李先飛，封傳華，張 靜，徐 蘭，肖漢揚(yáng)，李 剛

聯(lián)勤保障部隊(duì)第九〇八醫(yī)院，江西 南昌330002

胃特安片是聯(lián)勤保障部隊(duì)第九〇八醫(yī)院研制的非標(biāo)制劑，處方由白術(shù)、川芎、厚樸、砂仁、甘草、馬蘭草、陳皮、黃柏等多味中藥材配伍而成，具有和胃止痛、健脾消食、安神寧心等功效，臨床主要用于治療胃及十二指腸潰瘍、慢性胃炎等疾?。?-4］。由于白術(shù)、川芎、陳皮、黃柏為處方中的重要組成藥材，本研究將建立基于薄層色譜鑒定白術(shù)、川芎及高效液相色譜測(cè)定陳皮、黃柏中橙皮苷、鹽酸小檗堿含量的方法，為控制胃特安片的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器島津高效液相色譜儀（包括CTO 柱溫箱，SIL-10AF 自動(dòng)進(jìn)樣器，LC-15C 泵，SPD-15C 紫外檢測(cè)器）；ZF7-C 型三用紫外分析儀（上?？等A生化儀器制造有限公司）；ZNCL-GS 型磁力攪拌器（上海越眾儀器設(shè)備有限公司）；DZF 型系列真空干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；AUW-120D型分析天平（島津公司）；電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）；KQ3200E 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DFT-50 型手提式高速萬能粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）。

1.2 試藥鹽酸小檗堿（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110713-201212，含量以99.8% 計(jì)）；橙皮苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110721-201316，含量以99.8%計(jì)）；乙腈（高效液相色譜用，西隴化工股份有限公司，批號(hào)：1810013）；磷酸（南昌鑫光精細(xì)化工廠，分析純，批號(hào)：201609104）；醋酸（西隴化工股份有限公司，分析純，批號(hào)：1304011）；川芎對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120918-201411）；白術(shù)對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121272-201404）；硅膠G 板（青島海洋化工分廠，批號(hào)：20150702）；香草醛（天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20140228）；無水乙醇（西隴化工股份有限公司，批號(hào)：130201）；正己烷（天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20150320）；乙酸乙酯（天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，批號(hào)：20111516）；甲醇（天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，批號(hào)：20130320）；石油醚（60～90℃，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20131128）；胃特安片（醫(yī)院自制，批號(hào)：150501、150512、151218）；白術(shù)、枳實(shí)、茯苓、川芎、黃芩等藥材均購(gòu)自匯仁醫(yī)藥有限公司，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)曹嵐教授鑒定為正品；水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 川芎 稱取本品粉末5 g，加乙醚30 mL，加熱回流提取60 min，過濾后將所得濾液揮干，用2 mL 乙酸乙酯溶解殘?jiān)?，作為供試品溶液。?.5 g川芎對(duì)照藥材，按照上述方法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2015年版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 μL，點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，用正己烷-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干后置于紫外光（365 nm）下檢視。供試品色譜中在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 川芎的薄層色譜圖

2.1.2 白術(shù) 取本品粉末5 g，加正己烷20 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2015 年版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（50∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴含5%香草醛的10%硫酸醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖2。

圖2 白術(shù)的薄層色譜圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 色譜柱：迪馬ODS2 C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（19∶81），流速：1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：265 nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10 μL，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。在此色譜條件下，其他成分無干擾。見圖3。

圖3 胃特安片HPLC圖譜

2.2.2 對(duì)照品溶液制備［5］取鹽酸小檗堿對(duì)照品、橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，置于10 mL量瓶中，加適量甲醇超聲，溶解并定容至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液，濃度分別為0.5 mg/mL的鹽酸小檗堿和1.4 mg/mL的橙皮苷，備用。

2.2.3 胃特安片溶液制備 取胃特安片適量，研碎，精密稱取胃特安片細(xì)粉約0.25 g，加適量甲醇，超聲提取60 min，靜置并冷卻至室溫，過濾，濾液轉(zhuǎn)至50 mL 量瓶中，用適量甲醇定容至刻度，搖勻，測(cè)定前用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，進(jìn)樣［6］。

