于麗麗，任 威，陳 超，伏 瑤，賈文妍

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤之一，約占所有生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的30%[1]。近年來(lái)，其發(fā)病率呈逐漸增長(zhǎng)趨勢(shì)，且發(fā)病年齡也逐漸年輕化，嚴(yán)重危害女性的生命健康[2]。相關(guān)研究顯示，腫瘤的分期、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等是導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌患者病情進(jìn)展、預(yù)后不良的主要因素[3]。目前，對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者病情進(jìn)展及預(yù)后的評(píng)估主要依據(jù)影像學(xué)及病理檢查，缺乏特異性的標(biāo)志物。S100鈣結(jié)合蛋白A4(S100A4)是鈣離子結(jié)合家族成員之一，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種細(xì)胞進(jìn)程。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，S100A4在結(jié)直腸癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[4]。Huber等[5]報(bào)道顯示，Toll樣受體7(TLR7)在炎性疾病、組織纖維化疾病發(fā)展的過(guò)程中占有重要地位，但其與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系尚未明確。細(xì)胞核因子-κBp65(NF-κBp65)為腫瘤特異性的凋亡抑制因子，是近年研究的熱點(diǎn)[6]。本研究旨在探討S100A4、TLR7及NF-κBp65在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及對(duì)病情進(jìn)展和預(yù)后的評(píng)估作用，為臨床提高子宮內(nèi)膜癌診治效果提供新思路，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2015年3月—2018年3月中國(guó)人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院收治子宮內(nèi)膜癌患者的臨床資料。①納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)手術(shù)病理檢查確診為子宮內(nèi)膜癌[7]；均為初次確診的患者，納入研究前未接受放化療治療；無(wú)手術(shù)禁忌證。②排除標(biāo)準(zhǔn)：精神疾病或因語(yǔ)言障礙無(wú)法配合者；合并其他婦科惡性腫瘤或其他系統(tǒng)惡性腫瘤者；復(fù)發(fā)或已接受過(guò)其他治療的子宮內(nèi)膜癌患者。本研究最終選擇符合納入與排除標(biāo)準(zhǔn)的子宮內(nèi)膜癌78例，均進(jìn)行根治性手術(shù)治療，設(shè)為子宮內(nèi)膜癌組(共78份標(biāo)本)。子宮內(nèi)膜癌組年齡44～69(55.41±5.23)歲；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期[8]：Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅲ～Ⅳ期42例。選取同時(shí)期進(jìn)行手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜不典型增生85例設(shè)為對(duì)照組(共85份標(biāo)本)，年齡42～70(55.21±5.11)歲。兩組基線資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)執(zhí)行。

1.2方法 采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)S100A4、TLR7及NF-κBp65表達(dá)水平。兩組標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，每例均切片4張，厚度約4 μm。DAB顯色劑顯色，蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。操作步驟嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行。S100A4、TLR7及NF-κBp65兔多克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Epitomics公司。DAB顯色劑及配套試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。L.3回旋式切片機(jī)由北京手術(shù)器械廠提供。S100A4、TLR7、NF-κBp65陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)[9]：結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞百分比和染色強(qiáng)度判定結(jié)果，以子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野計(jì)算腺上皮細(xì)胞總數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，陽(yáng)性細(xì)胞百分比為0計(jì)0分，≤10%計(jì)1分，10%～25%計(jì)2分，25%～50%計(jì)3分，>50%計(jì)4分；細(xì)胞質(zhì)無(wú)染色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；兩項(xiàng)評(píng)分之和≤2分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。

1.3隨訪 對(duì)所有子宮內(nèi)膜癌患者隨訪3年，方式為門診復(fù)查或電話隨訪，至患者死亡或隨訪截止時(shí)間(2021年3月)結(jié)束隨訪，記錄患者的隨訪資料。

1.4觀察指標(biāo) 觀察兩組S100A4、TLR7及NF-κBp65表達(dá)情況，分析三者與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系。通過(guò)繪制受試者工作特征(ROC)曲線，計(jì)算曲線下面積(AUC)評(píng)價(jià)S100A4、TLR7、NF-κBp65對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后死亡的預(yù)測(cè)價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1S100A4、TLR7及NF-κBp65表達(dá)情況 子宮內(nèi)膜癌組S100A4、TLR7、NF-κBp65陽(yáng)性率均高于對(duì)照組(P<0.01)。見(jiàn)表1、圖1。

表1 子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜不典型增生組織兩組S100A4、TLR7及NF-κBp65表達(dá)情況[例(%)]

2.2S100A4、TLR7及NF-κBp65與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者S100A4、TLR7、NF-κBp65陽(yáng)性率分別高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05，P<0.01)；不同年齡、組織類型、組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)深度的子宮內(nèi)膜癌患者S100A4、TLR7、NF-κBp65表達(dá)情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 S100A4、TLR7及NF-κBp65與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系(例)

