藍(lán)柏成，劉君昂，肖 柏，周?chē)?guó)英

（中南林業(yè)科技大學(xué) a.南方人工林病蟲(chóng)害防控國(guó)家林業(yè)局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；b.森林有害生物防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；c.經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410004）

降香黃檀Dalbergia odorifera是我國(guó)珍貴的瀕危紅木樹(shù)種[1]，因其心材質(zhì)地堅(jiān)硬、花紋美觀、文理細(xì)密、不易開(kāi)裂和變形、耐腐蝕等優(yōu)點(diǎn)，通常被用來(lái)制作高檔家具[2]。降香黃檀木材富含芳香油，尤其是其心材部位，降香油就是通過(guò)蒸餾技術(shù)從心材中提取的芳香油物質(zhì)，該物質(zhì)氣味清香持久，不容易揮發(fā)，是良好的定香劑。同時(shí)在醫(yī)學(xué)上具有阻止血液凝固和擴(kuò)張心臟冠脈等作用是一種高級(jí)鎮(zhèn)痛藥材[3-4]。近年來(lái)，國(guó)家在我國(guó)廣東、云南、廣西等降香黃檀生長(zhǎng)適宜地大力發(fā)展降香黃檀人工林的培育工作[5-7]。而降香黃檀在自然條件下的生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，木材成型時(shí)間晚[8-9]，同時(shí)降香黃檀純林極易遭受風(fēng)害、病害、蟲(chóng)害等自然災(zāi)害。根據(jù)董文統(tǒng)等[10]、劉成鋒等[11]和周斌[12]對(duì)海南島降香黃檀病害的全面調(diào)查結(jié)果顯示，降香黃檀的常見(jiàn)病害包括葉枯病、細(xì)菌性穿孔病、炭疽病、黑痣病等。這些病害嚴(yán)重影響了降香黃檀的生長(zhǎng)發(fā)育尤其降香黃檀的成材。因此對(duì)于促進(jìn)降香黃檀的健康生長(zhǎng)及抗病能力的提高等科學(xué)問(wèn)題的解決迫在眉睫。

已有研究表明降香黃檀內(nèi)生菌對(duì)降香黃檀的生長(zhǎng)發(fā)育有重要的影響，降香黃檀心材的形成與降香黃檀的內(nèi)生菌緊密相關(guān)[13]。2014年，賈瑞豐[14]研究發(fā)現(xiàn)4 種真菌都對(duì)降香黃檀心材的形成存在促進(jìn)作用，其中以多毛孢Pestalotiopsis palmarum對(duì)心材的促進(jìn)作用效果最為明顯。2020年，劉昌霖等[15]對(duì)降香黃檀內(nèi)生真菌的多樣性及其與內(nèi)環(huán)境因子的關(guān)系進(jìn)行研究，初步探討了內(nèi)生真菌對(duì)降香黃檀生長(zhǎng)的影響。但是都是關(guān)于降香黃檀內(nèi)生真菌的研究，尚未見(jiàn)降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌的報(bào)道。

從植物的內(nèi)生細(xì)菌中篩選出對(duì)于病原菌具有拮抗作用的細(xì)菌是十分重要的新型微生物資源，這些拮抗細(xì)菌往往更適應(yīng)植物的內(nèi)環(huán)境，能更好的定殖在植物體內(nèi)[16]。對(duì)于降香黃檀病害的生物防治，內(nèi)生拮抗細(xì)菌也有相關(guān)實(shí)例被報(bào)道。研究表明，降香黃檀葉部?jī)?nèi)生細(xì)菌中的一些芽孢桿菌屬Bacillus細(xì)菌能有效抑制炭疽病病原菌的生長(zhǎng)發(fā)育[17]。由此可見(jiàn)，降香黃檀病害相關(guān)的內(nèi)生拮抗菌資源還有待開(kāi)發(fā)。

