何柳，王云鵬，謝衛(wèi)紅，張毅

（湖北工業(yè)大學(xué)生物工程與食品學(xué)院，發(fā)酵工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，“111計(jì)劃”學(xué)科創(chuàng)新引智基地，湖北武漢430068）

艾蒿（Artemisia argyi Levl. et Van）又名艾草，艾蕭等，為菊科多年生草本植物，是中國傳統(tǒng)的天然植物資源。該植物作為藥物始載于《名醫(yī)別錄》[1]，味苦而辛，無毒，具有清熱止痰、溫經(jīng)止血等功效。我國艾蒿植物資源豐富，種類繁多，主要有蘄艾、贛艾、北艾、祁艾及海艾[2]，不同地區(qū)來源的艾葉微量元素含量相似，其中鉀、鈣、鎂、鐵含量較高[3,4]。艾葉為艾蒿的干燥成熟葉子，含有多糖類[5]、酚酸類[6]、黃酮類[7]、精油[8]、萜類[9]等多種活性物質(zhì)，具有抗氧化[10]、抑菌[11]、抗瘧藥[12]等功效，有較好的研究價值以及較廣泛的應(yīng)用。

目前，因食源性致病菌引起的食物中毒事件頻繁發(fā)生，食品腐敗現(xiàn)象普遍存在，金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素是引起急性中毒的原因，志賀氏菌引起的食物中毒在夏、秋兩季多見，中毒食品以冷盤為主。沙門氏菌極易引起人食物中毒，中毒食品以蛋類、肉類及奶類為主；這三種細(xì)菌為常見的食源性致病菌，對人和動物危害大。人工合成抑菌劑的使用會導(dǎo)致耐藥菌的產(chǎn)生[13]；以及慢性疾病的早期發(fā)生與人體內(nèi)部的抗氧化水平密切相關(guān)，經(jīng)人工合成的抗氧化劑可能致癌或者產(chǎn)生副作用。因此，一種安全、無毒的天然抗氧化劑、抑菌劑意義重大。

近年來，對天然植物活性成分的提取，一般采用水提法[14]、有機(jī)溶劑提取法[15]、酸堿提取法[16]；而對艾葉活性成分的提取，通常采用水提法[17]、醇提法[18]，酸提法未見報道。本研究以艾葉為原料，采用檸檬酸溶液和去離子水作為溶劑，得到艾葉酸提物和艾葉水提物；測各自的總黃酮、總多酚和多糖含量。比較兩種艾葉提取物對DPPH自由基、羥自由基及ABTS自由基的清除能力；再探究兩種艾葉提取物對金黃色葡萄球菌、志賀氏菌及沙門氏菌的抑菌效果，從而篩選出抗氧化活性較高、抑菌效果較好的艾葉提取物。以期為艾葉有效成分的提取提供技術(shù)支撐。此外，有關(guān)艾葉提取物的抑菌機(jī)理研究較少，本研究將從細(xì)胞膜完整性、菌體表面微觀結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)合成等方面來研究艾葉提取物的抑菌機(jī)理，為進(jìn)一步開發(fā)艾葉新型功能性產(chǎn)品提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

以湖北蘄春地區(qū)的艾蒿干燥葉子為原材料；以金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureusATCC 6538）、沙門氏菌（SalmonellaCMCC 21513）、痢疾志賀氏菌（SygassisCMCC(B) 51105）作為供試菌，由湖北省藥檢院贈與。

培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂或Luria-Bertani培養(yǎng)基。

試劑：檸檬酸、無水乙醇、甲醇、氯化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、2.5%戊二醛，均屬分析純；1,1-二苯-2-三硝苯肼（DPPH）（D807297），純度96%、2,2'-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）（A800764），純度98%，購自上海源葉生物科技有限公司；鈣離子試劑盒（C004-2-1），南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

KQ5200超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；R-1001VN旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；YM100立式壓力蒸汽滅菌器，上海三中醫(yī)療器械有限公司；ZXSD-B1270生化培養(yǎng)箱，上海智誠分析儀器制造有限公司；EPOCH酶標(biāo)儀，美國伯騰儀器有限公司；JSM-6390LV掃描電子顯微鏡，日本電子；Chemi XL1.4高靈敏度化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)，英國Syngene公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 兩種艾葉提取物的制備

