唐亮，廖強，夏奡，黃云，朱賢青，朱恂

（1 重慶大學低品位能源利用技術及系統(tǒng)教育部重點實驗室，重慶 400044；2 重慶大學工程熱物理研究所，重慶 400044）

化石能源的過量使用導致日趨過量的溫室氣體排放，嚴重影響全球氣候。為此，我國已宣布將于2030 年前實現(xiàn)“碳達峰”，2060 年前實現(xiàn)“碳中和”[1]。我國是農(nóng)業(yè)大國，生物質儲量大，生物質可通過酶解糖化及發(fā)酵制備生物燃料，對實現(xiàn)“碳中和”目標具有重要意義。生物質中木質纖維素類廢棄物年產(chǎn)量達9.8 億噸[2]，折合標準煤約為4.9 億噸，相當于2020年我國能源消費總量的9.8%[3]，因此，開發(fā)和利用木質纖維素類生物質資源尤為重要[4]。木質纖維素中纖維素含量為35%～50%（質量分數(shù)）[5-6]，纖維素是由β-D-葡萄糖連接的高分子化合物[7]，纖維素經(jīng)過酶解糖化及發(fā)酵可轉化為生物燃料[8]，但木質素的致密結構和對酶的無效吸附限制了纖維素酶對纖維素的可及性，降低酶解效率[9-10]，因此需要預處理打破木質素結構[11]。

生物質預處理技術主要包括機械破碎、蒸汽爆破、酸堿處理等方式，但通常存在能耗高、成本高等缺點，導致生物燃料商業(yè)化生產(chǎn)難以實現(xiàn)[12]。自然界中高等培菌白蟻降解木質纖維素類生物質效率高，在一些干旱的熱帶地區(qū)，高等培菌白蟻能降解90%以上植物殘體[13-15]，該過程由腸道的酶和蟻巢內(nèi)真菌協(xié)同作用實現(xiàn)[16]?；诖耍狙芯刻岢隼闷崦负驼婢植浇到饽举|素新體系。以蟻巢內(nèi)提取的蟻巢傘菌和典型的木質纖維素降解菌黃孢原毛平革菌為研究對象，研究酶菌體系對木質素模型化合物堿木素的預處理效果，分析堿木素理化特性的改變，以及經(jīng)酶菌體系處理后的堿木素對后續(xù)酶解的影響特性，為實現(xiàn)木質纖維素高效轉化提供思路。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

本研究采用來源于云芝的漆酶（Laccase fromTrametes versicolor）、總濾紙酶活為70FPU/g 的混合纖維素酶（Cellic CTec2）、堿木素（Alkali lignin）來自于美國Sigma-Aldrich 試劑公司，蟻巢傘菌（Termitomycessp.）來自于德國微生物菌種保藏中心（DSMZ），黃孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）來自于廣東微生物菌種保藏中心。保種以凍干粉形式，置于4℃環(huán)境保存。將凍干粉加入無菌水搖勻，使用滅菌后的移液槍將稀釋后的黃孢原毛平革菌凍干粉溶液接種到PDA培養(yǎng)基中，將稀釋后蟻巢傘菌凍干粉溶液接種到麥芽提取物蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。直至兩個培養(yǎng)基表面長滿白色絲狀真菌，之后用無菌水洗刷培養(yǎng)基表面，并用接種環(huán)刮下表面的菌絲。待大部分菌絲脫落后，用移液槍吸取固體培養(yǎng)基表面的液體滴入漏斗中，濾紙過濾掉固體，收集液體于離心管中，完成真菌孢子液制備，以OD600表示菌液的濃度，初始濃度為OD600=0.13左右。

1.2 實驗方法

1.2.1 漆酶對木質素降解實驗

稱取0.1g 漆酶和1g 堿木素，加入裝有20mL、pH為4.8的檸檬酸鈉緩沖液的錐形瓶中，在溫度為25℃、轉速為170r/min 搖床中反應24h[17]。隨后離心、棄置上清液，用去離子水沖洗3次，將堿木素殘渣放入烘箱烘干，過100目篩網(wǎng)備用。