2.2.4 陰性樣品溶液制備 按處方比例稱取藥材（黃柏、陳皮除外），置70℃烘箱中烘干，粉碎，按照“2.2.3”項(xiàng)中制備方法制備陰性樣品溶液。

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻。精密吸取各對(duì)照品溶液10 μL 注入高效液相色譜儀，照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以鹽酸小檗堿濃度對(duì)其峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。鹽酸小檗堿線性回歸方程為：Y=109 637X-63 435，R2=0.9995；以橙皮苷濃度對(duì)其峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，橙皮苷的線性回歸方程為：Y=254 369X-10 011，R2=0.9992。結(jié)果表明鹽酸小檗堿在5～250 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；橙皮苷在14～700 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.6 定量限和檢測(cè)限 將混合對(duì)照品溶液（鹽酸小檗堿濃度0.5 mg/mL）用流動(dòng)相稀釋，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果顯示鹽酸小檗堿對(duì)照品最低定量限為5 μg/mL（S/N≥10），檢測(cè)限為2 μg/mL（S/N≥3）。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 取胃特安片供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次，每次進(jìn)樣量為10 μL，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算鹽酸小檗堿峰面積RSD 值為1.87%，橙皮苷峰面積RSD 值為1.76%。結(jié)果表明精密度良好，符合含量測(cè)定的基本要求。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取胃特安片供試品溶液，于0、2、4、6、8、12、24 h精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算鹽酸小檗堿峰面積RSD 值為1.75%，橙皮苷峰面積RSD 值為1.82%，結(jié)果表明，鹽酸小檗堿和橙皮苷在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取胃特安片（批號(hào)：150501）5 份，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取10 μL 注入高效液相色譜儀，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算鹽酸小檗堿峰面積RSD 值為1.68%，橙皮苷峰面積RSD 值為1.54%。結(jié)果表明該方法重復(fù)性較好。

2.2.10 加樣回收率 精密稱取胃特安片細(xì)粉6份，每份約0.4g，精密稱定并置于量瓶中，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液和橙皮苷對(duì)照品溶液適量，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取10 μL 注入高效液相色譜儀，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1—2。

表1 鹽酸小檗堿的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 橙皮苷的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.11 樣品含量測(cè)定 根據(jù)已建立的鹽酸小檗堿含量測(cè)定方法，取3 批胃特安片，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備胃特安片供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的峰面積，計(jì)算胃特安片中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果顯示3批胃特安片樣品（150501、150512、151218）中每片含鹽酸小檗堿分別為45.18、45.09、45.24 μg；橙皮苷分別為1.3496、1.3513、1.389 mg。

3 討論

因陳皮、黃柏、白術(shù)、川芎分別為胃特安片中的君藥和臣藥，故本研究采用高效液相色譜法對(duì)陳皮、黃柏中主要成分橙皮苷、鹽酸小檗堿進(jìn)行測(cè)定，采用薄層色譜法對(duì)白術(shù)、川芎進(jìn)行鑒別，達(dá)到有效控制胃特安片質(zhì)量的目的，從而保障臨床用藥的安全性。白術(shù)鑒別過程中發(fā)現(xiàn)，以新近上市的白術(shù)飲片為原料制備而成的胃特安片其特征斑點(diǎn)更明顯，而常溫保存時(shí)間超過12 個(gè)月的胃特安片中白術(shù)的特征斑點(diǎn)幾乎消失，可能與白術(shù)特征斑點(diǎn)的物理特性（如揮發(fā)性、穩(wěn)定性等）有關(guān)［5-9］。

本研究通過參考相關(guān)文獻(xiàn)［10-14］及《中華人民共和國(guó)藥典》（2015 版）［15-17］中關(guān)于鹽酸小檗堿含量測(cè)定的色譜條件，同時(shí)根據(jù)實(shí)際情況，針對(duì)性優(yōu)化流動(dòng)相，最終確定以乙腈-0.1% 磷酸溶液（19∶81）為流動(dòng)相，可將目標(biāo)成分鹽酸小檗堿和橙皮苷與其他物質(zhì)有效分離，其中加入0.1% 的磷酸，可防止出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，從而獲得較好的色譜峰。

本研究采用薄層色譜法鑒定胃特安片中白術(shù)、川芎，采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定胃特安片中鹽酸小檗堿和橙皮苷的含量，專屬性強(qiáng)，陰性樣品無干擾，能夠?yàn)槲柑匕财馁|(zhì)量控制提供參考。