艾葉水提物的制備：將干燥的艾葉采用高壓粉碎機(jī)粉碎，過200目篩，密封貯存?zhèn)溆?。?zhǔn)確稱取20 g艾葉樣品，加入600 mL的去離子水，浸泡過夜，先采用200 W超聲提取30 min后，再水浴加熱2 h，水浴溫度為80 ℃，趁熱紗布過濾，抽濾取上清液，真空冷凍干燥后，密封保存。

艾葉酸提物的制備：準(zhǔn)確稱取20 g艾葉，加入600 mL的去離子水，再用檸檬酸溶液調(diào)至pH 4.0，浸泡過夜；后續(xù)步驟與艾葉水提物相同。

1.3.2 總黃酮、總多酚及多糖含量的測定

1.3.2.1 總黃酮含量測定

采用亞硫酸鈉-硝酸鋁顯色法[19]測定總黃酮含量，精密吸取艾葉提取物0.5 mL，依次加入0.15 mL 5%NaNO2溶液，靜置6 min后加入0.15 mL 10%AlCl3·6H2O溶液，靜置5 min再加入2 mL 4% NaOH溶液，最后加入2.2 mL蒸餾水，使用酶標(biāo)儀測量510 nm處的吸光值以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，在0～0.0416 mg/mL濃度范圍內(nèi)，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=4.3693X-0.0003（R2=0.9992）。將結(jié)果換算為每克干基中所含的總黃酮相當(dāng)于蘆丁的毫克數(shù)（mg RE/g DW）。

1.3.2.2 總多酚含量測定

采用Folin-Ciocalteu法[20]測定總多酚含量，精密吸取艾葉提取物1 mL，依次加入1 mL Folin-Ciocalteu顯色劑及2 mL 12% Na2CO3溶液，用水定容至10 mL，室溫避光反應(yīng)1 h后，使用酶標(biāo)儀測量765 nm處的吸光值，以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，在0～0.015 mg/mL濃度范圍內(nèi)，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=38.681X+0.008（R2=0.9991）。將結(jié)果換算為每克干基中所含的多酚相當(dāng)于沒食子酸的毫克數(shù)（mg GAE/g DW）。

1.3.2.3 多糖含量測定

采用蒽酮-硫酸法[21]測定多糖含量，精密吸取艾葉提取物1 mL，再加入4 mL 0.2%蒽酮硫酸溶液，沸水浴10 min，冰水浴5 min。使用酶標(biāo)儀測量585 nm處的吸光值，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，在0～0.1 mg/mL濃度范圍內(nèi)，得到回歸方程為：Y=1.6081X-0.0003（R2=0.9993）。將結(jié)果換算為每克干基中所含的多糖相當(dāng)于葡萄糖的毫克數(shù)（mg DE/g DW）。

1.3.3 抗氧化能力測定

1.3.3.1 DPPH自由基清除能力的測定

DPPH自由基清除能力的測定參考周慶光等[22]、Chen等[22]方法，稍作修改。精密吸取不同質(zhì)量濃度的樣品溶液100 μL于96孔板中，分別加入0.2 mmol/L的DPPH-甲醇溶液100 μL；避光反應(yīng)30 min，使用酶標(biāo)儀測量517 nm處的吸光值?？瞻捉M以100 μL的去離子水代替樣品溶液，本底組為甲醇，抗壞血酸（Vc）用作陽性對照。

式中：

A0——空白管吸光度；

As——測定管吸光度；

Ac——測定管本底吸光度。

1.3.3.2 羥自由基清除能力的測定

羥自由基（·OH）清除能力的測定參照文獻(xiàn)[24]。精密吸取不同質(zhì)量濃度的樣品溶液1 mL，依次加入1 mL 9 mmol/L FeSO4溶液、1 mL 9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液、1 mL 9 mmol/L H2O2溶液，于37 ℃水浴30 min后，取出，精密吸取200 μL測定液于96孔板中，使用酶標(biāo)儀測定510 nm處吸光值。空白組為去離子水代替樣品溶液，本底用超純水代替H2O2溶液?？箟难幔╒c）用作陽性對照。