因此，為全面了解內(nèi)生細(xì)菌在降香黃檀中的群落結(jié)構(gòu)及群落多樣性，尤其是心材和邊材的之間的差異，本研究使用HiSeq 高通量測(cè)序的方法，測(cè)序分析了降香黃檀木材樣本中的內(nèi)生細(xì)菌。同時(shí)測(cè)定降香黃檀心材邊材的理化性質(zhì)。結(jié)合兩者的結(jié)果，綜合分析兩者之間的相關(guān)性。為后續(xù)人工促進(jìn)降香黃檀健康生長(zhǎng)及降香黃檀病害內(nèi)生拮抗細(xì)菌的篩選提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究材料

采樣地概況：地處海南省瓊海市市郊。土壤肥力較高，土層不深厚，土層中夾有母巖半風(fēng)化物，為砂紅壤。主要樹(shù)種包括降香黃檀Dalbergia odorifera、小葉欖仁Terminalia neotaliala、天料木Homalium hainanense、沉香Aquilaria sinensis。

采樣方法：選取樹(shù)齡均為15 a，胸徑大小相近的降香黃檀。選取降香黃檀距離地面15 cm 處的莖干部分取。在無(wú)菌條件下，將樣品處理成厚度0.5 cm 薄片。為了釋放降香黃檀木材樣本中的內(nèi)生細(xì)菌，配置0.9% NaCl 溶液至于錐形瓶中，然后加入5 g 樣本，最后將錐形瓶至于溫度控制在25℃的搖床上，搖瓶培養(yǎng)2 h。培養(yǎng)后將的得到的樣本，用0.22 μm 濾膜真空抽濾備用[15]。心材樣本以下均使用代號(hào)HW，邊材樣本均使用代號(hào)SW。

1.2 內(nèi)生細(xì)菌的高通量測(cè)序

使用總DNA 提取試劑盒（北京畢特博）提取降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌DNA。PCR 擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)方法參考劉昌霖等[15]研究論文，正向引物：341F（5′-CCTAYGGGRBGCASCAG-3′）；反向引物：806R（5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′）。后續(xù)的文庫(kù)構(gòu)建及高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)由mega genomics（美因健康）完成。

1.3 理化性質(zhì)測(cè)定

含水率、pH 值、灰分含量、熱水抽提物含量和礦質(zhì)元素含量的測(cè)定，具體方法及步驟參考文獻(xiàn)[15]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

下機(jī)后，獲得原始測(cè)序數(shù)據(jù)。對(duì)于原始數(shù)據(jù)的分析以及初始結(jié)果的獲得，由Mega genomics（美因健康）完成。

初始結(jié)果的相對(duì)豐度制圖使用R 軟件完成；方差、相關(guān)性分析和冗余分析分別使用SPSS 19.0軟件和Canoco 4.5 軟件完成。

本研究OUT 聚類(lèi)分析選用Unite 數(shù)據(jù)庫(kù)，采用RDP classifier 貝葉斯算法對(duì)97%相似水平的OTU 代表序列進(jìn)行分類(lèi)學(xué)和生物信息統(tǒng)計(jì)分析[15]。

2 結(jié)果與分析

2.1 內(nèi)生細(xì)菌測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)控結(jié)果

平均每個(gè)樣品產(chǎn)生序列：心材115 985 條，邊材185 600 條。經(jīng)過(guò)過(guò)濾質(zhì)控后，有效序列的平均長(zhǎng)度為447.5 bp，平均降香黃檀心材和邊材得到有效序列為75 638 條和140 889 條。降香黃檀心材和邊材總共獲得堿基數(shù)為96 481 212 bp（表1）。

表1 測(cè)序結(jié)果統(tǒng)計(jì)Table 1 Statistics of sequencing results

心材和邊材的內(nèi)生細(xì)菌Observed OTUs 稀釋結(jié)果看出（圖1），降香黃檀心材和邊材的稀釋曲線(xiàn)末端都逐漸達(dá)到平坦，說(shuō)明了對(duì)于本研究的樣本，此次測(cè)序數(shù)據(jù)量的結(jié)果是合理的。

