劉金錄，李生福，鐘衛(wèi)東，趙婧

(青海省民和縣畜牧獸醫(yī)站，民和 810800)

布魯氏桿菌病是由布魯氏桿菌引起的人、畜共患傳染病，牛、羊、豬均可發(fā)病。臨床表現(xiàn)為生殖器官和胎膜發(fā)炎，引起母畜流產(chǎn)，公畜睪丸炎、不育等。母畜流產(chǎn)后將大量布魯氏菌病隨著胎兒、胎水和胎衣排出，可通過污染的飼料、飲水經(jīng)消化道等途徑傳播。人主要通過與患病動物、污染的動物產(chǎn)品接觸而感染，感染后主要表現(xiàn)長期低熱、寒戰(zhàn)、盜汗、全身不適、關節(jié)炎、神經(jīng)痛、睪丸炎等，嚴重威脅畜牧業(yè)生產(chǎn)和人體健康，因此，國家將其列為法定傳染病，對種畜實施布病檢測，撲殺陽性畜[1]。近幾年來，部分地區(qū)牛羊布魯氏桿菌病呈高發(fā)、流行態(tài)勢，通過調運引起布病流行并傳染于養(yǎng)殖者，民和縣養(yǎng)殖者發(fā)病數(shù)例，引起業(yè)務主管部門的高度重視，投入大批的人力、物力、財力于2020年11月對民和縣12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的養(yǎng)殖場(大戶)飼養(yǎng)的6964只羊進行了布病檢測，對檢出的陽性羊進行了撲殺[2,3]。為了快速、準確地檢測布病，筆者對養(yǎng)殖者感染布病的養(yǎng)殖場(大戶)的羊群采用三種不同的血清學檢測法進行了對比檢測，篩選出適合縣級實驗室對布病檢測的最佳方法?，F(xiàn)將結果報告如下：

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1羊 被檢6964只羊為川口鎮(zhèn)、總堡鄉(xiāng)等12個鄉(xiāng)(鎮(zhèn))的養(yǎng)殖場(大戶)所飼養(yǎng)的小尾寒羊及其雜種羊、其他羊。

1.1.2血清 采集羊頸靜脈血，分離血清，2℃～8℃保存，待檢。

1.1.3診斷試劑 布病虎紅平板凝集抗原(批號20200915)、布病試管凝集抗原(批號20191030)、布病試管凝集試驗陰、陽性血清(批號20191030)由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)；布魯氏桿菌競爭ELISA抗體檢測試劑盒(批號EB022006)由廣州悅洋生物技術有限公司生產(chǎn)。

2 方法

2.1布魯氏桿菌病按GB/T18464-2018執(zhí)行[4]采用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、競爭ELISA試驗分別對同一樣品進行檢測。

2.1.1虎紅平板凝集試驗 取30μL的被檢血清與30μL的虎紅平板凝集抗原在一次性凹槽式布病檢測凝集板上混用，在5min內(nèi)出現(xiàn)凝集者，判為陽性。

2.1.2試管凝集試驗 被檢血清按1∶25、1∶ 50、1∶100、1∶200稀釋，加布病凝集抗原0.5mL，混用，置37℃溫箱反應24h,被檢血清1∶25出現(xiàn)“++”者判為可疑，1∶50及以上者出現(xiàn)“++”判為陽性。

2.1.3布魯氏桿菌競爭ELISA抗體檢測試驗 按布魯氏桿菌競爭ELISA抗體檢測試劑盒說明書執(zhí)行。

2.1.3.1樣品處理 將待檢血清、標準陽性血清和標準陰性血清均稀釋20倍，將單克隆抗體稀釋50倍。

2.1.3.2操作步驟 將稀釋好的待檢血清、標準陽性血清和標準陰性血清分別加入到抗原包被板中，每孔50μL，每孔再加單克隆抗體50μL,37℃孵育30min；洗板3次，拍干；每孔加入稀釋好的羊抗鼠酶標抗體100μL，37℃孵育30min；洗板3次，拍干；每孔加入底物A和底物B按1∶1混合的底物100μL,室溫避光靜置顯色15min；每孔加入50μL終止液50μL,反應終止后，15min內(nèi)用酶標儀測定OD450nm。

2.1.3.3結果判定 計算抑制率，抑制率(PI)=(陰性對照OD450nm-待測樣品OD450nm)/陰性對照OD450nmX100%，當樣品的PI≥30%時，為布魯氏桿菌病抗體陽性，當樣品的PI<30%時，為布魯氏桿菌病抗體陰性。

3 結果

3.1被檢血清中布氏桿菌特異性抗體檢測結果見下表。

表 被檢血清中布氏桿菌特異性抗體檢測結果

3.2檢測羊血清218份，檢出布病陽性17份，陽性率為7.8%，這些羊群中都存在引進種羊。

3.33種不同的血清學檢測方法檢測的結果符合率為100%。

4 分析與建議

4.13種不同的血清學檢測方法檢測的結果符合率為100%。布病虎紅平板凝集試驗快速、準確，可做大批量檢測；布病試管凝集試驗準確，檢測數(shù)量不受限制，但檢測時間長；布魯氏桿菌競爭ELISA抗體檢測準確，但價格貴，且適宜一次做92份樣品，單個或數(shù)份樣品會造成試劑浪費。因此，在人力財力匱乏的縣級實驗室大批量檢測時應選擇布病虎紅平板凝集試驗初檢，再用布病試管凝集試驗確診為最佳。

4.2這3種血清學檢測方法均為檢測布魯氏桿菌病抗體，只能表明血清學檢測陽性，無法分清免疫抗體還是感染抗體，對于無免疫羊群可按感染抗體處理，對于免疫羊群必須進行病原學診斷，因此，對于免疫羊群要加施免疫標識，以免誤診。

4.3 本次檢測出較多的布病陽性羊只并且較集中，經(jīng)調查是引進的種羊無法提供免疫、檢疫證明，屬于違法引進。建議養(yǎng)殖場(戶)要依法檢疫，引進種羊時必須對布病實施檢測，否則不得引進。

4.4由于本次大批量檢測是人感染布病后由衛(wèi)生部門反饋信息而知，故對養(yǎng)羊戶的羊群進行檢測進而檢出布病陽性羊，因此提示獸醫(yī)部門要把好檢疫關，對引進種羊及時檢測，淘汰陽性羊，平時做好布病檢測，由被動檢測轉為主動檢測，及時淘汰陽性羊。執(zhí)法部門要加大執(zhí)法力度，對違規(guī)調運者進行嚴格處罰。

4.5加大宣傳力度，使養(yǎng)殖者清楚掌握布病防控知識，布病是人畜共患病，應做好個人防護，發(fā)現(xiàn)流產(chǎn)胎兒須進行無害化處理，對污染的環(huán)境進行嚴格消毒。