徐金晶， 李金輝， 鈄凌娟*， 方莉

(1.金華市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 金華 321017； 2.浙江菇爾康生物科技有限公司，浙江 金華 321304)

靈芝作為傳統(tǒng)的滋補(bǔ)珍品，我國(guó)最早的藥學(xué)著作《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為有效無(wú)毒的“上上品”，也是《本草綱目》記載的唯一入五臟的本草，保健養(yǎng)生功效深入人心[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，靈芝在防治腫瘤、保肝護(hù)肝、改善睡眠等方面有良好的功效[2-5]。由于市場(chǎng)上靈芝種類和品種比較混亂，加上人為命名隨意，同名異種、同種異名的現(xiàn)象嚴(yán)重，為了永康靈芝產(chǎn)業(yè)的長(zhǎng)足發(fā)展，特開展適宜本地栽培的靈芝品種及配套培養(yǎng)基篩選的試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株為泰山仙芝、龍泉119、韓芝1號(hào)(引自浙江龍泉)。培養(yǎng)基材料有玉米粉、麥粒、棉籽殼、木屑、馬鈴薯、麩皮、葡萄糖、瓊脂、石膏。

1.2 方法

1.2.1 菌種篩選

將不同菌種接種在母種培養(yǎng)基上，考察其菌絲生長(zhǎng)情況，篩選三者中菌絲生長(zhǎng)速度快，長(zhǎng)勢(shì)好的品種。然后針對(duì)篩選出來(lái)的菌種，進(jìn)行原種培養(yǎng)基和栽培袋料培養(yǎng)基配方篩選試驗(yàn)。

1.2.2 母種制作

母種培養(yǎng)基。馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，木屑100 g，玉米粉50 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，水1 000 mL。將馬鈴薯切片加水煮沸30 min，4層紗布過(guò)濾后定容至1 000 mL，在濾液中加入瓊脂、玉米粉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和葡萄糖，調(diào)節(jié)pH至6.5，并不斷攪拌。分裝到18 mm×180 mm試管中，121 ℃滅菌0.5 h后擺斜面。分離接種3～5 d可見菌塊周圍長(zhǎng)出白色菌絲，并開始在培養(yǎng)基上蔓延生長(zhǎng)，去除雜菌污染的試管，10～15 h后可長(zhǎng)滿試管斜面，篩選出菌絲潔白濃密、氣生菌絲多的試管進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

菌株繼代培養(yǎng)基。棉籽殼培養(yǎng)基：棉籽殼100 g，麥麩10 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL。將棉籽殼、麥麩文火煮50 min，用4層紗布過(guò)濾后定容至1 000 mL，其他步驟同PDA培養(yǎng)基。將篩選出的分離菌種無(wú)菌分割成5 mm×7 mm的菌塊，將其接種到繼代培養(yǎng)基上，于25 ℃恒溫培養(yǎng)7～10 d可長(zhǎng)滿試管斜面，如此繼代培養(yǎng)2～3次，每次都去除雜菌污染的菌種，篩選出長(zhǎng)勢(shì)好的菌種，可作為栽培用的母種。

1.2.3 原種制作

原種培養(yǎng)基。T1為棉籽殼78%、麥麩20%、蔗糖1%和石膏1%；T2為雜木屑78%、麥麩20%、蔗糖1%和石膏1%；T3為玉米粒97%、蔗糖1%、石膏1%和碳酸鈣1%；T4為麥粒97%、蔗糖1%、石膏1%和碳酸鈣1%。

T1和T2的制作。將培養(yǎng)料混勻，按料∶水(m/V)=1∶1.5加水拌勻后裝入500 mL罐頭瓶，用聚丙烯薄膜封口，121 ℃滅菌1.5 h。

T3和T4的制作。分別將玉米粒和麥粒煮至無(wú)白心撈出稍晾干后加入其他材料拌勻后裝入500 mL罐頭瓶，用聚丙烯薄膜封口，121 ℃滅菌1.5 h。

原種瓶滅菌冷卻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)接入靈芝母種，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

1.2.4 栽培袋配方試驗(yàn)

配方Ⅰ：棉籽殼83%，麥麩15%，蔗糖1%，石膏1%。

配方Ⅱ：雜木屑83%，麥麩15%，蔗糖1%，石膏1%。

配方Ⅲ：棉籽殼45%，雜木屑38%，麥麩15%，蔗糖1%，石膏1%。

配方Ⅳ：將含水量在38%～45%的直徑10 cm的闊葉樹干截成15 cm的木段。

栽培袋料可用33 cm×17 cm×0.05 cm的聚丙烯塑料袋裝袋，121 ℃滅菌2 h。冷卻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)接入原種，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