圖1 Observed OTUs 稀釋曲線(xiàn)Fig.1 Observed OTUs rarefaction curves

2.2 內(nèi)生細(xì)菌OTU 聚類(lèi)分析

為了更直觀的展示降香黃檀的OUT 在心材和邊材中的分布情況，根據(jù)OTU 的分析結(jié)果繪制Venn 圖（圖2）發(fā)現(xiàn)降香黃檀木材內(nèi)生細(xì)菌總共有4 678 個(gè)OTU，其中心材和邊材共有的OTU 數(shù)量有1 494 個(gè)，心材特有的OTU 有2 368 個(gè)，邊材特有的OTU 有816 個(gè)。

圖2 心材和邊材OTU 的Venn 圖Fig.2 Venn of HW and SW OTU

統(tǒng)計(jì)降香黃檀心材和邊材注釋到界、門(mén)、綱、目、科、屬、種以及未鑒定的序列數(shù)目，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖3所示。屬分類(lèi)水平上，心材和邊材的OTU注釋數(shù)量最多，且心材和邊材之間較大的差異。

圖3 心材和邊材在各分類(lèi)水平上的OTU 數(shù)目Fig.3 Number of OTU at each classification level for HW and SW

2.3 降香黃檀心材和邊材內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)

在門(mén)分類(lèi)水平上（圖4），降香黃檀心材內(nèi)生細(xì)菌群落中豐度最大的是變形菌門(mén)Proteobacteria（73%），其次是藍(lán)細(xì)菌門(mén)Cyanobacteria（13%），除此之外主要的內(nèi)生細(xì)菌群落還有厚壁菌門(mén)Firmicutes、酸桿菌門(mén)Acidobacteria 和擬桿菌門(mén)Bacteroidetes，這些菌群豐度均高于1%，低于10%。邊材內(nèi)生細(xì)菌優(yōu)勢(shì)菌群為變形菌門(mén)，占比96%，豐度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他菌群（豐度均低于1%）。由此可見(jiàn)，無(wú)論是在心材還是邊材，變形菌門(mén)都是優(yōu)勢(shì)菌群。

圖4 心材和邊材內(nèi)生細(xì)菌組成Fig.4 Endophytic bacteria of HW and SW

在屬分類(lèi)水平上，內(nèi)生細(xì)菌在降香黃檀心材和邊材的分布結(jié)果如圖5，可以看出無(wú)論是降香黃檀的心材還是邊材腸桿菌屬Enterobacter都是明顯優(yōu)勢(shì)菌屬相對(duì)豐度都超過(guò)了10%。與心材不同的是，不動(dòng)桿菌屬Acinetobacter在邊材中也占有很大的比例，它與腸桿菌屬在邊材的相對(duì)豐度達(dá)到了85%。在心材中也有其他菌屬相對(duì)豐度超過(guò)了1%，相對(duì)豐度由大到小分別泛菌屬Pantoea、伯克氏菌屬Burkholderia、乳桿菌屬Acidobacterium和檸檬酸桿菌屬Citrobacter。而在邊材內(nèi)生細(xì)菌相對(duì)豐度超過(guò)1%的菌群依次為：腸桿菌屬、不動(dòng)桿菌屬Acinetobacter、泛菌屬、腸球菌屬Enterococcus和克洛諾菌屬Cronobacter。

腸桿菌屬菌群在心材和邊材中都屬于優(yōu)勢(shì)菌群，且優(yōu)勢(shì)很大（圖5），說(shuō)明其在降香黃檀邊材和心材兩種環(huán)境中適應(yīng)性都很強(qiáng)。不動(dòng)桿菌屬菌群在邊材中為優(yōu)勢(shì)菌群，且心材和邊材中豐度差異較大，更加適應(yīng)邊材環(huán)境。泛菌屬菌群在心材和邊材中相對(duì)豐度差異很小，且都是主要菌群。對(duì)于剩余的相對(duì)豐度低于1%的菌群，這些菌群中的大部分在邊材中的豐度低于心材。

