王昌錦，林炳松，蘇君一，康占海，劉細(xì)平，陶 婧，徐 妍

(1.北京宇悅生物科技有限公司，北京 100085；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，河北保定 200020)

呋蟲胺(dinotefuran)是一種新煙堿類殺蟲劑，其 主要作用于昆蟲煙堿乙酰膽堿受體，影響昆蟲神經(jīng)傳遞系統(tǒng)使害蟲麻痹，從而發(fā)揮殺蟲作用。呋蟲胺主要用于玉米、小麥、水稻、果樹以及蔬菜的飛虱、粉虱、蚜蟲、蝽象、薊馬等害蟲的防治[1-2]。氯蟲苯甲酰胺(chlorantraniliprole)是杜邦公司開發(fā)的低毒、高效廣譜的魚尼丁受體殺蟲劑，對鱗翅目昆蟲有良好的控制效果，還能控制鞘翅目象甲科、葉甲科，雙翅目潛蠅科、煙粉虱等多種非鱗翅目害蟲[3-4]。目前呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺質(zhì)量控制分析檢測方法主要有液相色譜法或液質(zhì)聯(lián)用方法[5-8]，但關(guān)于呋蟲胺與氯蟲苯甲酰胺的混配制劑分析方法尚未見公開報(bào)道?；诖?，本文建立了利用高效液相色譜技術(shù)開展了50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑的質(zhì)量分析方法研究，旨在為該產(chǎn)品的質(zhì)量分析提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)，具有紫外檢測器和自動進(jìn)樣器；Agilent色譜工作站：采用島津UV-1800紫外可見分光光度計(jì)(島津公司)；GD410DP10L型超聲波清洗機(jī)(深圳市光點(diǎn)超聲波設(shè)備有限公司)。

1.2 試劑

呋蟲胺標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.3%(北京宇悅生物科技有限公司提供)；氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%(北京宇悅生物科技有限公司提供)；50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑(北京宇悅生物科技有限公司提供)；甲醇(色譜純)；水：新蒸二次蒸餾水。

1.3 高效液相色譜條件

采用Agilent 1260高效液相色譜儀，具有紫外檢測器和自動進(jìn)樣器；色譜柱：采用ZORBAX SB C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇+水(體積比70∶30)；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：245 nm；進(jìn)樣體積：5 μL。采用外標(biāo)法定量。在該色譜條件下，呋蟲胺和氯蟲苯甲酰胺的保留時(shí)間分別約為1.8 min和3.8 min?；旌蠘?biāo)樣及樣品的典型液相色譜圖見圖1和圖2。

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別稱取呋蟲胺標(biāo)準(zhǔn)品約0.05 g、氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品約0.01 g (精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻備用。

1.4.2 樣品溶液的配制

稱取 50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑試樣約0.12 g (精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，超聲溶解后，過0.45 μm有機(jī)濾膜，備用。

1.4.3 測定

按上述色譜條件，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰2針的相對響應(yīng)值變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測定。

1.4.4 計(jì)算

將測得的2針試樣溶液及其前后2針標(biāo)樣溶液中的呋蟲胺、氯蟲苯甲酰胺峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中各有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計(jì)算。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺峰面積的平均值，mAU·s；A2為試樣溶液中呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺峰面積的平均值，mAU·s；m1為呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動相的選擇

以不同比例的甲醇+水、乙腈+水作為流動相，對試樣進(jìn)行分離檢測，結(jié)果表明，選用乙腈和水作為流動相時(shí)分離時(shí)間長且峰型不對稱，當(dāng)選用甲醇和水的體積比為70∶30時(shí)，峰形對稱，分離效果理想，出峰時(shí)間適中，故最終選定流動相為甲醇+水(70∶30，體積比)。

2.1.2 檢測波長的選擇

通過紫外可見分光光度計(jì)UV-1800在190～900 nm進(jìn)行紫外掃描，呋蟲胺在210～270 nm有較大吸收，氯蟲苯甲酰胺在240～260 nm有較大吸收?？紤]溶劑、助劑對吸收的影響，以及呋蟲胺、氯蟲苯甲酰胺的峰高，最終選定以245 nm為檢測波長。

2.2 特異性的測定

本試驗(yàn)方法采用全波長紫外掃描檢測峰純度分析法來鑒別。呋蟲胺最小峰純度相似度為1.000 0，最小峰純度閾值為0.994 6，最小峰純度指數(shù)為正值。氯蟲苯甲酰胺最小峰純度相似度為1.000 0，最小峰純度閾值為0.999 9，最小峰純度指數(shù)為正值，說明樣品色譜峰中不含有雜質(zhì)。二者的標(biāo)樣液相色譜峰與試樣液相色譜峰出峰時(shí)間差均在1.0%以內(nèi)，如圖1和圖2所示。制劑中呋蟲胺和氯蟲苯甲酰胺的峰純度色譜圖如圖5和圖6所示。

2.3 線性相關(guān)性測定

按1.4.1節(jié)中方法配制不同質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液，在1.3節(jié)色譜條件下進(jìn)樣，每個(gè)質(zhì)量濃度重復(fù)進(jìn)樣2次，求其峰面積平均值。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。呋蟲胺的線性方程為y=16 345x-88 702(圖7)，相關(guān)系數(shù)(R2)為0.999 8。氯蟲苯甲酰胺的線性方程為y=15 612x- 134 932(圖8)，相關(guān)系數(shù)(R2)為0.999 1。

2.4 精密度測定

選取有代表性的50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑試樣，在上述色譜操作條件下平行測定5次，結(jié)果見表1?？梢姡幌x胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.078，變異系數(shù)為0.19%，氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.094，變異系數(shù)為0.93%。

表1 50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑精密度測定結(jié)果

2.5 準(zhǔn)確度測定

采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的試樣中，加入一定量的呋蟲胺、氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，在上述色譜操作條件下，測得2種有效成分的回收率，結(jié)果見表2?？梢?，呋蟲胺的平均回收率為99.94%，氯蟲苯甲酰胺的平均回收率為99.75%。

表2 50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑回收率測定結(jié)果

2.6 非分析物干擾的試驗(yàn)

準(zhǔn)確度的評價(jià)通常包含非分析物質(zhì)的干擾，因有效成分中的任何干擾物均會導(dǎo)致分析方法出現(xiàn)系統(tǒng)誤差。分析時(shí)應(yīng)同時(shí)測定不帶有效成份的空白樣品，或證明其無干擾。通過對溶劑(甲醇)、空白樣品(不含有效成分的助劑)、原藥等按分析方法1.3進(jìn)行分析，結(jié)果表明甲醇、2種原藥及助劑對分析均無干擾，因此使用本文的分析方法未受到非分析物干擾而影響測定。

3 結(jié) 論

本文采用HPLC建立了50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑中有效成分的質(zhì)量分析方法，該方法準(zhǔn)確度和精密度較高，線性關(guān)系良好，操作簡便、快速、準(zhǔn)確，適于該產(chǎn)品生產(chǎn)過程的質(zhì)量檢測與控制。