式中：

A0——空白管吸光度；

As——測定管吸光度；

Ac——測定管本底吸光度。

1.3.3.3 ABTS自由基清除能力的測定

ABTS自由基清除能力的測定參考文獻(xiàn)[25]。將7 mmol/L ABTS溶液和4.95 mmol/L過硫酸鉀溶液等體積混合，在室溫下避光反應(yīng)14 h后，用PBS溶液稀釋至OD734為0.70±0.02。精密吸取50 μL不同質(zhì)量濃度的樣品溶液于96孔板中，加入200 μL ABTS-過硫酸鉀溶液，混勻，室溫反應(yīng)6 min；使用酶標(biāo)儀測定734 nm處吸光值。抗壞血酸（Vc）用作陽性對照。

式中：

A0——空白管吸光度；

As——測定管吸光度；

Ac——測定管本底吸光度。

1.3.4 抑菌活性的測定

1.3.4.1 菌懸液的制備

分別將金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙門氏菌（Salmonella）、志賀氏菌（Sygassis）接種到Luria-Bertani培養(yǎng)基中，37 ℃搖床培養(yǎng)12 h，用Luria-Bertani培養(yǎng)基稀釋，使菌懸液濃度約為1×107CFU/mL，備用。

1.3.4.2 抑菌效果與最小抑菌濃度（minimum inhibition concentration，MIC）的測定

采用牛津杯法[26]對抑菌效果及MIC進(jìn)行測定。在無菌環(huán)境中，向含有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平皿中加入100 μL濃度為107CFU/mL的菌懸液，涂抹均勻，每個平皿等距放3個牛津杯（直徑為8 mm），每個牛津杯中加入200 μL不同質(zhì)量濃度的樣品溶液；以pH 4.0檸檬酸溶液為對照組，于37 ℃培養(yǎng)8～12 h后，測量抑菌圈大小。

1.3.5 抑菌機(jī)制的測定

1.3.5.1 抑菌動力學(xué)的測定

將菌懸液與樣品溶液的等體積混合，使樣品溶液終濃度分別為MIC、2×MIC，將混合物于（37 ℃、180 r/min）下孵育0、1、2、4、6、10、24 h。以pH 4.0檸檬酸溶液為對照組，用酶標(biāo)儀測量上清液的OD600值，并根據(jù)吸光度值繪制曲線[27,28]。

1.3.5.2 細(xì)胞膜通透性的測定

將菌懸液與樣品溶液的等體積混合，使樣品溶液終濃度為MIC，以pH 4.0檸檬酸溶液為對照組；將混合物于（37 ℃、180 r/min）下孵育0、1、2、4、6 h。離心（5000 g，10 min）取上清液；使用鈣離子試劑盒測量上清液的OD610值，并根據(jù)吸光度值繪制曲線[29]。

1.3.5.3 菌體顯微結(jié)構(gòu)的觀察

參照Zhou等[30]實(shí)驗(yàn)方法：將菌懸液與樣品溶液的等體積混合，使樣品溶液終濃度為MIC，對照組為pH 4.0檸檬酸溶液。將混合物于（37 ℃、180 r/min）下孵育8 h，離心（8000 g，15 min），收集細(xì)胞沉淀，用2.5%戊二醛溶液固定過夜，PBS清洗2次，再用梯度乙醇（30%、70%、90%、100%）脫水，離心取沉淀，加入0.5 mL無水乙醇溶液，真空冷凍干燥后，噴金處理，掃描電鏡觀察。

1.3.5.4 菌體蛋白質(zhì)合成的測定

采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）測定蛋白含量[31,32]。將1 mL艾葉酸提物與1 mL菌懸液等體積混合，置于（37 ℃、180 r/min）搖床中孵育6 h，對照組為pH 4.0的檸檬酸溶液；離心取沉淀，PBS重懸，再加入10 μL 5×蛋白Loading Buffer，沸水浴5～10 min，取出，4 ℃保存，備用。安裝好電泳裝置后，每孔3 μL點(diǎn)樣，調(diào)電壓至80 V開始電泳，待溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠后120 V跑至膠底，將膠塊放置純水中，搖床脫色兩次；直到條帶清晰后使用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)拍照記錄結(jié)果。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

