高海兵，牛彩紅，趙志宏，霍小琴，畢宇

（山西省陽泉市第一人民醫(yī)院，山西 陽泉 045000）

0 引言

支氣管肺炎是累及支氣管壁和肺泡的炎癥，為兒童時(shí)期最常見的肺炎，2歲以內(nèi)兒童多發(fā)。一年四季均可發(fā)病，北方多發(fā)生于冬春寒冷季節(jié)及氣候驟變時(shí)。兒童因年齡因素造成溝通困難，加之病情變化速度快，而且由于兒童自身免疫系統(tǒng)的不完善及嬰幼兒的早期免疫特點(diǎn)，過早過度使用抗生素會(huì)對兒童免疫系統(tǒng)造成不必要的損傷，所以快速、準(zhǔn)確判斷感染類型應(yīng)對兒科上呼吸道感染性尤其重要。隨著醫(yī)療水平的發(fā)展與提升，呼吸道病原體九聯(lián)檢、細(xì)胞因子測定逐漸應(yīng)用于該病癥的檢測中，本文對我院兒科85例支氣管肺炎病例的呼吸九聯(lián)檢和細(xì)胞因子檢測進(jìn)行回顧性分析，以期得到對感染的早期鑒別。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2019年10月至2020年12月在我院兒科收治的診斷為支氣管肺炎患兒85例作為觀察組，男46例，女39例，年齡0.5-10歲，平均（6.42±1.94）歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)以臨床有發(fā)熱、咳嗽、呼吸急促的癥狀。肺部聽診聞及中、細(xì)濕啰音和（或）胸部影像學(xué)有肺炎的改變可診斷為支氣管肺炎。對照組為同期健康體檢兒童30例，男15例，女15例，年齡1-10歲，平均年齡（6.35±2.02）歲，近期無感染病史、無過敏及免疫相關(guān)疾病，兩組年齡的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑

呼吸九聯(lián)檢采用間接免疫熒光法，西班牙VIRCELL.S.L.公司九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒，OLYMPUS-BX41型熒光顯微鏡；細(xì)胞因子檢測采用美國貝克曼公司FC-500流式細(xì)胞分析儀，運(yùn)用流式熒光法，使用江西賽基生物技術(shù)有限公司TH1/TH2/TH17亞群檢測配套試劑。

1.2.2 分析方法

早晨空腹靜脈采集血液6mL，分別加入2支分離膠試管中，靜置20 min，1620g離心15min，取血清檢測，如不能立即檢測，保存于-20℃冰箱中，檢測前解凍（不可反復(fù)凍融）。將血清按說明書稀釋后加入熒光片中，孵育，洗滌，加熒光二抗，封片，在熒光顯微鏡下觀察，綠色熒光細(xì)胞為陽性細(xì)胞，200倍下每個(gè)視野＞5個(gè)陽性細(xì)胞為標(biāo)本陽性，以此判斷肺炎衣原體（CP）IgM抗體、肺炎支原體（MP）IgM抗體、嗜肺軍團(tuán)菌（LP）IgM抗體、腺病毒（ADV）IgM抗體、Q熱立克次體（COX）IgM抗體、人呼吸道合胞病毒（HRSV）IgM抗體、A型流感病毒（AIV）IgM抗體、B型流感病毒（BIV）IgM抗體、人副流感病毒（HPIV）IgM抗體是否陽性。吸取血清25ul加入試管中，加入離心后配制的捕獲微球25ul、熒光抗體25ul混勻，避光孵育2.5h后，加入1mL生理鹽水，200g5分鐘離心，棄去上清液，加入3mL生理鹽水，上機(jī)檢測細(xì)胞因子，在流式細(xì)胞儀測定出熒光強(qiáng)度，利用美國BD公司FCAP Array分析軟件中得出細(xì)胞因子白介素6（IL-6）、干擾素γ（IFN -γ）含量。

1.3 觀察指標(biāo)