圖5 心材和邊材內(nèi)生細(xì)菌組成Fig.5 Endophytic bacteria of HW and SW

2.4 內(nèi)生細(xì)菌群落多樣性分析

通過(guò)對(duì)比降香黃檀心材和邊材的OTU 的數(shù)量，發(fā)現(xiàn)心材的數(shù)量（1 426）明顯多于邊材（808）。3 項(xiàng)指數(shù)即豐度指數(shù)、香儂指數(shù)和辛普森指數(shù)計(jì)算結(jié)果顯示降香黃檀心材均大于邊材。說(shuō)明無(wú)論是內(nèi)生細(xì)菌的物種數(shù)量還是多樣性，心材都大于邊材。

表2 多樣性分析Table 2 Diversity index

2.5 降香黃檀心材和邊材理化性質(zhì)

降香黃檀心材含水率（39.87%）高于邊材含水率（36.99%）。通過(guò)單因素方差分析結(jié)果得知，含水率在降香黃檀心材和邊材之間并未存在顯著性差異（P=0.05）（圖6A）。

在常溫常壓下，降香黃檀木材pH 顯酸性，與林場(chǎng)的土壤性質(zhì)一致。心材和邊材pH值分別為4.52和5.47。經(jīng)過(guò)單因素方差分析表明，心材和邊材pH 值存在極顯著差異（P＜0.01）（圖6B）。

灰分（Ash）的高低可反映不同的植物的不同部位對(duì)礦質(zhì)元素選擇吸收積累的特點(diǎn)[18]。心材Ash 含量明顯較邊材Ash 含量低。心材的含量0.18%，邊材的含量0.32%。單因素方差分析結(jié)果表明，降香黃檀心材和邊材灰分含量存在顯著性差異（P＜0.05）。由此可以推測(cè)，邊材對(duì)礦物元素（揮發(fā)性氧化物除外）的吸收和累積要比心材多（圖6C）。

通常熱水抽提物成分是糖類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和可溶性無(wú)機(jī)鹽等[19]。降香黃檀心材熱水抽提物含量高于邊材部分，分別為13.51%和11.69%，心材為邊材的1.16 倍。單因素方差分析結(jié)果顯示，降香黃檀心材、邊材熱水抽提物含量存在顯著差異（P＜0.05）。心材中抽提物沉積物越多，心材顏色越深。熱水抽提物含量多少，反映了邊材和心材所含的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)多少。心材中具有更多糖類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（圖6D）。

礦質(zhì)元素在樹(shù)體內(nèi)的循環(huán)是從衰老邊材向其他活體部分轉(zhuǎn)移的[20]。研究發(fā)現(xiàn)心材、邊材礦質(zhì)元素的移動(dòng)呈現(xiàn)一定的規(guī)律，部分移動(dòng)的Mg 元素和不移動(dòng)的Ca 元素在心材部分含量較邊材高，可移動(dòng)的K 元素比邊材低[21]。降香黃檀心材鈣元素含量較邊材部位高，分別為5.76 和2.87 mg/g，單因素方差分析顯示存在極顯著差異（P＜0.01）。鎂元素含量心材和邊材差距不大，心材鎂元素含量（0.49 mg/g）比邊材（0.43 mg/g）稍高一點(diǎn)，單因素方差顯示不存在顯著差異（P=0.113）。在鉀元素含量方面，邊材鉀元素含量（1.69 mg/g）遠(yuǎn)高于心材鉀元素含量（0.58 mg/g）。單因素方差表明，心材和邊材鉀元素含量存在極顯著差異（P＜0.01）（圖6E）。

