胡小榮，王藝澤，樓芝英，胡 崗，周國光

（上海師范大學(xué)化學(xué)與材料學(xué)院，上海200234）

0 引言

近年來，中草藥提取物作為原料應(yīng)用于化妝品已成為化妝品研發(fā)新熱點(diǎn)之一.其中芍藥苷提取于毛茛科植物芍藥根，具有擴(kuò)張血管、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、抗炎抗?jié)儭⒔鉄峤獐d、利尿等作用［1-2］，常用于化妝品，可治療粉刺，并能延緩機(jī)體組織的衰老.葛根素是中藥葛根中分離的具有擴(kuò)冠作用的異黃酮類衍生物［3］，存在于豆科植物葛及野葛的根中，加入至化妝品中，能顯著抑制酪胺酶的催化活性，中斷黑色素氧化過程［4］，抑制黑色素的發(fā)生和形成，從而防止黃褐斑、日曬斑等色素沉積.目前報(bào)道的芍藥苷和葛根素檢測方法常見的有紅外色譜法［5］、毛細(xì)管電泳法［6］、高效液相色譜法［7］、液質(zhì)聯(lián)用法［8］等，但同時(shí)對芍藥苷和葛根素作檢測方法報(bào)道的不多.

本文作者通過甲醇提取、高效液相色譜（HPLC）分離、二極管陣列檢測器（DAD）檢測、外標(biāo)法定量，建立了一種對乳液和化妝水中的芍藥苷和葛根素同時(shí)檢測的快速、高效、準(zhǔn)確的方法，為化妝品產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督提供技術(shù)支持.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器和試劑

HPLC儀：Agilent 1260型，配DAD，美國安捷倫公司；超聲波清洗器：KH-500DE型，昆山和創(chuàng)超聲儀器有限公司；渦旋儀：NP-30S型，常州恩培儀器制造有限公司；電子天平：FB224型，感量0.000 1 g，上海舜宇恒平儀器有限公司.

甲醇、乙腈：購自安譜實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司，色譜純；氯化鈉、磷酸、乙醇：購自安譜實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司，分析純；芍藥苷、葛根素均為標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)不低于99.4%，購自上海詩丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司；一次性濾膜：0.45μm；實(shí)驗(yàn)用水為超純水，實(shí)驗(yàn)室自制；化妝水和乳液樣品由上海相宜本草化妝品有限公司提供.

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取0.01 g芍藥苷和葛根素標(biāo)準(zhǔn)品，置于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解，定容刻度，配成1 mg·mL-1的單標(biāo)溶液.再取這2種中草藥單標(biāo)溶液各1 mL，加入甲醇定容至10 mL，配成0.1 mg·mL-1的混標(biāo)溶液.-18℃保存，一周內(nèi)使用.

1.3 色譜條件

色譜柱：Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm i.d.）；檢測波長：芍藥苷取232 nm，葛根素取250 nm；流動相：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%磷酸水溶液與純乙腈的體積比V（0.1%磷酸水溶液）∶V（乙腈）=85∶15；流速：1 mL·min-1；色譜柱柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；外標(biāo)法定量.

1.4 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取1.000 g化妝品樣品（化妝水和乳液）于50 mL具塞離心管中，加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中乳液另加1 g氯化鈉破乳.加入10 mL甲醇，震蕩，搖勻，室溫超聲30 min（280 W，40 kHz），取出放冷，加甲醇至刻度，搖勻，過0.45μm濾膜，待測.

加標(biāo)樣品的制備和定量：分別在1.000 g樣品中添加500μL和80μL的0.1 mg·mL-1的混標(biāo)溶液，進(jìn)行上述方法處理，制成50μg·g-1和8μg·g-1加標(biāo)樣，分別用經(jīng)過0.1 mg·mL-1的混標(biāo)溶液稀釋至5μg·mL-1和0.8μg·mL-1的混標(biāo)進(jìn)行外標(biāo)法定量.