呼吸道九種病原體抗體至少有一種陽性表達(dá)即為陽性。IL-6按試劑盒說明推薦陽性臨檢值為20pg/mL,所以設(shè)＞20pg/mL為陽性；IFN -γ按試劑盒說明推薦陽性臨檢值為17.3pg/mL,所 以 設(shè)＞17.3pg/mL為 陽 性，IL-6和/或IFN -γ有一種陽性表達(dá)即為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)數(shù)資料采用以例數(shù)百分比(%)表示，組間比較用c2和Fisher精確概率法分析，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組85例（由于存在雙重或多重混合感染，表中例數(shù)和占比存在重復(fù)計(jì)數(shù)）患兒中，7例呼吸九聯(lián)檢陰性，占8.2%；陽性結(jié)果中占比最高為肺炎支原體抗體，占44.7%，其次為B型流感病毒抗體，占42.4%，最少為嗜肺軍團(tuán)菌抗體，未測出。見表1。

表1 85例支氣管炎呼吸九聯(lián)檢占比

單純檢測呼吸九聯(lián)檢敏感度為91.76%，特異度為76.67，正確率為87.83%；單純檢測IL-6+IFN-γ敏感度為83.53%，特異度為96.67，正確率為86.96% ；聯(lián)合檢測敏感度97.65%、特異度76.67%、正確率92.17%。見表2、表3。

在85例支氣管肺炎患兒中，有34例進(jìn)行了≥3次IL-6+IFN-γ檢測,將其分為重癥組（11例）和普通組（23例），標(biāo)準(zhǔn)參照支氣管肺炎診療規(guī)范，重癥組為支氣管肺炎患者病情危重，表現(xiàn)為除呼吸系統(tǒng)改變外，還包括循環(huán)、神經(jīng)、消化等系統(tǒng)功能障礙；普通組為支氣管肺炎主要癥狀患者。按其中一項(xiàng)或兩項(xiàng)檢測連續(xù)升高即為上升趨勢，連續(xù)下降即為下降趨勢。重癥組11例中9例呈上升趨勢，2例無規(guī)律，無下降趨勢；普通組中17例呈下降趨勢，1例呈升高趨勢，5例無規(guī)律，兩組比較P＜0.01,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表4。

表2 呼吸道九聯(lián)檢、IL-6+IFN-γ與臨床診斷比較（例）

表3 呼吸道九聯(lián)檢、IL-6+IFN-γ、聯(lián)合檢測指標(biāo)比較

表4 34例支氣管肺炎 IL6 + IFN-γ檢測結(jié)果

3 討論

小兒支氣管肺炎是累及支氣管壁和肺泡的炎癥，為兒童時(shí)期最常見的肺炎，2歲以內(nèi)兒童多發(fā)，一年四季均可發(fā)病，主要由各種病原體引起，常見為支原體、病毒、細(xì)菌、衣原體等感染，發(fā)病后會(huì)引發(fā)機(jī)體內(nèi)多種細(xì)胞因子升高，而導(dǎo)致免疫功能下降，不利于患兒的健康成長[1]。另外由于小兒支氣管管腔狹窄，肺彈力組織發(fā)育差，發(fā)病后分泌物會(huì)增多，阻塞肺部，導(dǎo)致通氣功能受限，引起呼吸困難、氣促等癥狀[2-3]，易造成肺功能障礙。支氣管肺炎感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)為病原體培養(yǎng)，但由于兒童取樣困難，易感菌較多、培養(yǎng)陽性率低、時(shí)間長、特殊病原體普通醫(yī)院不易開展，具有一定的漏診、誤診率[4-5]等因素，嚴(yán)重制約該疾病的早期診斷與治療。呼吸九聯(lián)檢為測定血清中病原體IgM抗體，通常在感染后1～2周出現(xiàn)，2～4周達(dá)高峰，是急性感染早期敏感的生物學(xué)指標(biāo)。IL-6、IFN-γ是TH1/TH2細(xì)胞分泌介導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答效應(yīng)的促炎因子，IL-6可促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞的增殖分化，是輔助診斷細(xì)菌感染的有效指標(biāo)；IFN-γ可激活巨噬細(xì)胞，具有抗病毒及促進(jìn)主要組織相容復(fù)合體分子表達(dá)和抗原提呈作用，是病毒感染的輔助診斷指標(biāo)。IL-6和/或IFN-γ升高提示機(jī)體存在炎癥反應(yīng)。