1.2.2 真菌對木質素降解實驗

將0.2g堿木素和經(jīng)漆酶處理后的堿木素分別加入裝有40mL降解培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中[18]，之后將真菌的孢子液100μL加入到錐形瓶中，用橡膠塞密封，在溫度為28℃、轉速為160r/min的搖床中反應15 天。降解培養(yǎng)基配置方法如下：精確稱取2g葡萄糖、0.1g MgSO4·7H2O、0.1g CaCl2、0.4g酒石酸銨、0.5mL 吐溫80、1g KH2PO4和0.57mL 藜蘆醇于500mL去離子水中，充分溶解后，添加1mL微量元素溶液并定容至1L，放入高壓滅菌鍋在121℃滅菌20min。微量元素溶液配制如下：0.01g H3BO3、0.01g CuSO4·5H2O、 0.02g Al(K(SO4)2) ·12H2O、0.1g CoCl2·6H2O、0.1g FeSO4·7H2O、0.1g ZnSO4·7H2O和0.5g MnSO4充分溶解于1L去離子水中。

1.2.3 木質素對真菌生物量影響實驗

將堿木素和經(jīng)漆酶處理后的堿木素各0.1g分別加入裝有20mL 降解培養(yǎng)基的錐形瓶中，之后加入200μL 的真菌孢子液，在溫度為28℃、轉速為160r/min 的搖床中培養(yǎng)，每種真菌各做14 個平行樣。每隔一段時間取2個樣，將錐形瓶中的菌液全部倒入烘干后的離心管（烘干后的離心管質量已測）中，之后用去離子水沖刷錐形瓶以保證錐形瓶內(nèi)沒有殘留，再將沖刷后的去離子水倒入烘干后的離心管，將裝有菌液的離心管用離心機在7500r/min條件下離心10min，倒掉上清液，放入溫度為80℃的烘箱中烘干，測量離心管和固體的總質量，減去之前烘干后離心管的質量，即得生物量干重。

1.2.4 木質素降解酶活測定實驗

使用滅菌的移液槍頭移取降解過程中的上清液，用去離子水適當稀釋搖勻后用離心機在7500r/min 條件下離心10min，離心后的上清液即為粗酶液。

漆酶的酶活測定方法：在1mL 待測的粗酶液中先后加入1mL 的0.1mol/L 乙酸鈉緩沖液（pH=4.5）及1mL 的0.5mmol/L ABTS 溶液，混合后于25℃恒溫培養(yǎng)箱中反應5min，用紫外光分光光度計測定420nm處反應前后的吸光度變化[19]。

木質素過氧化物酶的酶活測定方法：將1mL粗酶液加入1.9mL 0.24mmol/L藜蘆醇溶液中，加入6mmol/L過氧化氫溶液啟動反應，反應3min，用紫外光分光光度計測定310nm 處反應前后的吸光度變化[20]。

錳過氧化物酶的酶活測定方法：反應體系取為2.4mL 50mmol/L 乙酸鈉緩沖液、0.1mL 1.6mmol/L硫酸錳溶液、0.1mL 1.6mmol/L 2,6-DMP 溶液和0.4mL 粗酶液，加入1.6mmol/L 過氧化氫溶液啟動反應，反應3min，用紫外光分光光度計測定468nm處反應前后的吸光度變化[20]。

酶活單位（U）定義為在上述條件下，每分鐘氧化1μmol ABTS、藜蘆醇和2,6-DMP 所需要的酶量，計算公式如式(1)。

式(1)中，E為樣品酶活，U/L；ΔOD為反應前后吸光度的變化值；V為反應總體積，mL；N為粗酶液稀釋倍數(shù)；V1為粗酶液體積，mL；t為反應時間，min；ε為消光系數(shù)，L/(mol·cm)，ε420=36000L/(mol·cm)，ε310=9300L/(mol·cm)，ε468=49600L/(mol·cm)。