采用excel統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次取其平均值；采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析（p<0.05表示差異顯著）；采用Origin 9.0軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 總黃酮、總多酚及多糖含量

由表1可知，艾葉酸提物與艾葉水提物中總黃酮、總多酚及多糖含量均具有顯著性差異（p<0.05）。艾葉酸提物中總黃酮、總多酚和多糖含量分別是艾葉水提物的38.64%、49.14%、113.73%；即艾葉酸提物中總黃酮、總多酚含量均低于艾葉水提物，但多糖含量高于水提物。李美萍[33]測得艾葉水提物中總黃酮含量為12±2.52 mg RE/g DW，總多酚含量為40±1.53 mg GAE/g DW，本研究艾葉水提物中總黃酮和總多酚含量比其高。

表1 兩種艾葉提取物的總黃酮、總多酚及多糖含量Table 1 Contents of total flavonoids, total phenols and amylose of two Artemisiae argyi extracts

2.2 體外抗氧化能力

2.2.1 DPPH自由基清除能力分析結(jié)果

如圖1所示，在2.5～80 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，兩種艾葉提取物的DPPH自由基的清除能力隨濃度的增加而增大。當(dāng)濃度為80 μg/mL時，艾葉水提物、艾葉酸提物和Vc對DPPH自由基清除率分別為91.40%、66.05%和96.28%，IC50值分別為33.10、54.52和6.25 μg/mL，對DPPH自由基清除能力大小依次為：Vc>艾葉水提物>艾葉酸提物。即艾葉水提物對DPPH的清除效果強(qiáng)于艾葉酸提物，這可能與水提物中含有更多的黃酮類及酚類化合物有關(guān)。

圖1 兩種艾葉提取物對DPPH自由基的清除能力Fig.1 DPPH radical scavenging ability of two Artemisiae argyi extracts

2.2.2 羥自由基清除能力分析結(jié)果

如圖2所示，在0.08～5.12 mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著濃度的增大，兩種艾葉提取物對·OH的清除能力也增大，呈現(xiàn)出劑量依賴性。Liu等[34]研究證實(shí)了樣品濃度與抗氧化活性具有顯著相關(guān)性。當(dāng)濃度為0.64 mg/mL時，艾葉水提物和酸提物的·OH清除率分別為18.37%和29.24%，遠(yuǎn)小于Vc在0.64 mg/mL時的·OH清除率（99.83%，p<0.01）。艾葉水提物、艾葉酸提物和Vc的·OH清除率IC50值分別為2.92、1.63和0.19 mg/mL，對羥自由基清除能力大小依次為：Vc>艾葉酸提物>艾葉水提物。這可能與艾葉酸提物中多糖含量較高有關(guān)，也可能是酸提物中含有其他活性物質(zhì)。

圖2 兩種艾葉提取物對羥自由基的清除能力Fig.2 Hydroxyl radical scavenging ability of two Artemisiae argyi extracts

2.2.3 ABTS自由基清除能力分析結(jié)果

如圖3所示，在0.08～5.12 mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，兩種艾葉提取物對ABTS自由基清除率隨濃度增加而增大，當(dāng)濃度為0.32 mg/mL時，艾葉水提物、艾葉酸提物和Vc的ABTS自由基清除率分別為90.22%、55.91%和99.71%；此濃度下，兩種艾葉提取物對ABTS自由基的清除率差異顯著（p<0.01）。艾葉水提物、艾葉酸提物和Vc的ABTS自由基清除率的IC50值分別為0.17、0.32和0.049 mg/mL，對ABTS自由基清除能力大小依次為：Vc>艾葉水提物>艾葉酸提物。這可能與水提物中含有更多的黃酮類及酚類化合物有關(guān)，與上述兩種艾葉提取物的DPPH自由基清除能力相同。

