guī)飼養(yǎng)管理及免疫程序進(jìn)行。

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1生長性能指標(biāo)測定

試驗雞在0日齡、42日齡、70日齡和試驗結(jié)束時進(jìn)行空腹稱量各重復(fù)雞體重和各重復(fù)飼料消耗量，統(tǒng)計各組平均日增重、日采食量和料增重比。

1.4.2血清免疫指標(biāo)測定

測定于試驗結(jié)束時，每重復(fù)選取1只體重相近的雞，翅靜脈采血，3 000 r/min離心15 min，分裝血清，于-20℃保存?zhèn)溆?；進(jìn)行血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量、總抗氧化能力(T-AOC)、血糖(GLU)、總蛋白質(zhì)(TP)、尿素氮(BUN)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT)含量的測定。

1.4.3腸道菌群的測定

每個重復(fù)選取1只雞，于無菌操作臺中取腸道內(nèi)容物0.5 g于10 ml的滅菌離心管中，加入無菌生理鹽水4.5 ml，用漩渦混合儀混勻后進(jìn)行10-5～10-9倍比稀釋，每個稀釋度3個重復(fù)。乳酸桿菌和大腸桿菌分別在MRS瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基購自杭州天和微生物試劑有限公司。細(xì)菌計數(shù)采用平板計數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計，最終以每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個數(shù)的對數(shù)lg(CFU/g)表示。

1.5 數(shù)據(jù)分析處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件ANOVA模塊進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，用Duncan法進(jìn)行多重比較，試驗結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同比例抗菌肽替代抗生素對育雛、育成期蛋雞生長性能的影響

由表3～表5可以看出,試驗各組平均日增重、料重比差異不顯著(P>0.05)。育雛期和育成前期平均日采食量各組間差異不顯著(P>0.05)。而在育成后期高劑量組雖然平均日采食量顯著高于抗生素組(P<0.05)，但料重比相對于抗生素組有降低趨勢(P>0.05)。

表3 不同比例抗菌肽替代抗生素對育雛、育成期蛋雞平均日增重的影響 g

表4 不同比例抗菌肽替代抗生素對育雛、育成期蛋雞平均日采食量的影響 g

表5 不同比例抗菌肽替代抗生素對育雛、育成期蛋雞料重比的影響

2.2 不同比例抗菌肽替代抗生素對育雛、育成期蛋雞血清免疫、生化指標(biāo)的影響

由表6可以看出，在育雛期各試驗組IgA含量相較于抗生素組顯著提高了20.11%、45.40%(P<0.05),IgG含量分別提高了16.66%、2.92%，但差異不顯著(P>0.05)；低劑量組IgM和T-AOC含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，高劑量組IgM和T-AOC含量雖有上升趨勢但差異不顯著(P>0.05)；抗生素組血糖含量比試驗組顯著高了9.92%和26.77%(P<0.05)；抗生素組總蛋白含量顯著低于各試驗組(P<0.05)，和各組相比分別低了10.69%、11.50%；抗生素組尿素氮含量顯著高于各試驗組(P<0.05)，和各組相比分別高了23.11%、17.31%；各組間谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著(P>0.05)。

表6 不同比例抗菌肽替代抗生素對育雛期蛋雞血清免疫、生化指標(biāo)的影響

由表7可以看出，在蛋雞育成前期各試驗組IgA含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，和抗生素組相比分別提高了13.98%、33.87%；各試驗組IgG含量比抗生素組分別提高了17.41%、1.12%、但僅低劑量組和抗生素組差異顯著(P<0.05)；各組間IgM含量差異不顯著(P>0.05)；各試驗組T-AOC含量比抗生素組分別提高了12.25%、22.22%，但僅高劑量組與抗生素組差異顯著(P<0.05)；各組之間血糖含量差異不顯著(P>0.05)；各試驗組總蛋白含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，和抗生素組相比分別提高了10.12%、11.02%；抗生素組尿素氮含量顯著高于各試驗組(P<0.05)，和各組相比分別高了22.94%、17.46%；試驗組和抗生素組相比谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著(P>0.05)。

表7 不同比例抗菌肽替代抗生素對育成前期蛋雞血清免疫生化指標(biāo)的影響

由表8可知，在育成后期各試驗組IgA含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，和抗生素組相比分別提高了17.80%、61.78%；各試驗組IgG含量比抗生素組分別顯著提高了17.97%、16.74%(P<0.05)；各組間IgM、T-AOC、血糖含量差異不顯著(P>0.05)；各試驗組總蛋白含量分別比抗生素組顯著上升了2.32%、5.01%(P<0.05)；抗生素組尿素氮含量顯著高于各試驗組(P<0.05)，和各組相比分別高了31.34%、29.93%；抗生素組谷草轉(zhuǎn)氨酶含量顯著高于各試驗組(P<0.05)，和各組相比分別高了14.57%、12.08%；各組間谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著(P>0.05)。