1.2.5 木質素對微晶纖維素水解影響實驗

使用Cellic CTec2 復合纖維素酶進行微晶纖維素的酶促糖化反應。糖化過程使用的酶量為30FPU/g。將裝有20mL檸檬酸鈉緩沖液（0.1mol/L，pH=4.8）的100mL 錐形瓶置于溫度為50℃、轉速為160r/min 的搖床中反應72h，堿木素的負載率為1%（質量分數(shù)），堿木素與微晶纖維素的質量比為2∶1。實驗通過DNS法確定水解過程中還原糖的產(chǎn)量[21]。為了明晰酶菌處理后堿木素對酶的非生產(chǎn)吸附作用的影響[22]，研究酶菌處理后堿木素上酶的吸附等溫曲線，不同酶蛋白的濃度為0.1～2mg/mL[23]。將堿木素和酶裝有10mL檸檬酸鈉緩沖液（0.1mol/L，pH=4.8）的100mL 錐形瓶中于50℃（160r/min）反應3h 以達到平衡[24]。使用Bio-Rad 蛋白測定法（Bradford 的比色法）測定游離蛋白濃度，并將牛血清蛋白（Sigma-Aldrich）用作標準品[25]。堿木素對纖維素酶的吸附通過以下朗繆爾方程描述，如式(2)[23]。

式中，Eads是木質素吸附的酶量，mg/g木質素；Efree是懸浮液中游離酶的濃度，mg/mL；Emax是木質素的最大酶吸附量，mg/g木質素；K為Langmuir吸附常數(shù)，mL/mg酶。

1.3 分析測試方法

將酶菌處理前后的堿木素放入60℃烘箱中干燥24h 后，使用配備有DTGS 檢測器的Thermo Scientific Nicolet iN10 FTIR 顯微鏡（Thermo Nicolet Corporation） 進行FTIR 光譜分析，掃描在400～4000cm-1進行。將堿木素放在60℃烘箱中干燥24h后，然后涂上金-鈀層，然后使用掃描電子顯微鏡（VEGA 3 LMH，捷克TESCAN）在電壓為10kV 的條件下拍攝樣品的顯微照片。用壓汞法對酶菌處理堿木素前后的孔徑信息進行測試，實驗通過Micromertics Instruments Corporation AutoPore IV 9500 進 行， 測 量 壓 力 為33000psia （1psia=6.890kPa）。用德國布魯克公司生產(chǎn)的Bruker AVANCE III 600M核磁共振儀測試酶菌預處理前后堿木素的二維碳氫核磁，將堿木素樣品溶于二甲基亞砜-d6進行測試。

2 結果與討論

2.1 酶菌預處理木質素特性

2.1.1 漆酶預處理前后的木質素對真菌干重的影響以漆酶預處理前后的堿木素為底物，黃孢原毛平革菌、蟻巢傘菌降解堿木素過程中真菌干重的變化規(guī)律如圖1所示。以漆酶（La）處理后的堿木素為底物，兩種真菌初期的生長速率均高于未處理的樣品，這是由于經(jīng)漆酶預處理后，堿木素被部分降解，表面形成突起，堿木素的比表面積增加，與菌的接觸面積增大，有利于真菌初期的生長。以未處理的堿木素為底物的蟻巢傘菌生物量在第7天要高于以漆酶處理后的堿木素為底物的蟻巢傘菌生物量，原因在于兩種真菌會分泌La、錳過氧化物酶（Mnp）和木質素過氧化物酶（LiP）來協(xié)同降解堿木素，有部分堿木素只能被漆酶所降解，La+Te體系前期漆酶的酶活要高于單一Te，造成以未處理堿木素為底物的蟻巢傘菌前期對這部分堿木素降解很少，隨著單一Te 分泌的漆酶的酶活不斷升高，在生長后期達到最高值，使得這部分堿木素被降解，進而生物量高于以漆酶處理后的堿木素為底物的蟻巢傘菌。以漆酶處理后的堿木素為底物的真菌衰亡速率明顯降低，可能在于接觸面積增大，菌更多的附著在堿木素上，菌絲會沿著孔隙生長，使得堿木素的緊密結構解聚，相比于未處理過的堿木素更易被菌利用，從而降低了真菌的衰亡速率。而未經(jīng)漆酶處理的堿木素大孔徑少，導致了真菌較難利用堿木素碳源，同時后期營養(yǎng)物質消耗殆盡，造成真菌大量死亡，真菌殘體溶解于溶液中，導致衰亡期生物量顯著下降。