圖6 心材和邊材的理化性質(zhì)Fig.6 Physical and chemical properties of HW and SW

2.6 內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)的關(guān)系

冗余分析結(jié)果如圖7所示，圖中橫向坐標(biāo)軸解釋64.9%的信息，縱向坐標(biāo)軸解釋35.1%的信息。從圖7可以看出，降香黃檀邊材中的優(yōu)勢(shì)菌群在圖中分布相對(duì)集中，說(shuō)明這些菌群的相關(guān)性較大。但是降香黃檀心材優(yōu)勢(shì)菌群在圖中分布相對(duì)分散。說(shuō)明這些菌群的相關(guān)性較小。pH 值和鉀元素同時(shí)處在同一個(gè)方向，所以他們呈極顯著正相關(guān)，且pH 值和鉀元素剛好處在礦質(zhì)元素鈣和鎂元素的反方向，呈極顯著負(fù)相關(guān)。心材優(yōu)勢(shì)菌腸桿菌屬受到木材因子影響大小依次為：HWE、Ash、Ca、K、pH、Mg、MC，與Ash、K 和pH 值正相關(guān)，與MC、Mg、Ca 和HWE 含量負(fù)相關(guān)。木材因子對(duì)邊材優(yōu)勢(shì)菌不動(dòng)桿菌屬的影響大小與之正好相反，且同樣與含水率、鎂、鈣和熱水抽提物含量負(fù)相關(guān)。腸球菌屬與pH 值和礦質(zhì)元素鉀極顯著正相關(guān)，與礦質(zhì)元素鈣和鎂極顯著負(fù)相關(guān)。

圖7 內(nèi)生細(xì)菌菌群與理化性質(zhì)的冗余分析Fig.7 RDA analysis of endophytic bacteria and physical and chemical properties

2.7 內(nèi)生細(xì)菌群落多樣性指數(shù)與理化性質(zhì)的關(guān)系

對(duì)心材和邊材樣品內(nèi)生細(xì)菌多樣性指數(shù)和理化性質(zhì)進(jìn)行相關(guān)性分析（表3），結(jié)果表明，豐度指數(shù)、香儂指數(shù)與辛普森指數(shù)都互為正相關(guān)。pH值與豐度指數(shù)極顯著正相關(guān)性，豐度指數(shù)、辛普森指數(shù)和香儂指數(shù)與含水率、灰分和礦質(zhì)元素鉀負(fù)相關(guān)，與熱水抽提物、礦質(zhì)元素鈣和鎂正相關(guān)。木材理化因子中含水率和pH 值對(duì)內(nèi)生細(xì)菌群落多樣性影響最大，具有顯著相關(guān)性。其中內(nèi)生細(xì)菌群落多樣性受到木材因子pH 值的影響最大。

表3 理化性質(zhì)與內(nèi)生細(xì)菌多樣性的相關(guān)性分析?Table 3 Correlation analysis of physical and chemical diversity and endophytic bacteria diversity

3 結(jié)論與討論

3.1 討 論

3.1.1 降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌和木材內(nèi)環(huán)境因子的關(guān)系

影響降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的木材內(nèi)環(huán)境因子主要是灰分含量、熱水提取物、pH 值、Ca含量和K 含量。內(nèi)生細(xì)菌群落多樣性受到木材因子pH 值的影響最大。pH 值在心材邊材中呈顯著差異，在含水率相近的情況下，木材pH 值對(duì)內(nèi)生細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu)影響更大。降香黃檀心材和邊材的熱水抽提物含量分別為13.51%和11.69%，熱水抽提物反映的是有機(jī)質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量高的微生物種類(lèi)和數(shù)量都多。這與心材內(nèi)生細(xì)菌群落豐富度大于邊材的結(jié)果相符合?；曳趾康慕Y(jié)果表明，降香黃檀中邊材比心材礦質(zhì)元素累積的要多。其中Ca 含量和K 含量是引起內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)差異的主要礦質(zhì)元素。心材礦質(zhì)元素中鈣元素的含量比邊材高，研究表明鈣含量的提高會(huì)降低變形菌門(mén)的豐度[22]，而心材中變形菌門(mén)的相對(duì)豐度低于邊材。解鉀菌稱(chēng)硅酸鹽細(xì)菌（Silicate bacteria），能有效分解并利用磷、鉀等礦物元素；主要為厚壁菌門(mén)中的芽孢桿菌屬Bacillus的細(xì)菌[23]。在心材內(nèi)生細(xì)菌群落中，厚壁菌門(mén)Firmicutes豐度明顯大于邊材，因此的鉀的含量會(huì)低于邊材。