圖3 兩種艾葉提取物對ABTS自由基的清除能力Fig.3 ABTS radical scavenging ability of two Artemisiae argyi extracts

2.3 艾葉提取物的抑菌活性

由表2可知，兩種艾葉提取物抑菌效果存在顯著差異（p<0.05），艾葉水提物對3種食源性致病菌無明顯抑制作用，艾葉酸提物對3種食源性致病菌有顯著抑菌活性。

表2 艾葉提取物的抑菌圈直徑Table 2 Diameter of inhibition zone of Artemisiae argyi extracts

如圖4所示，艾葉酸提物對金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、沙門氏菌均有較強(qiáng)的抑制作用，且對照組無明顯抑制作用；可能是酸提物中含有特殊的活性成分，或者與酸提物中多糖類物質(zhì)含量較高有關(guān)。當(dāng)濃度為0.4 g/mL時，艾葉酸提物對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為18.47 mm，對沙門氏菌的抑菌圈直徑為15.11 mm，抑菌效果為：金黃色葡萄球菌>志賀氏菌>沙門氏菌；表明艾葉酸提液對革蘭氏陽性菌的抑菌效果強(qiáng)于革蘭氏陰性菌；可能與革蘭氏陰/陽性菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同有關(guān)。甘昌勝等人[17]表明艾葉水提液抑菌效果一般；毛跟年等人[35]表明野艾蒿水相組分沒有抑菌活性；與本研究結(jié)果一致。

圖4 艾葉酸提物的抑菌效果圖Fig.4 The antibacterial effect diagram of Artemisiae argyi acid extract

2.4 艾葉酸提物的抑菌機(jī)理

2.4.1 艾葉酸提物的最小抑菌濃度

基于兩種艾葉提取物的抑菌效果，進(jìn)一步探討了艾葉酸提物的最小抑菌濃度（MIC）及抑菌機(jī)制。由表3可知，艾葉酸提物對金黃色葡萄球菌、志賀氏菌的MIC均為0.1 g/mL，對沙門氏菌的MIC為0.2 g/mL，且抑菌效果隨艾葉酸提物濃度的增加而增加（p<0.05）。Yuan等[29]研究證明了抑菌效果與提取物濃度呈正相關(guān)。

表3 艾葉酸提物對細(xì)菌的最小抑菌濃度Table 3 MIC of the Artemisiae argyi acid extract on bacteria

2.4.2 艾葉酸提物的抑菌動力學(xué)結(jié)果

由圖5可知，當(dāng)艾葉酸提物作用細(xì)菌24 h后，MIC組、2×MIC組中3種細(xì)菌的OD600均小于對照組；與0 h相比，3種細(xì)菌的OD600均無明顯變化；表明MIC、2×MIC濃度的艾葉酸提物都能有效抑制金黃色葡萄球菌、沙門氏菌及志賀氏菌的生長繁殖。艾葉酸提物濃度越大，抑制效果越好。

圖5 艾葉酸提物對細(xì)菌的抑菌動力圖Fig.5 Antibacterial dynamics of Artemisiae argyi acid extract on bacteria

2.4.3 艾葉酸提物對致病菌細(xì)胞膜通透性的影響

Ca2+是維持細(xì)菌細(xì)胞膜滲透壓平衡的重要電解質(zhì)，細(xì)胞膜被破壞，會導(dǎo)致細(xì)菌體內(nèi)電介質(zhì)的泄露，上清液中Ca2+含量變化可反映細(xì)菌細(xì)胞膜通透性的改變[29]。如圖6所示，在0～6 h范圍內(nèi)，隨培養(yǎng)時間的增加，對照組中3種菌體上清液的OD610無明顯變化（p<0.05），表明菌體細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量保持穩(wěn)定，而1×MIC組OD610有顯著增大趨勢，說明上清液中Ca2+含量增加，上述結(jié)果表明艾葉酸提物對金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀氏菌的細(xì)胞膜都造成了不同程度的破壞，使細(xì)胞膜原有的功能降低或者喪失，流動性降低，通透性增加，細(xì)胞內(nèi)Ca2+等電解質(zhì)泄露。Zhang等[29]研究證實(shí)了Ca2+的釋放量與樣品濃度呈正相關(guān)。