本研究發(fā)現(xiàn)觀察組85例支氣管肺炎患兒呼吸九聯(lián)檢肺炎支原體感染占比最高，達(dá)44.7%，依次為B型流感病毒、人副流感病毒、A型流感病毒、腺病毒、人呼吸道合胞病毒、肺炎衣原體、Q熱立克次體、嗜肺軍團(tuán)菌，與賈紅麗、王鳳美[6-7]研究相一致，說明支氣管肺炎患兒肺炎支原體感染最高，其次為B型流感病毒。觀察組中有7例呈陰性，占8.2%，分析原因?yàn)楹粑谰怕?lián)檢均檢測病原體IgM抗體，其在感染2～4周內(nèi)達(dá)到峰值，當(dāng)在峰值前或峰值后檢測時(shí)，由于抗體濃度較低或者檢測試劑靈敏度低、檢測下限較高等所致。所以這與患兒感染后出現(xiàn)IgM的時(shí)間段和采血時(shí)間節(jié)點(diǎn)、試劑等相關(guān)，提示檢測時(shí)，應(yīng)在發(fā)病后2～4周內(nèi)采血分析，并注意試劑質(zhì)量，避免出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象。

對支氣管肺炎患兒單純使用呼吸九聯(lián)檢檢測,其敏感度為91.76%，特異度為76.67%,正確率為87.83%。IL-6+IFN-γ檢測敏感度為83.53%，特異度為96.67，正確率為86.96%。兩者相比呼吸九聯(lián)檢敏感度大于IL-6+IFN-γ檢測，這是由于IL-6主要對細(xì)菌感染敏感，而IFN-γ對病毒感染敏感，對支原體、衣原體等病原菌敏感性較差原因。但特異度呼吸九聯(lián)檢遠(yuǎn)低于IL-6+IFN-γ檢測。提示臨床在支氣管肺炎輔助診斷時(shí)，呼吸九聯(lián)檢優(yōu)于IL-6 + IFN-γ檢測，但誤診率高于IL-6 + IFN-γ檢測。篩查時(shí)IL-6 + IFN-γ檢測優(yōu)于呼吸九聯(lián)檢。兩者聯(lián)合檢測其敏感度和正確率分別達(dá)97.65%、92.17%，高于周燕等[8]研究的呼吸九聯(lián)檢與痰培養(yǎng)聯(lián)合檢測。三種檢測方法比較敏感度P＜0.01,特異度P＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但正確度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示呼吸九聯(lián)檢、IL-6+IFN-γ聯(lián)合檢測可有效提高支氣管肺炎患兒病原菌感染類型的準(zhǔn)確度，對疾病診斷具有良好的指導(dǎo)意義，但特異度欠佳，三種方法比較，正確度無差異。

研究結(jié)果顯示，支氣管肺炎重癥組有9例IL-6+IFN-γ檢測呈上升趨勢，占重癥組81.8%,普通組有17例呈下降趨勢，占73.9%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析IL6+IFN-γ檢測呈上升趨勢變化者重癥率明顯高于下降趨勢者。提示支氣管肺炎時(shí)，IL-6或/和IFN-γ升高，病情有加重傾向，而IL-6或/和IFN-γ下降時(shí)，病情減輕或轉(zhuǎn)歸。

綜上所述，呼吸道九聯(lián)檢聯(lián)合IL-6、IFN -γ測定在支氣管肺炎鑒別診斷中有重要意義，有助于臨床醫(yī)生全面分析病原菌類型，判斷疾病嚴(yán)重程度，指導(dǎo)醫(yī)生及早干預(yù)，為臨床對該病的研究、治療、預(yù)后提供客觀的參考依據(jù)。