3.1.2 降香黃檀心材和邊材的內(nèi)生細(xì)菌多樣性與差異性

研究表明，不同植物內(nèi)生菌在不同植物體內(nèi)的分布不同，在宿主不同器官的分布也存在著差異[24-25]。本研究顯示，心材的多樣性指數(shù)豐度指數(shù)和OUT 數(shù)量都高于邊材，說(shuō)明心材內(nèi)生細(xì)菌的物種總數(shù)多于邊材。辛普森指數(shù)和香儂指數(shù)，心材中內(nèi)生細(xì)菌多樣性要多于邊材。這說(shuō)明降香黃檀心材內(nèi)生細(xì)菌的物種豐富度大于邊材。也反映了降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌的分布受到了心材邊材不同木材結(jié)構(gòu)性質(zhì)及理化性質(zhì)的影響，使降香黃檀心材邊材內(nèi)生細(xì)菌的分布表現(xiàn)出了明顯的差異。

分析降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu)組成上，心材邊材也存在差異性。在門(mén)的分類(lèi)水平上，變形菌門(mén)在心材和邊材中都占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，同時(shí)在屬水平上，腸桿菌屬無(wú)論在心材還是邊材也都是優(yōu)勢(shì)菌，這反映變形菌門(mén)的細(xì)菌能很好地適應(yīng)心材邊材的環(huán)境。有研究表明變形菌門(mén)是植物根際最豐富的優(yōu)勢(shì)菌群，主要原因是其生長(zhǎng)速度快，同時(shí)能夠充分利用植物根際分泌的各種物質(zhì)[26]，因此，這一觀點(diǎn)在沙棘[27]、紅豆杉[28]、醉馬草[29]、人參[30]和甘草[31]等植物上得到了很好的證明。同時(shí)本研究顯示變形菌門(mén)在心材和邊材中都占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，同時(shí)變形菌門(mén)在邊材的豐度大于心材，說(shuō)明降香黃檀心材和邊材的一些細(xì)菌可能來(lái)源于根際土壤。

藍(lán)細(xì)菌門(mén)在心材的中的豐度達(dá)到了13%。但在邊材中并不是優(yōu)勢(shì)菌群。藍(lán)細(xì)菌門(mén)細(xì)菌分布廣泛同時(shí)生存能力極強(qiáng)，還能與一些植物共生[32]。本研究沒(méi)有對(duì)藍(lán)細(xì)菌門(mén)進(jìn)一步研究。后續(xù)應(yīng)當(dāng)對(duì)這一現(xiàn)象進(jìn)一步深入研究，進(jìn)一步明確降香黃檀心材和邊材的內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)，闡述藍(lán)細(xì)菌門(mén)與降香黃檀的關(guān)系。

不動(dòng)桿菌屬菌群在邊材中為優(yōu)勢(shì)菌群，是多種植物的內(nèi)生細(xì)菌，廣泛存在于胡楊[33]、銀砂槐[34]等植物體內(nèi)，從各種植物組織中分離出的幾種不動(dòng)桿菌已被報(bào)道為潛在的生物防治劑。除了抑制病原菌的活性外，不動(dòng)桿菌還表現(xiàn)出多種促進(jìn)植物生長(zhǎng)的特性，例如生長(zhǎng)素的產(chǎn)生，磷酸鹽的增溶，鐵載體的產(chǎn)生和氨的產(chǎn)生[35-36]。與其他腸桿菌屬不同的是，不動(dòng)桿菌屬心材和邊材中豐度差異較大，更加適應(yīng)邊材環(huán)境。