圖1 漆酶預處理對真菌干重的影響

2.1.2 漆酶預處理對降解過程中木質素濃度的影響

圖2為真菌降解堿木素過程中堿木素濃度變化的趨勢。在第一天，La+PC體系的堿木素降解速率最快，24h內(nèi)堿木素濃度下降了7.6%，這主要是因為錳過氧化物酶會產(chǎn)生Mn3+，通過脂質過氧化反應分解木質素的酚類和非酚類單元，將堿木素結構破壞，進而將其降解為小分子化合物[26]。四組實驗堿木素的濃度變化基本不大，原因是前期分泌的漆酶作用有限，只能作用于堿木素酚類單體，能夠將酚羥基氧化成活性基團苯羥自由基，從而使芳香基裂解。但是，酚類單體僅僅占木質素總結構單元的10%～15%[27]，并且漆酶除了能夠催化解聚木質素，亦可導致木質素聚合，所以對木質素的去除效果有限[28]。從第7 天開始，由于錳過氧化物酶和木質素過氧化物酶的酶活升高，堿木素的降解速率變快。直到實驗結束時，單一Te對堿木素的降解率最大，為25.3%，而這一過程中錳過氧化物酶的活性是四組實驗中最高的，最低的為La+Te 體系，為12.7%，同時La+Te 體系中錳過氧化物酶活性是最低的，錳過氧化物酶由于其對酚類和非酚類單元的降解作用，與漆酶和木質素過氧化物酶相比對堿木素的降解效果更好，從而在堿木素降解過程中占主導作用。

圖2 漆酶預處理對降解過程中木質素濃度的影響

2.1.3 漆酶預處理對真菌木質素降解酶活性的影響圖3反映的是La的活性，可知以漆酶處理后的堿木素為底物的兩種真菌漆酶的酶活都比以未處理的堿木素高，其中La+Te 體系La 活性最高，是單一Te最高漆酶活性的1.43倍，并且在第5天就達到最高值，之后略微下降，到第13 天酶活仍保持6.3U/L。而單一Te 的La 活性雖一直上升，直到第13 天達到最高，但在時間上酶活的最高點具有滯后性，并且La 處理后的堿木素較未處理的堿木素對蟻巢傘菌分泌的La 活性有明顯的提升效果。對于PC，以漆酶處理后的堿木素為底物對其分泌的La 活性也有提升作用，但改善效果沒有Te 那么明顯，并且對活性變化趨勢沒有影響。

圖3 漆酶預處理對漆酶活性的影響

堿木素降解過程中MnP 的活性變化如圖4 所示。單一Te 的MnP 活性要比La+Te 體系的酶活高21.0%，原因在于La與MnP對堿木素的降解效果相似，都能降解酚類單元，并且La 氧化過程不需要H2O2和Mn2+的參與，但MnP 降解堿木素需要H2O2和Mn2+參與[29]，因此MnP降解堿木素需要消耗真菌更多能量，真菌在La 活性過高時可能會減少MnP分泌來減少能量消耗。La+PC體系在前3天MnP酶活增長最快，堿木素降解率在前3天也最高，表明錳過氧化物酶對堿木素的降解至關重要。La+PC體系的MnP 活性比單一PC 提升了31.6%，表明經(jīng)La處理后的堿木素更利于被MnP所降解。