表8 不同比例抗菌肽替代抗生素對育成后期蛋雞血清免疫生化指標(biāo)的影響

2.3 不同比例抗菌肽替代抗生素對蛋雞腸道菌群的影響

由表9可以看出，和抗生素組相比，試驗組腸道大腸桿菌數(shù)有下降趨勢，分別下降了3.58%、10.47%，但差異不顯著(P>0.05)；試驗組和抗生素組腸道乳酸桿菌數(shù)差異不顯著(P>0.05)。

表9 不同比例抗菌肽替代抗生素對蛋雞微生物菌群的影響

3 討論

3.1 不同比例抗菌肽替代抗生素對育雛、育成期蛋雞生長性能的影響

穆洋等[4]發(fā)現(xiàn)抗菌肽能顯著提高肉雞的平均日增重并顯著降低料重比；宋瓊莉等[5]發(fā)現(xiàn)抗菌肽能顯著提高肉雞前期生長速度，并且對于整個生長期而言，其生長速度優(yōu)于抗生素組；喬恒鑫等[6]發(fā)現(xiàn)添加量為1.5%的抗菌肽粗提物能顯著提高白羽肉雞的平均日增重，降低料重比。本試驗中抗菌肽組的平均日增重和料重比與抗生素組對比差異不顯著，且在育成期抗菌肽組平均日增重比抗生素組有升高的趨勢，而料重比有下降趨勢。

3.2 不同比例抗菌肽替代抗生素對育雛、育成期蛋雞血清免疫生化指標(biāo)的影響

IgA、IgG、IgM這3種免疫球蛋白是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體，也是衡量免疫功能的重要指標(biāo)[7]。呂尊周等[8]在褐殼蛋雞日糧中添加抗菌肽發(fā)現(xiàn)血清中IgA、IgG、IgM含量均有不同程度的提高；朱隨亮等[9]發(fā)現(xiàn)抗菌肽分別與酸化劑和功能性寡糖組合的血清IgA含量顯著高于酸化劑與功能性寡糖組合，達(dá)到了替代抗生素的效果；吳東[10]在肉仔雞日糧中添加抗菌肽，與抗生素相比血清中IgA和IgG的含量都有了顯著提高；本試驗中在整個試驗期抗菌肽組血清中IgA含量都顯著高于抗生素組，IgM和IgG含量也有不同程度的提高，這和上述報道是基本一致的，表明抗菌肽能促進(jìn)機體合成免疫球蛋白，調(diào)節(jié)機體的免疫功能，提高機體免疫力，同時本試驗中抗菌肽組育雛期和育成前期總抗氧化能力顯著高于抗生素組，育成后期和抗生素組無顯著差異，也進(jìn)一步證明了抗菌肽相對抗生素而言抗氧化能力更為出色。

血清中總蛋白是機體蛋白質(zhì)的主要來源[11]，而BUN是衡量機體氨基酸平衡和蛋白質(zhì)利用率的敏感指標(biāo)[12]，它們在血清中的水平反映了機體對蛋白質(zhì)吸收利用及氨基酸代謝的情況。本試驗中，在整個試驗期抗菌肽組血清總蛋白含量都顯著高于抗生素組，尿素氮水平顯著低于抗生素組，也驗證了抗菌肽替代抗生素能更好的提高蛋雞對蛋白質(zhì)和氨基酸的利用率，這與劉洹兵等[13]、劉小龍等[14]的報道基本一致。谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶在肝臟細(xì)胞受到損傷時會隨著細(xì)胞破裂釋放到血液當(dāng)中[15]，本試驗中生長前期試驗組血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量與抗生素組差異不顯著，僅在育成后期試驗組谷草轉(zhuǎn)氨酶含量顯著低于抗生素組，從側(cè)面提示抗菌肽粗提物相對于抗生素其保護(hù)肝臟細(xì)胞、抗氧化能力更為突出。

3.3 不同比例抗菌肽替代抗生素對育雛、育成期蛋雞腸道菌群的影響

動物腸道菌群結(jié)構(gòu)的平衡，對于動物健康有著重要的意義[16]，大腸桿菌和乳酸桿菌均為蛋雞腸道內(nèi)的正常菌群，有研究表明抗菌肽可以有效抑制大腸桿菌等有害菌的生長[17]，本試驗中抗菌肽替代抗生素添加入蛋雞日糧中，其腸道中大腸桿菌有降低趨勢，也驗證了這一點，同時本試驗中抗菌肽組乳酸桿菌含量雖然與抗生素組差異不顯著，但是高劑量組有下降趨勢，這也可能是由于抗菌肽具有廣譜抗菌性[18]，過量抗菌肽對乳酸桿菌產(chǎn)生了抑制作用所致，但是綜合來看，抗菌肽替代抗生素還是在一定程度上能夠調(diào)節(jié)腸道微生物菌群的平衡。

4 結(jié)論

在育雛及育成期蛋雞日糧中添加抗菌肽替代抗生素，其生長性能有一定程度的改善；和抗生素相比，抗菌肽對機體的免疫球蛋白、蛋白水平、抗氧化能力都有一定程度的提高，尿素氮水平顯著降低；抗菌肽替代抗生素對蛋雞血清中血糖、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平基本無影響，對蛋雞腸道微生物菌群平衡有一定的改善作用。本試驗中日糧中添加100 g/t抗菌肽性價比較高。