3.1.3 降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌對(duì)降香黃檀生長(zhǎng)的影響

內(nèi)生細(xì)菌對(duì)于植物生長(zhǎng)的促進(jìn)作用主要分為直接和間接兩種形式[37]。直接促進(jìn)作用包括：固氮、溶磷、解鉀和產(chǎn)生植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)激素等。間接促進(jìn)作用主要有對(duì)于植物病原菌的拮抗、產(chǎn)生ACC 脫氧酶、產(chǎn)生鐵載體和誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性等。如朱艷蕾[34]對(duì)銀砂槐的6 株內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行促生抗逆作用的研究，研究發(fā)現(xiàn)6 株菌種均具備溶磷、固氮以及產(chǎn)生IAA 和ACC 脫氨酶等不同的促生能力。陸藍(lán)翔等[38]對(duì)2 株樟樹(shù)組織中內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行分離鑒定，其中有11 株菌對(duì)樟樹(shù)病害病原菌具有拮抗效果，4 株菌具有解無(wú)機(jī)磷能力，2 株菌具有解有機(jī)磷能力，2 株菌具有產(chǎn)IAA 能力。田紅雨[39]通過(guò)調(diào)控內(nèi)生細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu)增強(qiáng)了桉樹(shù)抗青枯病的能力，其中提高黃桿菌屬Flavobacterium在桉樹(shù)體內(nèi)的比例可能是微生態(tài)調(diào)控的關(guān)鍵。降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌的對(duì)其的間接促生作用已有報(bào)道。2017年陳彧等[17]從降香黃檀葉片分離篩選了芽孢桿菌屬Bacillus的炭疽病拮抗細(xì)菌Y23，而對(duì)于降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌的直接促生作用目前研究卻很少。但是在降香黃檀的根際土壤中發(fā)現(xiàn)了大量的解鉀和固氮的細(xì)菌，土壤是內(nèi)生細(xì)菌的一個(gè)重要來(lái)源，這說(shuō)明降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌資源還有待進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)。

本研究由于降香黃檀樹(shù)種的特殊性及國(guó)家政策等原因，考慮到其內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)結(jié)果與實(shí)際情況的差距，可以選擇對(duì)正常生長(zhǎng)的降香黃檀直接取樣進(jìn)行研究。在后續(xù)的研究中可以對(duì)降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌的促生功能、內(nèi)生拮抗細(xì)菌的篩選及應(yīng)用等方面展開(kāi)研究。為充分利用降香黃檀的內(nèi)生細(xì)菌資源奠定理論基礎(chǔ)同時(shí)也為降香黃檀病害的無(wú)公害防治提供科學(xué)依據(jù)。

3.2 結(jié) 論

對(duì)降香黃檀的心材邊材理化性質(zhì)進(jìn)行分析，降香黃檀心材和邊材各項(xiàng)理化性質(zhì)均存在不同程度的差異。灰分含量、熱水提取物、pH 值、Ca 含量和K 含量上存在明顯差異。在對(duì)降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌的分布與木材理化因子的相關(guān)性分析中，含水率和pH 值對(duì)內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響最大，其中降香黃檀內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)多樣性受到木材因子pH 值的影響最大。

對(duì)降香黃檀心材邊材的內(nèi)生細(xì)菌HiSeq 高通量測(cè)序并優(yōu)化后，結(jié)果表明，降香黃檀心材和邊材內(nèi)生細(xì)菌種群資源豐富多樣，內(nèi)生細(xì)菌群落豐富度心材大于邊材。內(nèi)生細(xì)菌多樣性心材大于邊材，說(shuō)明降香黃檀心材和邊材的內(nèi)生細(xì)菌的入侵定殖也有差異性。