圖6 艾葉酸提物對細(xì)菌體內(nèi)Ca2+含量的影響Fig.6 The effect of Artemisiae argyi acid extract on the content of Ca2+ in bacteria

2.4.4 艾葉酸提物對菌體細(xì)胞顯微特征的影響

如圖7所示，用艾葉酸提物處理過的細(xì)菌細(xì)胞壁形態(tài)與對照組相比，差異顯著。對照組中金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀氏菌細(xì)胞形態(tài)完整，表面光滑，分散均勻，細(xì)胞壁界限清晰；MIC組中3種致病菌形態(tài)不完整，菌體斷裂、破碎、殘缺、大量內(nèi)容物流出，由上述結(jié)果表明，艾葉酸提物能對金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀氏菌的細(xì)胞質(zhì)膜和細(xì)胞壁產(chǎn)生嚴(yán)重影響。

圖7 經(jīng)艾葉酸提物處理后細(xì)菌的掃描電鏡圖Fig.7 SEM of bacteria treated with Artemisiae argyi acid extract

2.4.5 艾葉酸提物對致病菌細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的影響

如圖8所示，經(jīng)艾葉酸提物處理過的細(xì)菌蛋白質(zhì)譜與對照組存在顯著差異。對照組（1、3、5）蛋白質(zhì)條帶清晰明亮、灰度很深；經(jīng)1×MIC艾葉酸提物處理后的蛋白質(zhì)條帶（2、4、6）整體灰度明顯變淺、模糊暗淡，表明蛋白質(zhì)濃度降低；這可能是因?yàn)榘~酸提物對菌體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成有抑制作用，也可能是因?yàn)槠湟种屏思?xì)菌的生長繁殖，而導(dǎo)致蛋白質(zhì)含量變少。Zhou等[30]利用SEM和SDS-PAGE證實(shí)了櫟木的纈草和貝殼對細(xì)胞質(zhì)膜的破壞性作用；與本研究的掃描電鏡和凝膠電泳結(jié)果相似，表明細(xì)胞膜和細(xì)胞壁的完整性是影響細(xì)菌正常生長和代謝的重要因素。

圖8 艾葉酸提物對細(xì)菌細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的影響Fig.8 Effect of Artemisiae argyi acid extract on protein synthesis of bacterial cells

3 結(jié)論

3.1 本研究表明艾葉水提物和酸提物的成分組成、體外抗氧化及抗菌作用存在差異，艾葉酸提物更具有作為天然食品防腐劑和抗氧化劑的潛力。艾葉酸提物中總黃酮、總多酚和多糖含量分別是艾葉水提物的38.64%、49.14%和113.73%。艾葉水提物和艾葉酸提物均有較強(qiáng)抗氧化能力，對DPPH自由基清除率的IC50值分別為33.10和54.52 μg/mL；對羥自由基清除率的IC50值分別為2.92和1.63 mg/mL；對ABTS自由基清除率的IC50值分別為0.17和0.32 mg/mL。

3.2 艾葉水提物無明顯抑菌效果，而艾葉酸提物具有顯著抑菌作用，對金黃色葡萄球菌、志賀氏菌的MIC均為0.1 g/mL，對沙門氏菌的MIC為0.2 g/mL；抑菌效果為：金黃色葡萄球菌>志賀氏菌>沙門氏菌。抑菌機(jī)制研究表明：艾葉酸提物可改變細(xì)胞膜的通透性，破壞細(xì)胞壁的完整性，抑制菌體蛋白質(zhì)的合成，從而破壞菌體細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)菌不能正常生長繁殖。

3.3 本研究為提取艾葉活性成分開辟了新途徑，克服了艾葉水提物無明顯抑菌效果的問題。后續(xù)我們將深入研究艾葉酸提物中具體的有效成分，進(jìn)一步分離純化，并鑒定艾葉酸提物中抗氧化及抗菌的活性物質(zhì)，從而更深層次揭示酸提法對艾葉活性功能的影響，為進(jìn)一步開發(fā)艾葉新型功能性產(chǎn)品提供理論依據(jù)。