采用大棚覆土栽培，將發(fā)菌完全的菌袋轉(zhuǎn)移至大棚覆土栽培，用鐵鍬以間距40 cm開深度為35 cm、直徑為15 cm的栽培穴，在挖好的坑內(nèi)撒入辛硫磷防蟲，將菌袋塑料袋去除，取出菌棒豎直放入坑內(nèi)，露出部分覆土，全部完成后打開噴灌設(shè)備進(jìn)行噴霧，使菌棒吸足水分。后期管理與傳統(tǒng)大棚靈芝管理相同[6]。

1.3 測(cè)量和觀察指標(biāo)

分別在第7天母種和原種測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，并觀察菌絲生長(zhǎng)勢(shì)，菌絲的生長(zhǎng)勢(shì)用“+”號(hào)表示，記錄菌絲長(zhǎng)滿瓶的時(shí)間。每個(gè)配方隨機(jī)各選100袋菌包采集子實(shí)體曬干，隨機(jī)選100袋菌包收集孢子粉，稱取質(zhì)量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用Excel 2010統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同靈芝菌種母種培養(yǎng)過(guò)程中菌絲比較

由表1可知，不同菌種在相同培養(yǎng)基及28 ℃下繼代培養(yǎng)7 d后，日均長(zhǎng)速對(duì)比為龍泉119>泰山仙芝>韓芝1號(hào)，菌絲長(zhǎng)勢(shì)龍泉119>韓芝1號(hào)>泰山仙芝。由此可見，龍泉119靈芝生長(zhǎng)速度最快，日均長(zhǎng)速達(dá)0.47 cm，菌絲長(zhǎng)勢(shì)最好，對(duì)應(yīng)的菌絲潔白、濃密、健壯。

表1 不同靈芝菌種母種培養(yǎng)過(guò)程中菌絲比較

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)龍泉119原種菌絲生長(zhǎng)的影響

由表2可知，不同配方培養(yǎng)基處理中，龍泉119原種菌絲日均長(zhǎng)速最快的是T4，為0.56 cm；其次是T3，而T1、T2較差。滿瓶時(shí)間最短的是T3，其次是T4，而T1、T2滿瓶時(shí)間較長(zhǎng)。在污染率方面，T4、T3高于T1、T2。

表2 不同原種培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)速度對(duì)比

2.3 不同栽培袋料配方對(duì)龍泉119產(chǎn)量的影響

由表3可知，4種栽培袋料生產(chǎn)配方的龍泉119靈芝子實(shí)體和孢子粉產(chǎn)量以配方Ⅳ為最高，其次是配方Ⅱ、Ⅲ，而配方Ⅰ最低。

表3 不同栽培袋料配方子實(shí)體、孢子粉產(chǎn)量比較

2.4 栽培袋料主料成本

當(dāng)前棉籽殼價(jià)格2.2元·kg-1，刨花、桑枝等廢棄木屑價(jià)格0.42元·kg-1，段木價(jià)格0.80元·kg-1，麩皮約2.2元·kg-1，糖約1.2元·kg-1，石膏約1元·kg-1。因此，栽培袋料主料成本排列順序?yàn)榕浞舰?Ⅲ>Ⅳ>Ⅱ。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)引進(jìn)泰山仙芝、龍泉119、韓芝1號(hào)3個(gè)靈芝菌種，龍泉119日均長(zhǎng)速和菌絲生長(zhǎng)勢(shì)都為三者中最好，菌絲潔白，濃密。針對(duì)龍泉119菌種，若生產(chǎn)原種數(shù)量不多，可用玉米粒培養(yǎng)基和麥粒培養(yǎng)基；若原種用量較多，建議采用棉籽殼和木屑作為培養(yǎng)基較適宜。栽培袋料配方隨著棉籽殼含量的減少，靈芝子實(shí)體和孢子粉產(chǎn)量逐漸提高，這可能與棉籽殼木質(zhì)素含量較低有關(guān)。棉籽殼83%+麥麩15%+蔗糖1%+石膏1%栽培成本最高，段木栽培產(chǎn)量最高，但是采用木屑作為袋料，成本最低，取材方便，可更好地利用農(nóng)業(yè)廢棄物，變廢為寶。因此，雜木屑83%+麥麩15%+蔗糖1%+石膏1%配方作為龍泉119栽培袋料配方適宜在本地推廣應(yīng)用。