圖4 漆酶預處理對錳過氧化物酶活性的影響

真菌降解堿木素過程中LiP 活性變化如圖5 所示。實驗進行5 天后，PC 分泌的LiP 活性高于Te，表明PC 降解非酚類單元的能力強于Te。同時因為La 預處理，PC 分泌LiP 活性出現(xiàn)最高峰的時間比單一PC 的最高峰提前2 天。La+Te 體系的LiP 活性的最大值高于單一Te 最大值，并且在第13 天時，單一Te 分泌的LiP 的活性已經(jīng)開始下降，而La+Te體系的LiP活性達到最高值，表明漆酶的預處理提高了Te分泌的LiP活性。值得注意的是，兩種真菌的LiP活性的最大值都出現(xiàn)在降解過程后期，表明這兩種真菌降解堿木素非酚類單元主要是在后期完成的。

圖5 漆酶預處理對木質素過氧化物酶活性的影響

2.2 酶菌預處理對木質素物化結構的影響

2.2.1 傅里葉轉換紅外光譜分析

酶菌處理堿木素前后的FTIR 如圖6 所示，譜帶分布如表1 所示。La、Te、La+Te 體系以及La+PC 體系處理后的堿木素在指紋區(qū)域（1300～1000cm-1）發(fā)生了顯著的變化，但PC 處理后的堿木素變化不大，僅在1125cm-1[30]處吸收峰強度顯著下降，該吸收峰代表紫丁香基木素C—H 面內(nèi)變形，PC 降解堿木素過程中木質素三大基本單元之一紫丁香基木素減少，PC 處理后的堿木素羥基吸收峰（3222cm-1），CH2、CH3、CH3O 基團的C—H 拉伸振動的吸收峰（2935cm-1）[31]，苯酚的C—O 拉伸振動的吸收峰（1213cm-1）略微升高，醇類（1081cm-1）[32]吸收峰下降，表明醇類被破壞，新的酚羥基生成，造成羥基吸收峰升高，新的甲基、亞甲基、甲氧基生成，木質素發(fā)生解聚。由此可見，PC 對堿木素作用有限，主要降解紫丁香基木素，斷裂與苯環(huán)連接的醚鍵生成酚羥基和降解醇類。但La+PC 體系處理后的堿木素在4000～1000cm-1范圍內(nèi)的吸收峰較未處理的堿木素樣品的吸收峰有顯著的降低，表明La預處理對PC 降解堿木素效果有顯著的提升。同時將La+PC 體系處理后的堿木素與只經(jīng)La 處理過的堿木素相比較，La+PC 體系處理后的堿木素在指紋區(qū)域吸收峰強度比La 處理過的堿木素低，但在吸收峰為3222cm-1的位置卻是前者比后者高，這個位置是羥基吸收峰，進一步表明PC 對酚類單元的降解能力較弱，而La 可以降解酚類單元，提升PC 對堿木素的降解效果。單一Te、La+Te 體系處理后的堿木素在4000～1000cm-1范圍內(nèi)的吸收峰是最低的兩組。這兩組的吸收峰差別不大，吸收峰的值幾乎重合，但其中La+Te 體系處理后的堿木素在波數(shù)為3222cm-1、2935cm-1處比經(jīng)單一Te 處理的略低，表明酚類單元減少，堿木素化學鍵被破壞。