2.3不同S100A4、TLR7及NF-κBp65表達(dá)患者預(yù)后情況 整理3年的隨訪資料，78例子宮內(nèi)膜癌患者中死亡16例(20.51%)，生存62例(79.49%)。S100A4、TLR7、NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)患者的病死率分別高于S100A4、TLR7、NF-κBp65陰性表達(dá)患者(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 不同S100A4、TLR7及NF-κBp65表達(dá)子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后情況(例)

2.4S100A4、TLR7、NF-κBp65對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后死亡的預(yù)測(cè)價(jià)值 S100A4、TLR7、NF-κBp65及三者聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后死亡的AUC分別為0.958、0.754、0.832及0.966，以三者聯(lián)合檢測(cè)最大。三者聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后死亡的敏感度、特異度高于S100A4、TLR7及NF-κBp65單一檢測(cè)(P<0.05)。見(jiàn)表4、圖2。

表4 S100A4、TLR7、NF-κBp65對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后死亡的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率僅次于宮頸癌，居我國(guó)女性生殖道惡性腫瘤的第二位[10]。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制仍未完全清楚，提高其診治水平對(duì)保障女性生命健康意義重大。隨著分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)的發(fā)展，有學(xué)者認(rèn)為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生可能與癌基因、抑癌基因的異常表達(dá)有關(guān)[11]。因此，進(jìn)一步分析子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制，尋找高敏感度的腫瘤標(biāo)志物可提高子宮內(nèi)膜癌的早期診斷率，有利于盡早對(duì)患者進(jìn)行針對(duì)性治療措施，降低病死率。S100A4是一種多肽蛋白，分子量為11.5 kD，由101個(gè)氨基酸組成[12]。國(guó)外學(xué)者報(bào)道，S100A4可抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)惡性腫瘤增殖，影響細(xì)胞骨架的重新排列，有利于促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，S100A4在卵巢癌中呈正向調(diào)節(jié)作用，能夠影響患者的預(yù)后[13]?？梢酝茰y(cè)S100A4對(duì)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展也可能具相同的作用。但是，國(guó)內(nèi)外關(guān)于S100A4蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況，以及與患者預(yù)后關(guān)系的研究較少。本研究采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌及子宮內(nèi)膜不典型增生組織中S100A4、TLR7、NF-κBp65表達(dá)情況。研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組S100A4、TLR7、NF-κBp65陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，這一研究結(jié)果與Hua等[14]、Li等[15]的報(bào)道相一致。

本研究還發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者S100A4、TLR7、NF-κBp65陽(yáng)性率更高，且S100A4、TLR7、NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)患者病死率也更高。隨著FIGO分期的升高及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，S100A4、TLR7、NF-κBp65陽(yáng)性率也會(huì)逐漸增高。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，S100A4在正常乳腺、結(jié)腸等組織中無(wú)表達(dá)，但在乳腺癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中均存在高表達(dá)狀態(tài)，認(rèn)為S100A4與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，且可作為評(píng)估患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[16]。TLR7作為Toll樣受體的重要成員，廣泛分布于免疫細(xì)胞中，參與免疫及炎癥反應(yīng)。近年來(lái)有研究指出，在卵巢癌、宮頸癌等惡性腫瘤中，均存在TLR7的異常表達(dá)[17]。Moro等[18]研究發(fā)現(xiàn)，與惡性腫瘤組織比較，正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜正常增生組織中TLR7的表達(dá)量明顯減少；但在子宮內(nèi)膜不典型增生組織中TLR7陽(yáng)性率高于子宮內(nèi)膜正常增生組織。因此推測(cè)TLR7在子宮內(nèi)膜不典型增生轉(zhuǎn)變?yōu)樽訉m內(nèi)膜癌的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

NF-κBp65是具有多向調(diào)節(jié)功能的轉(zhuǎn)錄因子，可通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解及腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等途徑促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展[19]。周驄等[20]報(bào)道顯示，NF-κBp65在口腔鱗癌患者中陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)75%，顯著高于正常口腔黏膜組織。也有研究顯示，NF-κBp65在頸部惡性腫瘤、宮頸癌、乳腺癌等組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均較高，且在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、分化中起著重要作用[21]，因此NF-κBp65有望成為子宮內(nèi)膜癌的診斷標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)。

復(fù)習(xí)國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，S100A4、TLR7及NF-κBp65聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的研究較少。本研究通過(guò)繪制ROC曲線，發(fā)現(xiàn)S100A4、TLR7及NF-κBp65聯(lián)合檢測(cè)的AUC最大。另外，三者聯(lián)合檢測(cè)的敏感度、特異度分別為90.63%、92.59%，顯著高于S100A4、TLR7及NF-κBp65單一檢測(cè)?？梢?jiàn)三者聯(lián)合檢測(cè)可用于早期診斷子宮內(nèi)膜癌，還能評(píng)估患者預(yù)后轉(zhuǎn)歸。

綜上所述，S100A4、TLR7及NF-κBp65參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，在腫瘤侵襲過(guò)程中發(fā)揮重要作用。三者聯(lián)合檢測(cè)可提高子宮內(nèi)膜癌的早期診斷率，還能判斷患者病情進(jìn)展情況，并對(duì)其預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。