2 結(jié)果與討論

2.1 提取條件優(yōu)化

目前芍藥苷和葛根素常用的提取溶劑為甲醇、乙醇、甲醇水溶液和乙醇水溶液［9-11］.通過對加標(biāo)樣目標(biāo)物的檢測發(fā)現(xiàn)，甲醇具有最佳的回收率.嘗試回流提取、索氏提取和超聲提取，分別測試不同提取時(shí)間下的目標(biāo)物回收率，發(fā)現(xiàn)回流提取溶劑用量多，回流提取和索氏提取耗時(shí)長，至少需要60 min以上，超聲提取30 min即可達(dá)到較好的回收率，明顯優(yōu)于回流提取和索氏提取.考察了不同溫度和時(shí)間的提取，優(yōu)化后，最終確定最佳提取方式為甲醇溶解，室溫超聲30 min［12］.

2.2 色譜條件的優(yōu)化

由紫外掃描可知芍藥苷在232 nm以及葛根素在250 nm處都有強(qiáng)吸收峰.參考相關(guān)文獻(xiàn)［13-15］嘗試了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸水溶液等流動體系，發(fā)現(xiàn)各組分在流動相甲醇-水體系不能獲得很好的分離，在乙腈-水體系分離效果有所改善，但峰形拖尾嚴(yán)重，乙腈-0.1%磷酸水溶液體系分離效果好，且峰形對稱.根據(jù)加標(biāo)樣各組分分離效果，確定在1～7 min檢測波長取232 nm，7～28 min檢測波長取250 nm，取V（0.1%磷酸水溶液）∶V（乙腈）=85∶15，等梯度洗脫，如圖1～3所示.

圖1 芍藥苷和葛根素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 乳液加標(biāo)樣色譜圖

圖3 化妝水加標(biāo)樣色譜圖

2.3 線性范圍和檢出限

以0.1 mg·mL-1的混標(biāo)用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.2，0.5，0.8，1.0，3.0，5.0和10.0μg·mL-1的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行HPLC測定.以峰面積y對質(zhì)量濃度x做標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖4），線性關(guān)系及方法檢出限見表1，結(jié)果表明：兩種草藥在0.2～10.0μg·mL-1具有良好的線性關(guān)系，可以滿足定量分析.在空白化妝品中添加一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用1.4節(jié)方法處理，獲得芍藥苷和葛根素在化妝水及乳液中的檢出下限分別為8 mg·kg-1和2 mg·kg-1.

表1 線性關(guān)系及檢出限

圖4 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 加標(biāo)回收率和精密度

取上海相宜本草化妝品有限公司提供的化妝水和乳液為樣品，樣品空白色譜圖見圖5和圖6，分別加入一定量的混標(biāo)溶液，制成添加量為8 mg·kg-1和50 mg·kg-1的4種加標(biāo)樣，每個樣品平行測定6次，進(jìn)行回收率試驗(yàn)，結(jié)果見表2和表3.數(shù)據(jù)表明，2種樣品各添加2種中草藥加標(biāo)量的回收率在90.6%～106.5%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.53%～2.37%之間，能夠滿足同時(shí)檢測2種中草藥的技術(shù)要求，檢測結(jié)果可靠.

表3 樣品的RSD %

圖5 乳液空白樣色譜圖

圖6 化妝水空白樣色譜圖

表2 樣品的回收率（n=6） %

3 結(jié)論

通過甲醇超聲提取目標(biāo)物質(zhì)、等梯度洗脫、C18柱分離、DAD檢測和外標(biāo)法定量，建立了HPLC法，可同時(shí)測定乳液和化妝水中芍藥苷和葛根素的含量.該方法線性好，回收率和精密度高，結(jié)果穩(wěn)定可靠，適宜用于乳液和化妝水產(chǎn)品質(zhì)量的檢測.