圖6 酶菌預處理堿木素的FTIR光譜

表1 堿木素FTIR譜帶分布

2.2.2 掃描電鏡分析

掃描電鏡結果顯示（圖7），未處理的堿木素樣品表面平整棱角分明且沒有孔隙。經(jīng)La處理后，表面趨于光滑，且表面形成許多小的突起，增加了后續(xù)菌處理的表面積。經(jīng)Te 處理后，樣品表面變得光滑，有裂縫生成。La+Te 體系處理后的堿木素，表面更加光滑，凹凸不平，有微米級孔形成。PC 處理后的堿木素表面粗糙，有不規(guī)則的、大小不一孔隙形成，La+PC體系處理后的堿木素表面粗糙，凹凸不平，表面結構破壞嚴重，形成大量3μm以下大小的堿木素顆粒。

圖7 堿木素的SEM圖像

2.2.3 孔徑分析

酶菌處理后的堿木素的孔徑分布如表2 所示，未經(jīng)處理的堿木素樣品平均孔徑最小，僅有841.41nm，而平均孔徑最大的是La+PC處理后的堿木素，是未經(jīng)處理堿木素樣品的2.13倍，是單一PC處理后堿木素的1.81倍，是La處理后堿木素的1.44倍。La+Te體系處理后堿木素樣品的平均孔徑較單一酶和單一菌都有顯著的擴大，說明漆酶對真菌擴大堿木素孔徑有促進作用。但總孔容卻是未經(jīng)處理的堿木素樣品最大，其原因可能是酶菌處理時堿木素發(fā)生了解聚，結構穩(wěn)定性變差，出現(xiàn)了小孔坍塌，造成處理后的總孔容較未處理的堿木素樣品小。經(jīng)漆酶和真菌分步處理后堿木素的總孔容要大于單一真菌處理后堿木素的總孔容，說明酶菌協(xié)同體系處理較單一真菌處理對堿木素結構的破壞作用更大。

表2 酶菌預處理堿木素的孔徑信息

2.2.4 二維碳氫核磁譜圖分析

酶菌預處理前后的堿木素二維碳氫核磁譜圖如圖8 所示，13C—1H 相關信號分布表如表3 所示。由圖可知，經(jīng)漆酶、單一PC 和La+PC 體系預處理后的堿木素樣品在苯環(huán)上和側鏈區(qū)的的碳氫化學鍵的峰強度相較于未處理的堿木素樣品均有所下降，其中漆酶預處理后的苯環(huán)上和側鏈區(qū)的碳氫化學鍵峰強度低于單一PC，表明漆酶對堿木素的化學鍵破壞效果要強于單一PC，與FTIR 結果相吻合。La+PC 體系預處理后的堿木素樹脂醇結構中β—β 鍵的Cβ—Hβ峰強度沒有檢測到，表明堿木素中大量的β—β 鍵發(fā)生了斷裂，β—β 鍵一般也由紫丁香基木素所組成，進一步說明La+PC體系可以破壞紫丁香基木素。在苯環(huán)區(qū)域，對羥基苯基木素上的C2—H2和C6—H6鍵的峰強度也未檢測到，表明在漆酶強化了PC 對對羥基苯基木素的破壞。

2.3 酶菌預處理對木質素吸附纖維素酶與酶解特性的影響

2.3.1 酶菌預處理對木質素的纖維素酶吸附特性的影響

圖8是堿木素對纖維素酶的吸附曲線。隨著游離酶濃度的增加，吸附量趨于飽和。隨著纖維素酶的濃度升高，未處理堿木素樣品和經(jīng)單一La 處理的堿木素樣品對酶的吸附量自低濃度（0.2mg/mL）就開始趨于飽和，而經(jīng)菌和酶菌分步預處理的堿木素樣品對酶的吸附量達到飽和狀態(tài)時所對應的纖維素酶量濃度大約為1mg/mL，表明真菌預處理對減少堿木素對酶的吸附所起的作用比漆酶的作用要大，真菌預處理可以顯著減少堿木素對纖維素酶的吸附。

圖8 酶菌預處理前后堿木素的二維碳氫核磁譜圖

表3是堿木素對纖維素酶吸附曲線的參數(shù)。由表可知，未處理的堿木素樣品最大酶吸附量最高，La 處理后堿木素最大酶吸附量較未處理的堿木素樣品下降了15.9%，經(jīng)真菌處理后的堿木素樣品的最大吸附量較未處理的堿木素樣品顯著下降，其中La+Te 體系處理后的堿木素的最大酶吸附量最少，為9.94mg/g，比未經(jīng)處理的堿木素樣品的最大酶吸附量降低了51.5%。PC處理后的堿木素對纖維素酶的吸附強于Te處理，原因在于PC處理后的堿木素酚羥基數(shù)量比Te處理的多[33]。

表3 13C—1H相關信號分布表

2.3.2 酶菌預處理木質素對纖維素酶酶解特性的影響

酶菌預處理堿木素前后，堿木素對微晶纖維素的酶促水解實驗結果如圖9所示。經(jīng)酶菌處理后的堿木素對纖維素酶的非生產(chǎn)吸附減少，使得溶液中酶活跟對照組比起來更高，水解微晶纖維素所得到的還原糖增多。其中，從圖10 及Langmuir 吸附等溫曲線（表4）可知，La+Te 體系處理后的堿木素對纖維素酶的非生產(chǎn)吸附最少，使得游離的酶濃度更高，水解微晶纖維素所產(chǎn)生的還原糖濃度最高，在72h后濃度為3.11g/L，剩下的實驗組還原糖濃度從高到低依次為：2.63g/L（單一Te處理）、2.58g/L（La+PC 體系處理）、2.08g/L（單一PC 處理）以及1.81g/L（未經(jīng)處理的堿木素樣品），La+Te 體系降解后的堿木素較未經(jīng)處理的堿木素樣品的還原糖濃度提升了71.5%。

圖9 酶菌預處理堿木素對纖維素酶吸附特性的影響

圖10 酶菌預處理堿木素對纖維素酶酶解特性的影響

表4 Langmuir吸附等溫線參數(shù)

3 結論

（1）受高等培菌白蟻降解生物質的酶菌體系啟發(fā)，構建酶菌降解堿木素的新體系。漆酶預處理后的堿木素對真菌生長代謝的影響研究表明，經(jīng)漆酶預處理后的堿木素提升了真菌生長初期的生長速率，使真菌提前進入靜止期，并且減緩了真菌的衰亡速率。同時漆酶預處理后的堿木素也改變了真菌木質素降解酶系的活性，使Te 分泌的漆酶和LiP 活性分別顯著提升43.3%和58.5%，將PC 分泌的漆酶和MnP 活性分別提升35.9% 和31.6%。

（2）通過測試酶菌預處理過程中堿木素降解率的變化以及對酶菌預處理后堿木素物化性質的表征，發(fā)現(xiàn)La+PC 體系對堿木素的降解率較單一PC提升6.7%。FTIR 分析結果表明，經(jīng)酶菌協(xié)同體系預處理后的堿木素在指紋區(qū)域官能團吸收峰顯著減少，其中La+Te體系處理后的堿木素各官能團吸收峰最低，但與單一Te 官能團吸收峰相差不大，表明漆酶對Te 在堿木素官能團改性作用方面的提升有限。但漆酶的預處理使PC 對堿木素官能團的改性效果顯著提升。SEM 和孔徑分析表明，酶菌協(xié)同體系預處理后的堿木素表面結構破壞嚴重，表面孔隙增多，堿木素平均孔徑顯著增大。

（3）通過酶菌協(xié)同作用的方式強化堿木素的降解，同時削弱堿木素對后續(xù)酶吸附的影響。其中La+Te體系處理后的堿木素對纖維素酶的最大吸附量較對照組降低了51.5%，對酶的非生產(chǎn)性吸附量最少，從而使還原糖的產(chǎn)量較對照組提高了71.5%。